一种罗非鱼无乳链球菌卵黄抗体的制备及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种罗非鱼无乳链球菌卵黄抗体的制备及应用，涉及生物技术及应用领域，其技术方案要点是，包括以下步骤方法:S1:制备无乳链球菌抗原并灭活；S2：无乳链球菌抗原的灭活；S3:免疫蛋鸡并收集鸡蛋；S4:卵黄抗体的分离纯化；S5:卵黄抗体的纯化。采用无乳链球菌为抗原免疫蛋鸡，收集高免疫鸡蛋，把高免疫鸡蛋的卵黄进行分离和纯化得到抗无乳链球菌卵黄抗体。本发明专利技术的抗无乳链球菌卵黄抗体特异性强、纯度较高，并且对无乳链球菌具有较强的抑制作用，同时抗体制备成本低、方便简单，适于大规模生产。规模生产。规模生产。

【技术实现步骤摘要】
一种罗非鱼无乳链球菌卵黄抗体的制备及应用


[0001]本专利技术涉及生物技术及应用领域，更具体地说，它涉及一种罗非鱼无乳链球菌卵黄抗体的制备及应用。

技术介绍

[0002]无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)又称B族链球菌(Group B streptococci,GBS)，革兰氏阳性菌，兼性厌氧，具有荚膜，大多呈球形，成对或者排列成链状、无运动性。1966年，研究人员首次在养殖金色美鳊中分离出链球菌，1974年Plumb等人首次在海水鱼中分离出相同的链球菌，研究人员通过生化特性判断这些分离株为无乳链球菌。无乳链球菌是革兰氏阳性菌，能感染多种水生动物，感染无乳链球菌的罗非鱼主要表现为运动失调、眼球突出且浑浊、出血、鳞片脱落等症状。在高于15℃的温度以上便会导致宿主死亡，因此罗非鱼无乳链球菌多发生于夏季，发病鱼存活率不足5％，给水产养殖业带来巨大的损失。
[0003]目前对于无乳链球菌引起的疾病的防治手段主要有以下几种：抗生素和化学类药物、中草药、灭活疫苗和抗体等。其中广泛使用的是抗生素和化学类药物，然而随着抗生本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗无乳链球菌卵黄抗体的制备方法，其特征是：包括以下步骤方法:S1:制备无乳链球菌抗原并灭活；接种无乳链球菌于BHI固体琼脂培养基，37℃倒置培养12h左右，挑取单菌落接种于BHI液体培养基中，在37℃，160rpm的条件下，摇床振荡培养过夜，通过离心分离得到含有无乳链球菌的菌体沉淀物和上清液，用PBS缓冲液洗涤菌体3次，得到无乳链球菌悬浮液；S2：无乳链球菌抗原的灭活；向步骤S1中制得的无乳链球菌悬浮液中加入4％多聚甲醛固定液，使其浓度为0.4％，室温灭活24h；用PBS缓冲液洗涤菌体4次，离心后的菌体沉淀物与PBS缓冲液混匀，调整无乳链球菌的浓度为1x108CFU/mL的菌悬液，得到灭活的无乳链球菌抗原，放4℃冰箱备用；S3:免疫蛋鸡并收集鸡蛋；将蛋鸡进行基础免疫和加强免疫，免疫后的每周日开始收集鸡蛋，放4℃冰箱保存备用；S4:卵黄抗体的分离纯化；将步骤S3得到的免疫鸡蛋用酒精擦拭蛋壳，使用卵黄分离器分离卵黄，然后在卵黄中加入卵黄体积7倍的预冷无菌蒸馏水，用0.1MHCl调整pH为5.0，混匀后于4℃冰箱静置过夜；然后在4℃，12000g条件下离心25min，取上清液依次用0.45μm和0.2μm微孔滤膜过滤，得到卵黄抗体的水溶性组分(WSF)；S5:卵黄抗体的纯化；向卵黄抗体水溶性组分中加入硫酸铵至饱和度为55％，充分搅拌均匀后在4℃下过夜，12000g条件下离心20min，将沉淀用PBS缓冲液稀释至原体积，再加入硫酸铵至饱和度为33％，充分搅拌均匀后4℃静置2h，4℃，12000g条件下离心20min，将沉淀用PBS缓冲液重悬，得到抗无乳链球菌卵黄抗体。2.根据权利要求1所述的一种抗无乳链球菌卵黄抗体的制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦真东，林蠡，张林鹏，刘春，滕功名，詹凡玢，施斐，李亚男，
申请(专利权)人：仲恺农业工程学院，
类型：发明
国别省市：