一种具有高胆盐水解酶活性的寡糖乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种具有高胆盐水解酶活性的寡糖乳杆菌及其应用，寡糖乳杆菌的保藏编号为CGMCCNo.26137。本发明专利技术首次提出了寡糖乳杆菌BD7642具有高胆盐水解酶活性，该寡糖乳杆菌对胆盐有很高的水解活性，属于对胆盐高耐受，高酶活的菌株。本发明专利技术的菌株可应用于医药、理疗食品、畜牧业等领域，该菌株的应用开发对未来高胆固醇血症，肥胖症等疾病的深入了解与治疗可以提供定向开发药物。可以提供定向开发药物。可以提供定向开发药物。

【技术实现步骤摘要】
一种具有高胆盐水解酶活性的寡糖乳杆菌及其应用


[0001]本专利技术属于生物工程
，具体涉及一具有高胆盐水解酶活性的寡糖乳杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，国内人们的生活水平快速提高，其体现在饮食上也变得丰富多彩，选择多样。但是随之而来的还有肥胖症的高发，其也会诱导其他肥胖相关疾病，如：高血压，高血脂等肥胖类疾病。肥胖症不只在国内，在全世界都是一个严峻的问题，威胁着大众的身心健康。相应的药物治疗可能带来代谢紊乱等不可控因素，而随着食疗的发展，研究发现乳酸菌对肥胖具有很好的预防和治疗效果。
[0003]近年的研究发现，乳酸菌对肥胖的治疗效果可能归因于胆盐水解酶的活性，胆盐水解酶可以水解胆盐，释放氨基酸和游离胆盐，存在于人体内的肠道微生物中，可以调节人体的胆汁酸代谢。Zhu Huanjing将威尔逊乳杆菌的胆盐水解酶基因(bsh)在敲除了bsh基因的植物乳杆菌WCFS1中异源表达后，在高胆固醇血症的小鼠体中调节了其胆汁酸池，改善了小鼠的高胆固醇血症，Liang Cong筛选高胆盐水解酶活性的植物乳杆菌H
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87通过调节胆汁酸代谢，抑制脂肪的积累，对小鼠高脂饮食诱导的肥胖具有良好的预防效果，Wang Guangqiang在干酪乳杆菌LC2W中异源表达植物乳杆菌AR113来源的胆盐水解酶，其可以调节胆固醇的代谢，促进胆固醇的转运，同样对高胆固醇血症具有改善效果。因此，研究具有胆盐水解酶活性的菌株等具有重要的意义。

技术实现思路

[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种新的具有高胆盐水解酶活性的寡糖乳杆菌BD7642，寡糖乳杆菌BD7642具有很强的胆盐水解酶活性。
[0005]一方面，本专利技术提供了一种具有高胆盐水解酶活性的寡糖乳杆菌(Ligilactobacillus cholephilus)，其命名为BD7642，保藏编号为CGMCC No.26137。
[0006]具体的，所述具有高胆盐水解酶活性的寡糖乳杆菌BD7642菌株为寡糖乳杆菌，拉丁名称为：Ligilactobacillus cholephilus，保藏号为：CGMCC No.26137，于2022年11月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
[0007]另一方面，本专利技术还提供了具有高胆盐水解酶活性的寡糖乳杆菌(Ligilactobacillus cholephilus)在制备治疗和/或预防降血脂功能的药物和食品中的应用。
[0008]另一方面，本专利技术还提供了具有高胆盐水解酶活性的寡糖乳杆菌(Ligilactobacillus cholephilus)在制备治疗和/或预防降血脂功能的发酵乳制品中应用。
[0009]具体的，所述寡糖乳杆菌单独或与其他菌株混合发酵用于制备具有降血脂功能的
发酵乳制品。
[0010]具体的，所述寡糖乳杆菌通过调节胆汁酸代谢来降血脂。
[0011]另一方面，本专利技术还提供了一种益生菌菌剂，所述益生菌菌剂包括：包含如上述的寡糖乳杆菌的菌体，或所述寡糖乳杆菌的菌液。
[0012]在本专利技术的一个具体实施方案中，来自于寡糖乳杆菌(Ligilactobacillus cholephilus)BD7642的胆盐水解酶及其基因序列g1210、g1294和g1443。以寡糖乳杆菌(Ligilactobacillus cholephilus)BD7642的基因组为模板，PCR获得这三个基因序列，以pET302/NT
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His为载体构建大肠杆菌的表达载体，在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中诱导表达，获得三种胆盐水解酶，其中g1294具有极强的牛磺酸胆盐的降解能力。
[0013]生物材料保藏信息：
[0014]寡糖乳杆菌BD7642菌株为寡糖乳杆菌，建议的分类命名为：Ligilactobacillus cholephilus，保藏号为：CGMCC No.26137，于2022年11月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编100101。
[0015]本专利技术的有益效果如下：
[0016]本专利技术首次提出了寡糖乳杆菌BD7642具有高胆盐水解酶活性，该寡糖乳杆菌对胆盐有很高的水解活性，属于对胆盐高耐受，高酶活的菌株。本专利技术的菌株可应用于医药、理疗食品、畜牧业等领域，如应用做医药制剂、食品添加剂、饲料发酵添加剂等，该菌株的应用开发对未来高胆固醇血症，肥胖症等疾病的深入了解与治疗可以提供定向开发药物。
附图说明
[0017]图1为寡糖乳杆菌BD7642的单菌落形态图；
[0018]图2为寡糖乳杆菌BD7642在平板上生长图；a：胆盐水解酶活筛选平板，b：TPY平板；
[0019]图3为HPLC峰图数据；
[0020]图4为三种胆盐水解酶异源表达成功验证图；a：SDS
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PAGE凝胶电泳图；b：在0.3％的牛磺酸脱氧胆酸钠平板上的点板图；
[0021]图5为三种胆盐水解酶对胆盐降解对比图；短线为空载对照；牛胆：牛磺胆酸钠盐(TAC)、牛鹅：牛磺鹅脱氧胆酸钠盐(TCDC)、牛脱：牛磺脱氧胆酸钠盐(TDC)、甘胆：甘氨胆酸钠盐(GC)、甘鹅：甘氨鹅脱氧胆酸钠盐(GCDC)、甘脱：甘氨脱氧胆酸钠盐(GDC)。
具体实施方式
[0022]以下实施例用于说明本专利技术，下述实施例是说明性的，不是限定性的，不能以下属实施例来限制本专利技术的保护范围。
[0023]实施例1：高胆盐水解酶活性菌株的发现
[0024]1、菌株的筛选
[0025]在上海传统发酵泡菜中筛选菌株，具体筛选步骤如下：1)首先将搜集到的泡菜样品进行破碎，加入适量的生理盐水浸没泡菜组织块儿，浸泡1小时；2)将浸泡好的生理盐水收集到试管中进行10倍梯度稀释，稀释度有10倍、100倍、1000倍、10000倍；3)将稀释好的菌液分别取100微升，在包含0.3％牛磺酸脱氧胆酸钠TPY平板上进行涂布，将涂布好的平板置于厌氧培养箱中36℃培养48小时；4)将生长好的平板从培养箱中拿出，观察具有明显胆盐
水解圈的菌落一株，将菌落挑选出来在TPY培养基(配方组成为：水解酪蛋白10.0g/L、植物胨5.0g/L、酵母粉2.0g/L、葡萄糖5.0g/L、L
‑
半胱氨酸0.5g/L、磷酸氢二钾2.0g/L、氯化镁0.5g/L、硫酸锌0.25g/L、氯化钙0.15g/L、氯化铁0.0001g/L、吐温80 1.0g/L、pH值6.5
±
0.1)上进行纯化，纯化好的菌株进行镜检和16SrDNA测序工作，菌体形态见图1，测序发现其为寡糖乳杆菌。
[0026]将寡糖乳杆菌保藏在光明乳业研究院菌种库中，编号BD7642，该菌株在MRS培养基和TPY培养基(配方组成为：水解酪蛋白10.0g/L、植物胨5.0g/L、酵母粉2.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种具有高胆盐水解酶活性的寡糖乳杆菌，其特征在于，其命名为BD7642，保藏编号为CGMCC No.26137。2.权利要求1所述的具有高胆盐水解酶活性的寡糖乳杆菌在制备治疗和/或预防降血脂功能的药物和食品中的应用。3.权利要求1所述的具有高胆盐水解酶活性的寡糖乳杆菌在制备治疗和/或预防降血脂功能的发酵乳制品中的应用。4.根据权利要求3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：任全路，刘振民，游春苹，孙蕴文，吴正钧，
申请(专利权)人：光明乳业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：