一种柑橘属植物遗传转化体系的构建方法技术

本发明专利技术提供了一种柑橘属植物遗传转化体系的构建方法，属于遗传转化技术领域。一种柑橘属植物遗传转化体系的构建方法，将含有目标基因的重组载体转化至农杆菌感受态中，得到重组农杆菌；将柑橘属植物枝条或叶片的基部置于所述重组农杆菌的菌液中，在真空状态下静置15～30min，得到感染农杆菌的枝条或叶片，然后将枝条或叶片进行黑暗处理2d，然后将所述感染农杆菌的枝条插入基质中育苗，得到转化目标基因的柑橘属植物。采用本发明专利技术提供的构建方法使柑橘枝条易抽芽长根，浸润转化率可达80％，叶片转化率达50％～80％。同时本发明专利技术提供的构建方法还具有效率高、成本低、操作简便，适合大规模应用。应用。应用。

【技术实现步骤摘要】
一种柑橘属植物遗传转化体系的构建方法


[0001]本专利技术属于遗传转化
，具体涉及一种柑橘属植物遗传转化体系的构建方法。

技术介绍

[0002]转基因技术是将外源基因人为地导入目的基因，通过改变其遗传物质，获得转基因植物，使其性状按人们的需求发生改变。现在转基因技术已经日趋成熟，根据转化原理可分为三大类，利用载体的转化系统、直接转化系统、种质转化系统。目前应用最多的就是农杆菌载体转化。
[0003]农杆菌是存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，在自然条件下感染大多数双子叶植物的受伤部位，并诱导产生冠痪瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，上面有一段T
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DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞，可将T
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DNA插入到植物基因组中。因此，农杆菌是一种天然的植物遗传转化体系。人们将目的基因插入到经过改造的T
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DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。但其整个转化过程耗时长，组培期间容易被细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种柑橘属植物遗传转化体系的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：将含有目标基因的重组载体转化至农杆菌感受态中，得到重组农杆菌；将柑橘属植物枝条或叶片的基部置于所述重组农杆菌的菌液中，在真空状态下静置15～30min，得到感染农杆菌的枝条或叶片；将所述感染农杆菌的枝条或叶片经黑暗处理，将黑暗培养后的枝条插入基质中育苗，得到转化目标基因的柑橘属植物。2.根据权利要求1所述柑橘属植物遗传转化体系的构建方法，其特征在于，将含有目标基因的重组载体转化至农杆菌感受态中的方法为将所述含有目标基因的重组载体与农杆菌感受态混合，依次经过冰浴、液氮浴、37℃水浴、冰浴后，在无抗生素的TY液体培养基中培养，收集菌体接种至含抗生素的TY培养基中进行筛选培养，挑取单菌落接种于TY培养基中扩大培养，得到重组农杆菌。3.根据权利要求1或2所述柑橘属植物遗传转化体系的构建方法，其特征在于，所述含有目标基因的重组载体包括以下至少一种：35S
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NbGH9b3质粒、1380
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pYAO
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cas 9质粒和1380
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pr1a
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SAMP
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HA质粒。4.根据权利要求3所述柑橘属植物遗传转化体系的构建方法，其特征在于，还包括对所述转化目标基因的柑橘属植物进行PCR检测验证；在PCR检测验证时，所述35S
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NbGH9b3质粒中NbGH9b3基因的检测引物对为核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示的反向引物；所述1380
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pYAO
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cas 9质粒中cas 9基因的检测引物对为核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：王敏，马海杰，郑伟尉，黄素亚，孟心月，刘宁鸽，李杭飞，贾昭辉，姜黄黄，顾淼峰，孙德铭，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：