本发明专利技术涉及荧光免疫层析技术领域，公开了一种检测弹性蛋白酶的荧光免疫层析试剂盒及其应用，包括荧光标记组分和免疫层析试纸条；荧光标记组分中含有缓冲液、海藻糖、BSA、蔗糖、月桂醇醚磷酸酯钾以及荧光微球标记的弹力纤维蛋白酶单克隆检测抗体和荧光微球标记的第一质控抗体；免疫层析试纸条包括底板和设于底板上的反应膜，反应膜的两端分别搭接有样品垫和吸水垫，反应膜上设有间隔的检测线和质控线，检测线位于反应膜上搭接有样品垫的一端，检测线上包被有弹力纤维蛋白酶单克隆捕获抗体，质控线上包被有能够与第一质控抗体特异性结合的第二质控抗体。本方案检测用时短、方法简单、准确率高、成本低，便于对样品中弹性蛋白酶进行快速定性检测。酶进行快速定性检测。
【技术实现步骤摘要】
一种检测弹性蛋白酶的荧光免疫层析试剂盒及其应用
[0001]本专利技术涉及荧光免疫层析
，具体涉及一种检测弹性蛋白酶的荧光免疫层析试剂盒及其应用。
技术介绍
[0002]女性盆底功能障碍性疾病(pelvic floor dysfunction，PFD)是中老年女性常见病，发病率约为40％，主要包括盆腔器官脱垂(pelvic organprolapse，POP)及压力性尿失禁(stress urinary incontinence，SUI)，其发病与支撑盆腔器官的阴道和盆底组织机械功能减退有关。胶原和弹性纤维是盆底支持组织细胞外基质的重要组成成分，赋予支持组织弹性和可逆的变形能力，其结构和功能的改变将导致盆底支持组织失去弹性、盆底松弛、盆底功能障碍性疾病的病发。弹性蛋白代谢改变与盆底疾病有关，中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase，NE)是一种糜蛋白酶类丝氨酸蛋白酶水解酶，NE过表达破坏细胞外基质，导致弹性组织离解活性增加，弹性蛋白被分解，盆底支持组织张力降低，诱发POP。
[0003]目前常采用分光光度法、质谱分析法、容量法等进行弹性蛋白酶的检测，然而其不仅需要复杂的设备和检测方法，检测准确性还不高，且目前患者的弹性蛋白酶的初步定性检测即可辅助医务人员快速判断患者是否患有相关疾病，然而，目前暂无通过检测中性粒细胞弹性蛋白酶含量来快速评估患者体内弹性蛋白代谢情况的方法。而早期快速定性检测患者体内中性粒细胞弹性蛋白酶就能够及时指导临床治疗，为患者后续的合理诊治及用药提供依据，这对于对患者的健康监测以及预防也具有重要意义。
[0004]目前常通过肛门直肠测压、盆底肌电图、肛周、会阴及腔内超声、排粪造影等直接对患者病症进行诊断。这些方法检测时间长，常需要大型仪器，而且对实验人员的要求较高，导致检测成本较高，不仅费时费力，还易增加潜在患者经济、身体及心理上的痛苦，对患者十分不友好。
[0005]综上，研发一种准确度高、检验用时短、检验方法简单、成本低的检测弹性蛋白酶的荧光免疫层析试剂盒及其应用，不仅有效弥补现有弹性蛋白酶检测方法的不足，还能对女性盆底功能障碍性疾病的标志物含量进行快速初步判断，对快速初步评估相关疾病具有重要意义。
技术实现思路
[0006]本专利技术意在提供一种检测弹性蛋白酶的荧光免疫层析试剂盒及其应用，以解决现有弹性蛋白酶检测方法复杂且准确率不高的技术问题。
[0007]为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种检测弹性蛋白酶的荧光免疫层析试剂盒，包括荧光标记组分和免疫层析试纸条；
[0008]所述荧光标记组分中含有缓冲液、海藻糖、BSA、蔗糖、月桂醇醚磷酸酯钾以及荧光微球标记的弹力纤维蛋白酶单克隆检测抗体和荧光微球标记的第一质控抗体；
[0009]所述免疫层析试纸条包括底板和设于底板上的反应膜，所述反应膜的两端分别搭
接有样品垫和吸水垫，所述反应膜上设有间隔的检测线和质控线，所述检测线位于反应膜上搭接有样品垫的一端，所述检测线上包被有弹力纤维蛋白酶单克隆捕获抗体，所述质控线上包被有能够与所述第一质控抗体特异性结合的第二质控抗体。
[0010]本方案的原理及优点是：
[0011]本方案试剂盒包括免疫层析试纸条和荧光标记组分，通过将荧光标记组分和待测样品混合形成溶液，再将溶液在免疫层析试纸条上显色，即可对待测样品中是否含有中性粒细胞弹性蛋白酶进行快速定性检测。具体的，本专利技术的荧光免疫层析试剂盒的基本原理为双抗体夹心法，即样本中的待测物与荧光标记组分中的荧光微球标记的弹力蛋白酶单克隆检测抗体结合形成复合物。溶液加至样品垫后在层析作用下，复合物沿着反应膜向前扩散，复合物被固定在反应膜检测线上对应的弹力蛋白酶单克隆捕获抗体所捕获。样本中待测物越多，反应形成的复合物也越多，检测线上积聚的复合物则越多，显色就更加明显，荧光信号的强度反应了被捕获的待测物的数量。
[0012]而将检测线设置于靠近样品垫的反应膜一端，便于目标弹性蛋白酶与荧光标记组分中荧光微球标记的弹力纤维蛋白酶单克隆检测抗体结合形成化合物后快速被弹力纤维蛋白酶单克隆捕获抗体捕获，从而有效缩短样品与标记抗体的反应时间，能被捕获的标记抗体减少、信号变弱，有利于低含量弹性蛋白酶时的样品显色，提高检测准确性。而本专利技术在荧光标记组分中加入月桂醇醚磷酸酯钾与其他组分配合，能够进一步提高检测的准确度。
[0013]优选的，所述荧光标记组分中各物质的浓度为：海藻糖0.7wt％～2.5wt％、BSA 2.5wt％～6wt％，蔗糖4wt％～15wt％、月桂醇醚磷酸酯钾0.5wt％～3wt％、荧光微球标记的弹力纤维蛋白酶单克隆检测抗体4wt％～12wt％、荧光微球标记的第一质控抗体5wt％～15wt％，余量为缓冲液。
[0014]优选的，所述第一质控抗体为鼠抗人IgG抗体，所述第二质控抗体为鼠IgG抗体。
[0015]优选的，所述荧光微球为荧光胶乳微球。
[0016]优选的，所述荧光微球的直径为300nm～500nm，所述荧光微球在300nm～500nm的激发光光源作用下，发射出500nm～600nm的荧光。
[0017]优选的，所述检测线的形成方法如下：用含0.7wt％～2.5wt％海藻糖的缓冲液将弹力纤维蛋白酶单克隆捕获抗体稀释到0.3mg/mL～1mg/mL，形成检测线工作液；使用检测线工作液在反应膜上划线后烘干，形成检测线。
[0018]优选的，所述质控线的形成方法如下：用含4wt％～15wt％蔗糖的缓冲液将第二质控抗体稀释到0.3mg/mL～1mg/mL，形成质控线工作液；使用质控线工作液在反应膜上划线后烘干，形成质控线。
[0019]优选的，所述划线的出液量为0.45μL/cm～2.10μL/cm，所述烘干的条件为40℃～60℃烘48～72小时。
[0020]优选的，所述荧光微球标记的弹力纤维蛋白酶单克隆检测抗体的制备方法如下：将荧光微球活化得到活化荧光微球溶液，向活化荧光微球溶液中加入弹力纤维蛋白酶单克隆检测抗体后室温孵育1.5～3小时。
[0021]本方案还提供一种上述检测弹性蛋白酶的荧光免疫层析试剂盒在定性检测中性粒细胞弹性蛋白酶含量中的应用。
[0022]有益效果：本方案试剂盒在定性检测中性粒细胞弹性蛋白酶含量时具有较高准确率和精确度，便于对待测样品中是否含有中性粒细胞弹性蛋白酶进行快速定性检测，从而帮助具有部分症状的患者快速确定其体内弹性蛋白代谢是否异常，对其临床疾病的快速诊断具有重要意义，有效减轻患者在经济、身体及心理上的痛苦，对患者十分友好。
附图说明
[0023]图1为本专利技术实施例中免疫层析试纸条的结构示意图。
具体实施方式
[0024]下面结合实施例对本专利技术做进一步详细的说明，但本专利技术的实施方式不限于此。若未特别指明，下述实施例以及实验例所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段，且所用的材料、试剂等，均可从商业途径得到。若未特别指明，下述实施例所用的本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测弹性蛋白酶的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：包括荧光标记组分和免疫层析试纸条；所述荧光标记组分中含有缓冲液、海藻糖、BSA、蔗糖、月桂醇醚磷酸酯钾以及荧光微球标记的弹力纤维蛋白酶单克隆检测抗体和荧光微球标记的第一质控抗体；所述免疫层析试纸条包括底板和设于底板上的反应膜，所述反应膜的两端分别搭接有样品垫和吸水垫，所述反应膜上设有间隔的检测线和质控线，所述检测线位于反应膜上搭接有样品垫的一端，所述检测线上包被有弹力纤维蛋白酶单克隆捕获抗体，所述质控线上包被有能够与所述第一质控抗体特异性结合的第二质控抗体。2.根据权利要求1所述的一种检测弹性蛋白酶的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述荧光标记组分中各物质的浓度为：海藻糖0.7wt％～2.5wt％、BSA 2.5wt％～6wt％，蔗糖4wt％～15wt％、月桂醇醚磷酸酯钾0.5wt％～3wt％、荧光微球标记的弹力纤维蛋白酶单克隆检测抗体4wt％～12wt％、荧光微球标记的第一质控抗体5wt％～15wt％，余量为缓冲液。3.根据权利要求1所述的一种检测弹性蛋白酶的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述第一质控抗体为鼠抗人IgG抗体，所述第二质控抗体为鼠IgG抗体。4.根据权利要求1所述的一种检测弹性蛋白酶的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述荧光微球为荧光胶乳微球。5.根据权利要求1所述的一种检测弹性蛋白酶的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述荧光微球的直径为300nm～500nm...
【专利技术属性】
技术研发人员：董平，
申请(专利权)人：董平，
类型：发明
国别省市：
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