GPC3和GPC3CAR-T在诊断、治疗特发性肺纤维化中的应用制造技术

本发明专利技术涉及GPC3和GPC3

【技术实现步骤摘要】
GPC3和GPC3 CAR
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T在诊断、治疗特发性肺纤维化中的应用


[0001]本专利技术涉及医药生物
，具体地说，是关于GPC3和GPC3 CAR
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T在诊断、治疗特发性肺纤维化中的应用。

技术介绍

[0002]特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)是一种慢性纤维化间质性肺炎，发病机制不明，且预后不良。该病主要涉及50岁以上的患者，男性多于女性。全球约有300万IPF患者。目前市面上只有吡非尼酮和尼达尼布针对IPF，它们主要通过延缓肺功能下降，从而延缓IPF进程，但它们疗效有限且耐受性差。IPF给个人、家庭、社会以及公共卫生资源造成的疾病负担不容小觑。IFP是一种纤维增生性疾病，肺泡上皮细胞慢性损伤和异常的组织修复，导致成纤维细胞灶的形成。成纤维细胞灶主要由成纤维细胞和肌成纤维细胞组成，肌成纤维细胞是成纤维细胞的活化形式，可引起基底膜中断，促进上皮细胞凋亡，并能阻止随后的再上皮化发生，同时导致细胞外基质的过度沉积，造成肺纤维化、肺结构破坏及肺功能丧失。
[0003]近年来，已有相关治疗特发性肺纤维化药物用于临床，可明显缓解特发性肺纤维化的病程进展，改善IPF患者的临床症状,提高患者生活质量。吡非尼酮是目前认为临床效果最佳的抗纤维化药物，具有抗炎、抗纤维化、抗增生、抑制TGF
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β及胶原合成的作用，且在临床试验中取得明确的治疗效果，值得在临床推广和运用。尼达尼布具有有效的抗纤维化和抗炎作用，并能抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞的增殖、迁移和转化，该药物可减缓肺功能下降速度，从而缓解疾病进程。N
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乙酰半胱氨酸具有抗氧化和清除自由基的作用，可抑制肺成纤维细胞和淋巴细胞的过度增殖和分化，减少炎性介质的产生，抑制胶原的合成，从而在肺纤维化疾病中起到预防疾病进展的作用。糖皮质激素是传统治疗肺纤维化的主要药物，小剂量糖皮质激素口服治疗或与其他药物联合治疗，对IPF的治疗也有一定的疗效，但糖皮质激素的副作用明显。目前，IPF的治疗依然是一道医学难题，临床上需针对患者病情行个体化治疗，现有的药物和治疗手段仅仅能缓解IPF的症状，延缓病情的进展，不能从根本上逆转病情，或者治愈疾病。多数针对IPF治疗药物的研究都没能取得令人满意的效果。因此，寻找减慢甚至逆转IPF疾病进程的新方法，为IPF患者提供有效的治疗手段是目前特发性肺纤维化的研究重点。
[0004]Glypican
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3(GPC3)是一种带有2条硫酸乙酰肝素(HS)链修饰的细胞膜蛋白，在超过70％的肝细胞癌(HCC)和其他实体瘤如肺鳞状细胞癌中高表达，但在正常组织包括肝脏中没有明显的表达。GPC3参与多种过程，包括细胞生长、分化和迁移，GPC3基因定位于人染色体区，编码的蛋白的相对分子质量约为70KDa，由580个氨基酸组成。目前，GPC3是肝癌靶向治疗的明星靶点，以GPC3为靶点的疗法有：偶联Toxin免疫毒素、CTL、TCR
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T、CART等。
[0005]CAR
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T细胞是近5年来肿瘤过继免疫治疗方法的热点，兼具细胞免疫治疗和抗体免疫治疗的优点：(1)治疗更准确，因为CAR
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T细胞应用抗原抗体相结合的机制，可以避免肿瘤细胞免疫逃逸，即能克服肿瘤细胞通过下调MHC分子表达以及降低抗原提呈等免疫逃逸，让
肿瘤细胞无法逃遁；(2)多靶向更准确，CAR既可以利用肿瘤蛋白质抗原，又可以利用糖脂类非蛋白质抗原，扩大了肿瘤抗原靶点范围，并且CAR
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T细胞作用过程不受MHC限制；(3)杀瘤范围更广，很多肿瘤细胞表达相同的肿瘤抗原，针对某一种肿瘤抗原的CAR基因构建一旦完成，便可以被广泛利用；(4)杀瘤效果更持久，CAR
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T细胞具有免疫记忆功能，可以长期在体内存活。也就是说这些T细胞不必像化疗药物那样持续给药，细胞是持续的、动态的、不断分裂的药，一次注射，持久保护。正是因为以上优势，CAR
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T细胞已经在临床上用于治疗神经细胞瘤、B细胞白血病、B细胞淋巴瘤、黑色素瘤、肺癌、脑胶质瘤、卵巢癌等。前期有研究认为心脏损伤后诱导小鼠成纤维细胞的遗传消融导致心脏纤维化的显著消退以及心脏功能的改善。在结缔组织增生性肿瘤模型中，一些研究已经成功地将CAR
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T细胞靶向并消融了肿瘤基质中的活化成纤维细胞。Jonathan A Epstein团队在Nature杂志上发表题为Targeting cardiac fibrosiswith engineered T cells的文章，利用小鼠心脏疾病模型，确定了通过基因改造的T细胞，可以有效的靶向活化的心脏成纤维细胞。这一创新性的结果不仅为CAR
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T靶向其他形式的心脏纤维化打开了大门，而且潜在地还为心脏外的许多纤维化疾病的免疫治疗打开了大门。
[0006]中文专利CN112226506A，公开日2021.01.15，公开了一种特发性肺纤维化疾病诊断标志物CCT6A及其在制备诊断或预后工具中的应用，属于医学诊断标志物及工具
，该专利技术通过检测CCT6A基因的表达及其表达产物进而实现临床诊断，本研究在IPF患者血清中发现了水平较高的CCT6A，且在IPF患者肺成纤维细胞中发现了高表达的CCT6A，说明CCT6A可能在肺纤维化过程中调控成纤维细胞的活动，进一步调控了肺纤维化的过程，为临床上进行特发性肺纤维化的早期诊断提供了一种无创的方法，适于进一步临床推广应用。而目前关于本专利技术的GPC3和GPC3 CAR
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T在诊断、治疗特发性肺纤维化中的应用还未见报道。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是，针对现有技术中的不足，提供GPC3和GPC3 CAR
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T在诊断、治疗特发性肺纤维化中的应用。
[0008]一方面，本专利技术提供了一种GPC3基因或蛋白作为诊断标志物在制备特发性肺纤维化诊断试剂或试剂盒中的应用。
[0009]作为一个优选例，所述的试剂或试剂盒用于检测GPC3基因或蛋白的表达量，所述的GPC3基因或蛋白在特发性肺纤维化组织中高表达。
[0010]第二方面，提供了一种特发性肺纤维化的诊断试剂盒，所述的试剂盒包括检测GPC3基因或蛋白表达量的试剂。
[0011]第三方面，提供了检测GPC3基因或蛋白表达量的试剂在制备特发性肺纤维化诊断试剂盒中的应用。
[0012]第四方面，提供了一种靶向GPC3的特异性嵌合抗原受体，所述的靶向GPC3的特异性嵌合抗原受体包括依次串连的信号肽、抗原结合域、胞外铰链区、跨膜结构域和胞内信号域。
[0013]作为一个优选例，所述的靶向GPC3的特异性嵌合抗原受体基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；
[0014]所述的信号肽为CD8 leader，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
[0015]所述的抗原结合域GC3本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.GPC3基因或蛋白作为诊断标志物在制备特发性肺纤维化诊断试剂或试剂盒中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的试剂或试剂盒用于检测GPC3基因或蛋白的表达量，所述的GPC3基因或蛋白在特发性肺纤维化组织中高表达。3.一种特发性肺纤维化的诊断试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括检测GPC3基因或蛋白表达量的试剂。4.检测GPC3基因或蛋白表达量的试剂在制备特发性肺纤维化诊断试剂盒中的应用。5.一种靶向GPC3的特异性嵌合抗原受体，其特征在于，所述的靶向GPC3的特异性嵌合抗原受体包括依次串连的信号肽、抗原结合域、胞外铰链区、跨膜结构域和胞内信号域。6.根据权利要求5所述的靶向GPC3的特异性嵌合抗原受体，其特征在于，所述的靶向GPC3的特异性嵌合抗原受体基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述的信号肽为CD8leader，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；所述的抗原...

【专利技术属性】
技术研发人员：瞿介明，张欢，刘晗，石博文，杨清源，周敏，李丹，赵婧雅，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属瑞金医院，
类型：发明
国别省市：