产生基因修改的动物的方法技术

本公开提供了产生多重基因修改的动物的方法，例如，猪内源性逆转录病毒(PERV)失活的猪。本公开还提供了提高多重转基因动物出生率的方法。在一些实施方式中，本公开涉及猪细胞的产生和使用，其中猪内源性逆转录病毒(PERV)部分已灭活。在一些实施方式中，克隆无PERV或PERV减少的猪细胞以产生猪胚胎。在一些实施方式中，无PERV或PERV减少的胚胎可生长为成年猪，从中可提取器官和/或组织并用于异种移植到例如人类的非猪动物中。到例如人类的非猪动物中。到例如人类的非猪动物中。

【技术实现步骤摘要】
产生基因修改的动物的方法
[0001]本申请是申请日为2018年4月20日，专利技术名称为“产生基因修改的动物的方法”的第201880041802.3号中国专利技术专利申请的分案申请。
[0002]优先权声明
[0003]本申请要求于2017年4月20日提交的美国临时申请号62/487,898的优先权，于2017年5月2日提交的美国临时申请号62/500,197的优先权，于2017年6月30日提交的美国临时申请号62/527,702的优先权，以及于2017年8月10日提交的美国临时申请号62/543,610的优先权，其公开内容在此通过引用整体并入本文。
[0004]公开背景
[0005]用于移植的人体器官和组织的短缺代表了严重未满足的医疗需求。仅在美国和欧洲，就有约200,000名患者等待器官移植，但是这些患者中只有一小部分曾经接受过供体器官(美国卫生及公共服务部，器官获取与移植网络
‑
2017；欧盟委员会，器官捐献和移植记者研讨会，最新事实与数据，2016)。已设想了几种缓解供体器官严重短缺的策略，包括从人类诱导性多能干细胞(本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种产生猪内源性逆转录病毒(PERV)失活的猪的方法，所述PERV失活的猪包含具有至少75％失活的猪内源性逆转录病毒(PERV)部分的猪细胞，其中，大部分猪细胞在PERV pol基因中包含至少100个碱基对的遗传引入的缺失，包括：i.获取具有细胞核的猪的核供体细胞，其中所述猪的核供体细胞中至少75％的所述PERV部分是失活的，其中，核供体细胞选自体细胞、胎儿细胞、生殖细胞、干细胞、或诱导性多能干细胞(iPSC)；ii.将所述核供体细胞的所述细胞核转移至受体去核卵母细胞中以产生核转移的卵母细胞；iii.培养所述核转移的卵母细胞以产生胚泡或胚胎；iv.将所述胚泡或胚胎转移至代孕体中；以及v.从所述胚泡或胚胎中产生活体PERV失活的猪。2.一种产生猪内源性逆转录病毒(PERV)失活的猪的方法，所述PERV失活的猪包含具有至少75％失活的猪内源性逆转录病毒(PERV)部分的猪细胞，其中，大部分猪细胞在PERV pol基因中包含至少100个碱基对的遗传引入的缺失，包括：i.使用来自猪的核供体细胞的细胞核产生胚泡或胚胎，其中所述猪的核供体细胞中至少75％的所述PERV部分是失活的，其中，所述核供体细胞选自体细胞、胎儿细胞、生殖细胞、干细胞、或诱导性多能干细胞(iPSC)；以及ii.将所述胚泡或胚胎转移至代孕体中以产生PERV失活的猪。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述核供体细胞是胎儿细胞。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述胎儿细胞分离自嵌合PERV失活的胎儿。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述嵌合PERV失活的胎儿为约10天，约20天，约30天或约3个月妊娠。6.根据权利要求4所述的方法，其中使用基因组修改试剂产生所述嵌合PERV失活的胎儿。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述基因组修改试剂选自锌指核酸酶或切口酶，TAL效应物核酸酶或切口酶，脱氨酶，和CRISPR相关的核酸酶或切口酶。8.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述核供体细胞在体外经历少于30次，少于20次，少于10次，少于5次，或少于2次的群体倍增。9.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述核供体细胞分离自年龄小于10周，小于8周，小于6周，小于5周，小于4周，小于3周，小于2周，或小于1周的猪。10.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述核供体细胞中至少约80％，至少约90％，至少约95％，至少约99％的PERV部分是失活的。11.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述PERV失活的猪在妊娠后至少1个月，至少6个月，至少1年，至少5年，至少10年保持相同或相似的PERV失活水平。12.根据权利要求1或2所述的方法，还包括将至少一个野生型胚泡或胚胎转移至所述代孕体中。13.一种从通过权利要求1
‑
12中任一项所述的方法产生的PERV失活的猪获得的分离的猪细胞，其中，所述猪细胞选自胰岛细胞、肺上皮细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞、平滑肌细胞、肝细胞、非实质性肝细胞、胆囊上皮细胞、胆囊内皮细胞、胆管上皮细胞、胆管内皮细胞、肝
血管上皮细胞、肝血管内皮细胞、窦状细胞、脉络丛细胞、成纤维细胞、睾丸支持细胞、神经元细胞和肾上腺嗜铬细胞。14.一种自通过权利要求1
‑
12中任一项所述的方法产生的PERV失活的猪获取的器官或组织。15.一种提高PERV失活的猪的出生率的方法，其中，所述PERV失活的猪包含具有至少75％失活的猪内源性逆转录病毒(PERV)部分的猪细胞，其中，大部分猪细胞在PERV pol基因中包含至少100个碱基对的遗传引入的缺失，包括：i.使用来自猪的核供体细胞的细胞核以产生胚泡或胚胎，其中所述猪的核供体细胞中至少75％的PERV部分是失活的，其中，所述核供体细胞选自体细胞、胎儿细胞、生殖细胞、干细胞、或诱导性多能干细胞(iPSC)；以及ii.将所述胚泡或胚胎转移至至少一个代孕体中以产生至少一只PERV失活的猪，其中，与从细胞中超过25％的PERV部分具有活性的细胞产生的胎儿的流产率相比，其流产率降低。16.一种产生基因修改的包含细胞的动物的方法，其中，大部分的所述细胞在PERV pol基因中包含至少100个碱基对的遗传引入的缺失，所述方法包括：i.使用来自核供体细胞的细胞核以产生胚泡或胚胎，其中所述核供体细胞包含在pol基因中遗传引入的缺失，其中，所述核供体细胞选自体细胞、胎儿细胞、生殖细胞、干细胞、或诱导性多能干细胞(iPSC)；以及ii.将所述胚泡或胚胎转移至代...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨璐菡，
申请(专利权)人：E开创生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：