一种改进的甘蔗宿根矮化病菌PCR检测方法技术

本发明专利技术提供一种改进的甘蔗宿根矮化病菌ＰＣＲ检测方法，根据ＲＳＤ病原细菌Ｌｘｘ　１６Ｓ－２３ＳｒＤＮＡ基因间隔区核苷酸序列设计了一对特异引物Ｌｘｘ１／Ｌｘｘ２，用改进法提取蔗汁总ＤＮＡ后，采用ＰＣＲ扩增的方法，检测甘蔗宿根矮化病菌；该方法克服了现有检测技术中的缺点，提供了一种快速、稳定、准确、高灵敏度、特异性强的甘蔗宿根矮化病菌ＰＣＲ检测方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物保护领域，尤其是一种改进的甘蔗宿根矮化病菌PCR检测方法。
技术介绍
甘蔗宿根矮化病(mtoon stuning disease，RSD)是普遍存在于所有植蔗地区的一种世界性的重要病害。此病由一种棒杆菌属细菌(07^^""^砂//8油5 .矽//)寄生于蔗株的维管束中引起，主要通过甘蔗种苗传播蔓延，且传播性极强。蔗株染病后变矮，蔗茎变细，生长迟滞，宿根发株少，病害造成损失的程度随宿根年数的增加而增加，一般减产10 30%，干旱缺水时可达60%以上，还可导致品种退化。由于甘蔗(RSD)无明显的外部和内部症状，传统诊断方法极其困难，导致病害任意传播、扩展蔓延，对甘蔗生产危害极大。防止该病害的发生和蔓延，最经济有效的措施就是种植脱毒种苗，随着甘蔗健康种苗在甘庶生产上的运用，迫切需要建立起一种能快速、稳定、准确、高灵敏度、特异性强检观!lRSD的方法。目前我国对甘蔗宿根矮化病菌的检测方法主要有电镜负染检测法(EM)、血清检测法(包括间接酶联免疫吸附法及组织斑点免疫检测法)和PCR检测法。但电镜负染检测需要昂贵的仪器，不适合田间大批量样品的检测；血清检测法灵敏度高，但RSD本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种改进的甘蔗宿根矮化病菌ＰＣＲ检测方法，其特征在于包括以下步骤：　１）引物设计：　根据已报道的ＲＳＤ病原细菌Ｌｘｘ　１６Ｓ－２３ＳｒＤＮＡ基因间隔区核苷酸序列设计了一对特异引物Ｌｘｘ１／Ｌｘｘ２，扩增的目的片段大小为４３８ｂｐ，引 物序列如下　Ｌｘｘ１：５′－ＣＣＧＡＡＧＴＧＡＧＣＡＧＡＴＴＧＡＣＣ－３′，　Ｌｘｘ２：５′－ＡＣＣＣＴＧＴＧＴＴＧＴＴＴＴＣＡＡＣＧ－３；　２）样品蔗汁采集：　每个样本随机取６条蔗茎，每条蔗茎截取中下部茎节，用砍刀切成７ｃｍ左 右长，再用钳子挤压２５ｍｌ左右的甘蔗汁于５０ｍｌ离心管内混匀，放于－２０℃冰箱保存待用，每取一个样品...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李文凤，黄应昆，王晓燕，卢文洁，罗志明，
申请(专利权)人：云南省农业科学院甘蔗研究所，
类型：发明
国别省市：53[中国|云南]