小龙虾胚胎染色体的制备方法技术

本发明专利技术属于动物细胞学实验技术领域，具体公开了一种小龙虾胚胎染色体的制备方法，包括如下步骤：取无节幼体期的小龙虾胚胎，浸于秋水仙素溶液中，在恒温培养箱中培养，离心后弃上清，得到细胞团沉淀；再经过低渗、固定、制片、喷片、染色、镜检，即得到小龙虾胚胎染色体。本发明专利技术首次采用无节幼体期的小龙虾胚胎制备染色体，克服了取样数量的限制，同时不用解剖亲本虾，而且染色体分裂相干净，分裂相数目较多，染色体数目形态清晰，有利于染色体的组型和染色体的遗传分析；操作简单，制作周期短，成本低廉。最终，通过该方法能获得小龙虾清晰的体细胞染色体数为188条。胞染色体数为188条。胞染色体数为188条。

【技术实现步骤摘要】
小龙虾胚胎染色体的制备方法


[0001]本专利技术属于动物细胞实验
，提供了一种小龙虾胚胎染色体的制备方法。

技术介绍

[0002]小龙虾(Procambarus clarkia)，学名克氏原螯虾，在分类上属于节肢动物门、甲壳纲、十足目、爬行亚目、螯虾科、原螯虾属。该虾属于广温性虾类，适应力强，繁殖率高，食性杂，生长快，离水数小时也不会死亡。虾肉味细嫩，营养丰富，富含人体必需的8种氨基酸，而脂肪含量较低，并含较多的原肌球蛋白和副肌球蛋白。深受消费者喜爱，出口量也日渐增加，销售和收购价格不断上升，养殖前景和效益较好。目前市场上的小龙虾由于自繁自育、近亲交配等问题日益突出，导致小个头小龙虾越来越多，头大肉少等问题日益突出。为了进一步研究该虾的遗传育种以及品种改良，对小龙虾的染色体进行研究非常有必要。通过把小龙虾的染色体研究清楚，进而可以在染色体操作水平上改良小龙虾。
[0003]由于小龙虾(Procambarus clarkii)的染色体形态较小、数目较多，以往制备小龙虾染色体的方法主要用杀虾取精巢或卵巢做染色体或者是杀虾取触角腺做体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小龙虾胚胎染色体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)前期处理：取无节幼体期的小龙虾胚胎，浸于秋水仙素溶液中，在恒温培养箱中培养，离心后弃上清，得到细胞团沉淀；(2)低渗：去净秋水仙素溶液，进行低渗处理，移去低渗液；(3)固定：将步骤(2)后得到的细胞团进行预固定、后固定；(4)制片：取步骤(3)后固定得到的胚胎于离心管中，并加入链酶蛋白酶进行消化，再加入醋酸溶液进行软化，撕掉胚胎的受精膜，再捣碎使胚胎细胞解离分散，离心后倒去上层的液体，加入固定液后用吸管吹打均匀，得到细胞悬液；(5)喷片：将预冷的载玻片倾斜放置，用滴管吸取步骤(4)得到的所述细胞悬液，垂直喷到载玻片上，在酒精灯外焰上烘烤后，置于空气中干燥；(6)染色：用吉姆萨染液对步骤(5)得到的附着有染色体的载玻片进行染色；(7)镜检：在显微镜下进行观察和拍照。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述秋水仙素溶液的浓度为500mg/mL。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述恒温培养箱的温度为22
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25℃，培育时间为3
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4h；所述离心的转速为1000
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1100r/min，时间为5
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10min。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述低渗处理是用0.75％KCl于37℃低渗处理20
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30min。5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘少军，王余德，刘武霞，覃钦博，罗凯坤，王冬武，田欣，
申请(专利权)人：湖南岳麓山水产育种科技有限公司，
类型：发明
国别省市：