一种粪便样本中活泼瘤胃球菌的非核酸提取式qPCR检测方法技术

本发明专利技术公开了一种粪便样本中活泼瘤胃球菌的非核酸提取式qPCR检测方法，免核酸提取步骤，并优化了包括扩增酶、活泼瘤胃球菌荧光定量PCR反应体系和反应条件，可以检测出活泼瘤胃球菌，用于快速、准确地检测肠样本中的活泼瘤胃球菌。瘤胃球菌。瘤胃球菌。

【技术实现步骤摘要】
一种粪便样本中活泼瘤胃球菌的非核酸提取式qPCR检测方法


[0001]本专利技术涉及一种检测技术，尤其是一种肠道菌群的qPCR检测，属于微生物检验


技术介绍

[0002]活泼瘤胃球菌(Ruminococcus gnavus)隶属于瘤胃球菌科瘤胃球菌属，可在新生儿出生后的第3天、第4天在体内定植，并可在90％以上成年人的粪便样本中检出。目前，R.gnavus已被证实与宿主代谢健康密切相关，它可以降解结肠黏蛋白，并分泌一种具有鼠李糖主链和葡萄糖侧链的复杂葡糖鼠李聚糖多糖，有效诱导树突细胞分泌炎性细胞因子TNFα，是诱发克罗恩病(Crohn's disease)的重要原因之一。此外，也有大量研究表明R.gnavus会促进致病菌的共生、破坏肠道粘膜免疫环境、影响葡萄糖稳态及胰岛素敏感性，与人类炎症性肠病、前列腺癌、代谢综合征、肥胖、2型糖尿病、心血管疾病、衰弱、营养不良、COVID
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19感染等相关。因此，通过对活泼瘤胃球菌的检测，可以有效预测健康水平，以便进行针对性医护。
[0003]R.gnavus的丰度与机体健本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种粪便样本中活泼瘤胃球菌的非核酸提取式qPCR检测方法，其特征在于：包括以下步骤：1)使用粪便菌群核酸释放技术：取适量粪便，加入10倍体积PBS缓冲液，充分震荡摇匀，使细菌分散破损；2)通过
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80度冻存，极大保留菌群，随后迅速加热致100度3分钟，灭活大部分病原体以及酶的活性；也通过急剧的温度变化，使细菌破裂，使核酸完全释放；3)通过3000g离心5分钟去除研磨珠和杂质等，使核酸保留于上清中；4)取上清液作为模板，配置反应体系，使用qPCR方法进行检测，20μl体系包括：模板(上清液)2μl、扩增酶0.5μl、MgCl
2 5.5mM、dNTPs0.4mM、SYBR 1μl、引物、水；用于检测粪便样本中的活泼瘤胃球菌16srDNA检测的引物序列为：正向引物(SEQ ID NO:1)为5
′‑
ATGGCATGGATGATCGTATC
‑3′
，反向引物(SEQ ID NO:2)为5
′‑
TTATTCTTCCTTTGCTTTCAGCAG
‑3′
。2.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨沛，徐婷，庄添驰，曹薇，季明辉，顾大勇，赵彦杰，顾逸博，赵文武，许勤，孙涛，李宁，刘云，张展，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：