一种枯草芽孢杆菌及其培养方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)及其培养方法和应用，涉及生物工程技术领域。所述枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是中国.武汉.武汉大学；保藏日期：2022年12月23日；保藏编号：CCTCCNo:M20222026。本发明专利技术提供的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)菌剂可以抑制柑橘黄龙病的发展，抑制其他有害细菌对果树的危害，可减轻由细菌引起的果树根部土壤的环境恶化、如根部腐烂、化学性土壤污染、果树营养成分的缺乏等，缓解土壤的酸碱度失衡，裙腐病，衰退病等危害，同时微生物菌剂对人畜无害，对果树和环境无污染，也能增强植物的抗逆能力以及提高作物品质。物品质。物品质。

【技术实现步骤摘要】
一种枯草芽孢杆菌及其培养方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，具体涉及一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)及其培养方法和应用。

技术介绍

[0002]柑橘黄龙病是一种主要的柑橘病害，俗称“柑橘癌症”。柑橘黄龙病病原是寄生于柑橘韧皮部的一种革兰氏阴性菌，其传播媒介为柑橘木虱。当柑橘木虱在果园存在时，病原菌通过木虱大量传播，使得超过95％的柑橘在不到三年的时间内均受到侵染，受感染的柑橘出现梢枯、黄叶、叶斑和果实畸形等病症，引起其品质和产量性状的下降。柑橘黄龙病主要表现为新梢发黄、枝叶硬化没光泽、根部腐烂、果实不成熟等，这是柑橘最严重的病害之一。黄龙病全年都能发生，春、夏、秋梢都可出现症状，以秋、冬季症状最为明显。目前只能进行防控，还不可进行治疗，严重的话，会导致大片柑橘园绝产，是柑橘种植户们最头疼的病害。
[0003]如何防治柑橘黄龙病是目前乃至今后相当长时期内柑橘研究者和种植者必须面对的难题。种植无病毒种苗、及时挖除病树、及时杀灭柑橘木虱和加强树体管理等措施仍然是目前不可替代的防治柑橘黄龙病的有效方法。对柑橘类黄龙病的防治目前多以培育无病毒苗木、抗生素防治为主，因无法真正有效杀灭病菌，这些措施往往对病树效果不明显，仍然不能有效防治黄龙病病发，在新树生长若干年后黄龙病会再次爆发。虽然近年来在黄龙病细菌基因组学、柑橘病理学研究上已经取得了不小的进步，对病原和宿主的相互作用有了相当的了解，但讨论根治柑橘黄龙病的话题为时尚早。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供的一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)及其培养方法和应用，旨在解决上述
技术介绍
中存在的问题。
[0005]为了实现上述技术目的，本专利技术主要采用如下技术方案：
[0006]第一方面，本专利技术提供了一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是中国.武汉.武汉大学；保藏日期：2022年12月23日；保藏编号：CCTCC No:M 20222026，
[0007]第二方面，本专利技术提供了一种如第一方面所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)在防治植物病虫害中的应用。
[0008]第三方面，本专利技术提供了一种含有第一方面所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)的菌剂。
[0009]第四方面，本专利技术提供了一种如第三方面所述的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌剂的筛选培养方法，包括如下步骤：
[0010](1)将枯草芽孢杆菌菌株活化后，用接种针接种至种子液中，放入摇床上进行振荡培养后取出，得到种子菌液；所述种子液含有液体PDA100ml、氯化钠0.5g、K2HPO40.1g和
CaCO30.02g；
[0011](2)将种子菌液用移液枪吸取2ml加到发酵液中，再放入摇床上培养，即得枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌剂，所述发酵液含有蒸馏水100ml、糖蜜6ml、玉米浆0.5ml、MgSO40.5g和MnCl20.01g，然后用KOH调节发酵液PH值7.2～7.5后，再加0.3g轻质CaCO3。
[0012]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
[0013]本专利技术提供的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)菌剂可以抑制柑橘黄龙病的发展，抑制其他有害细菌对果树的危害，可减轻由细菌引起的果树根部土壤的环境恶化、如根部腐烂、化学性土壤污染、果树营养成分的缺乏等，缓解土壤的酸碱度失衡，裙腐病，衰退病等危害，同时微生物菌剂对人畜无害，对果树和环境无污染，也能增强植物的抗逆能力以及提高作物品质。
附图说明
[0014]图1为本专利技术的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)镜检图。
具体实施方式
[0015]为了使本申请的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本申请进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请，并不用于限定本申请。本申请中未详细单独说明的试剂均为常规试剂，均可从商业途径获得；未详细特别说明的方法均为常规实验方法，可从现有技术中获知。
[0016]需要说明的是，本专利技术的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序，也不对其后的技术特征起到实质的限定作用。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本专利技术的实施例能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
[0017]本专利技术实施例提供了一种枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是中国.武汉.武汉大学；保藏日期：2022年12月23日；保藏编号：CCTCC No:M 20222026，
[0018]其中，本专利技术中，所述枯草芽孢杆菌的16s rRNA序列为：
[0019]ACTGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAAACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCAACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTACCGTTCGAATAGGGCGGTACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATG本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址是中国.武汉.武汉大学；保藏日期：2022年12月23日；保藏编号：CCTCCNo:M20222026。2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的16srRNA序列如SEQ ID NO.1所示。3.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)在防治植物病虫害中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述植物病虫害为柑橘黄龙病。5.一种含有权利要求1所述的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)的菌剂。6.如权利要求5所述的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)菌剂的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将枯草芽孢杆菌菌株活化后，用接种针接种至种子液中，放入摇床上进行振荡培养后取出，得到种子菌液；所述种子液含有液体PDA100ml、氯化钠0.5g、K2HPO40.1g和CaCO30.02g；(2)将种子菌液用移液枪吸取2ml加到发酵液中，再放入摇床上培养，即得枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)菌剂，所述发酵液含有蒸馏水100ml、糖蜜6ml、玉米浆0.5ml、MgSO40.5g和MnCl20.01g，然后用KOH调节发酵液PH值7.2～7.5后，再加0.3g轻质CaCO3。7.根据权利要求6所述的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)菌剂的培养方法，其特征在于，所述枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)采用稀释涂布平板法从柑橘黄龙病...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘保军，王正和，谭新国，
申请(专利权)人：武汉吾尔利生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：