MA-5的新用途及猪精液常温保存稀释液制造技术

本发明专利技术公开了MA

【技术实现步骤摘要】
MA
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5的新用途及猪精液常温保存稀释液


[0001]本专利技术属于生物繁殖
，具体涉及MA
‑
5的新用途及猪精液常温保存稀释液。

技术介绍

[0002]在我国，猪的人工授精技术起步较晚。在20世纪50年代开始人工授精试验，60年代开始推广应用，但是随着改革开放，引进品种增多，引进品种发情不明显，不能准确进行发情鉴定，难以掌握输精时间，造成母猪多次配种不孕、受胎率下降、产仔数降低，这些人工授精过程中出现的问题阻碍人工授精技术的推广。20世纪90年代，随着人工授精技术的进一步发展，人工授精技术逐渐被大型规模化养猪场认可并推广，并且随着世界贸易的发展，国外的大批猪肉涌入我国，对我国养猪业的发展造成了巨大的冲击。面对日益激烈的市场竞争，就要降低成本，饲养优良品种，提高产品的竞争力，人工授精技术以其独特的优势逐渐在全国推广。人工授精技术对公猪精液的品质要求较高，精液保存不规范也会影响人工授精效果。
[0003]精液的保存分为常温保存(17℃)、低温保存(4℃)和冷冻保存(
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196℃)。由于猪精子结构的特性，即猪精子中胆固醇/磷脂的比例低、不饱和脂肪酸的比例高，使得猪精子对低温冷打击与活性氧自由基非常敏感。因此在猪精液的保存过程中，通常采用常温保存方法。尽管“猪常温精液”(GB23238
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2009)可以在活力60％的情况下保存超过72小时的时间，但对于猪集约化、规模化、专业化生产而言，该活力水平仍无法满足目前实际生产的需要。同时延长猪精液的保存时间也有助于进一步推广猪人工受精技术，但随着保存时间的延长，猪精子产生的活性氧自由基会逐渐增多，而过量的活性氧自由基会损伤精子，导致精子活率等降低，影响保存品质。
[0004]在猪精液常温保存过程中会受到温度、渗透压、pH、稀释倍数、抗氧化剂、缓冲剂、细菌等多种因素的影响。而随着保存时间的延长引起精液质量不断下降的两大因素就是活性氧和微生物，过量的活性氧会对精子的结构和功能产生损伤，而微生物的滋生会大量消耗精子的营养物质，并增加猪生殖机能降低的风险。目前国内外研制的稀释液配方主要有以下几种：柠檬酸钠
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糖类、Tris
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柠檬酸
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糖类和EDTA二钠
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柠檬酸钠
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糖类。不同配方的稀释液在具体成分组成上存在差异，对精子的保护效果也不相同。商品化Modena稀释液相比于其他稀释液在一定程度上延长了精液的保存时间，但Modena稀释液中缺乏抗氧化物质，对于精液保存过程中精子产生的活性氧自由基不能很好的清除，不利于精液的保存。此外，在保存过程中，精子会不断地消耗能量，当能量供应不足时，精子会迅速死亡。
[0005]线粒体酸5[Mitochonic acid
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5(MA
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5)]是一种新合成的植物激素吲哚
‑3‑
乙酸衍生物，其英文全称为(4
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(2,4
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difluorophenyl)
‑2‑
(1H
‑
indole
‑3‑
yl)
‑4‑
oxobutanoic acid。目前，MA
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5主要应用于细胞凋亡和肾脏疾病中，对于其在猪精液常温保存中的应用，尚无现有技术进行揭示过。

技术实现思路

[0006]本专利技术以满足良种公畜站在扩大对周边企业、养殖户(场)的人工授精辐射范围中的精液保存需求为出发点，通过对稀释液中能量供应和抗氧化成分的筛选和配比优化，研制出能高效保存猪精液(在常温下保存一周以上)的稀释液配方，与商用稀释液(例如，Modena稀释液)相比，可以更好的克服采精时限及输精地点远近不同等实际情况对充分发挥良种公猪利用率、实现良种资源共享的不利影响。
[0007]本专利技术的技术方案如下：
[0008]MA
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5在猪精液常温保存中的应用。优选地，所述应用包括在提高精液保存时长、精子活率、精子活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体膜电位、ATP含量以及降低精子保存后的ROS水平中的应用。
[0009]一种猪精液常温保存稀释液，由如下成分组成：25.0～30.0g/L的D
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葡萄糖、2.0～2.7g/L的EDTA二钠、6.5～7.5g/L的柠檬酸钠、2.5～3.5g/L的柠檬酸、0.5～1.5g/L的碳酸氢钠、5.0～6.0g/L的Tris、50～150万IU/L的青霉素、50～150万IU/L的链霉素、20～60万IU/L的多黏菌素和0.01～10nmol/L的MA
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5。
[0010]在具体的实施方案中，所述猪精液常温保存稀释液，由如下成分组成：27.5g/L的D
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葡萄糖、2.35g/L的EDTA二钠、6.9g/L的柠檬酸钠、2.9g/L的柠檬酸、1.0g/L的碳酸氢钠、5.65g/L的Tris、100万IU/L的青霉素、100万IU/L的链霉素、40万IU/L的多黏菌素和0.01nmol/L的MA
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5。
[0011]在具体的实施方案中，所述猪精液常温保存稀释液，由如下成分组成：27.5g/L的D
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葡萄糖、2.35g/L的EDTA二钠、6.9g/L的柠檬酸钠、2.9g/L的柠檬酸、1.0g/L的碳酸氢钠、5.65g/L的Tris、100万IU/L的青霉素、100万IU/L的链霉素、40万IU/L的多黏菌素和0.1nmol/L的MA
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5。
[0012]在具体的实施方案中，所述猪精液常温保存稀释液，由如下成分组成：27.5g/L的D
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葡萄糖、2.35g/L的EDTA二钠、6.9g/L的柠檬酸钠、2.9g/L的柠檬酸、1.0g/L的碳酸氢钠、5.65g/L的Tris、100万IU/L的青霉素、100万IU/L的链霉素、40万IU/L的多黏菌素和1nmol/L的MA
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5。
[0013]在具体的实施方案中，所述猪精液常温保存稀释液，由如下成分组成：27.5g/L的D
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葡萄糖、2.35g/L的EDTA二钠、6.9g/L的柠檬酸钠、2.9g/L的柠檬酸、1.0g/L的碳酸氢钠、5.65g/L的Tris、100万IU/L的青霉素、100万IU/L的链霉素、40万IU/L的多黏菌素和10nmol/L的MA
‑
5。
[0014]一种猪精液常温保存方法，包括以下步骤：
[0015]将上述常温保存稀释液与猪精液混合，置于15～20℃下进行保存。
[0016]上述猪精液常温保存方法中，所述混合具体包括以下步骤：将采集的新鲜猪精液采用所述常温保存稀释液进行稀释，并将猪精子的密度稀释至1.5～2.0
×
108个/mL。
[0017]上述猪精液常温保存方法中，在进行混合之前本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.MA
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5在猪精液常温保存中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用包括在提高精液保存时长、精子活率、精子活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体膜电位、ATP含量以及降低精子保存后的ROS水平中的应用。3.一种猪精液常温保存稀释液，其特征在于，由如下成分组成：25.0～30.0g/L的D
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葡萄糖、2.0～2.7g/L的EDTA二钠、6.5～7.5g/L的柠檬酸钠、2.5～3.5g/L的柠檬酸、0.5～1.5g/L的碳酸氢钠、5.0～6.0g/L的Tris、50～150万IU/L的青霉素、50～150万IU/L的链霉素、20～60万IU/L的多黏菌素和0.01～10nmol/L的MA
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5。4.根据权利要求3所述的猪精液常温保存稀释液，其特征在于，由如下成分组成：27.5g/L的D
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葡萄糖、2.35g/L的EDTA二钠、6.9g/L的柠檬酸钠、2.9g/L的柠檬酸、1.0g/L的碳酸氢钠、5.65g/L的Tris、100万IU/L的青霉素、100万IU/...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱振东，闵令江，王如愿，王善鹏，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：