平铺白珠无性系组培快繁的方法技术

平铺白珠无性系组培快繁的方法，涉及生物技术领域，特别涉及平铺白珠的组织培养技术。本发明专利技术的方法，包括外植体的消毒、初代培养、继代培养、生根培养等过程，其中，初代培养基配方为：MRM+蔗糖25

【技术实现步骤摘要】
11,April 2012,pp 197
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204, In vitro plant regeneration of wintergreen (Gaultheria fragrantissima Wall.): Assessment of multiplenutrient formulations and cytokinin types。具体如下表所示：母液成分MRM定量(mg/L)1/2MRM定量(mg/L)NH4NO3400200KNO3480240CaCl2•
2H2O440220MgSO4•
7H20370185NaH2PO4•
2H2O380190H3BO36.23.1MnSO4•
H2O16.98.45NaMoO4•
2H2O0.250.13CuSO4•
5H2O0.0250.01CoCl2•
6H2O0.0250.01ZnSO4•
7H2O8.64.3FeSO4•
7H2O27.813.9Na2‑
EDTA37.318.65肌醇10.5
[0007]本专利技术的快繁方法，可建立起平铺白珠无性系快繁体系，为解决平铺白珠种苗标准化生产提供技术支撑，解决了平铺白珠传统育苗方式中种苗性状不稳定的问题。
附图说明
[0008]图1为初代培养基TDZ浓度为1 mg/L茎段生长状况图。
[0009]图2为初代培养基TDZ浓度为2 mg/L茎段生长状况图。
[0010]图3为初代培养基TDZ浓度为3 mg/L茎段生长状况图。<br/>[0011]图4为实施例1的组培快繁获得的商品盆花。
具体实施方式
[0012]实施例1：平铺白珠无性系组培快繁的方法，包括以下步骤：步骤1，选取植株当年生幼嫩的茎段为外植体。
[0013]步骤2，外植体去叶，切成带腋芽的4
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5 cm的小段。
[0014]步骤3，清洁外植体；将外植体置于洗洁精溶液中，用刷子轻微刷洗表面泥灰，再使用超声波清洁器清洗30 min，最后用自来水流水冲洗30 min。
[0015]步骤4，对外植体进行消毒；将洗净的外植体移入超净工作台，用75%酒精消毒30 s，然后用0.1%升汞浸泡消毒，期间不断晃动，使升汞溶液与外植体充分接触，最后用无菌水漂洗5次，漂洗时间不低于10min，取出外植体用滤纸吸干多余水分后备用。
[0016]步骤5，对消毒后的外植体进行初代培养；
初代培养基配方为：MRM +蔗糖30 g/L + TDZ 1 mg/L +活性炭1 g/L。
[0017]步骤6，初代无菌苗继代培养；在超净工作台中，将无菌萌发得到的长势基本一致的无菌苗转接到继代培养基中进行培养；继代培养基配方为：MRM+蔗糖30 g/L + 2
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IP10 mg/L + NAA0.1 mg/L +活性炭1g/L。
[0018]步骤7，继代培养后的不定芽进行生根培养；生根培养基配方为：1/2MRM+蔗糖30 g/L + IBA0.3 mg/L + NAA0.3 mg/L +活性炭1g/L；筛选出健壮不定芽，移入到生根培养基中，进行生根培养。
[0019]实施例2：平铺白珠无性系组培快繁的方法， 步骤5采用初代培养基配方为：MRM +蔗糖30 g/L + TDZ 1.4 mg/L +活性炭1 g/L；步骤6采用增殖培养基配方为：MRM+蔗糖30 g/L + 2
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IP7.5 mg/L + NAA0.1 mg/L +活性炭1g/L；步骤7，生根培养基配方为：1/2MRM+蔗糖30g/L + IBA0.3 mg/L + NAA0.6 mg/L +活性炭1g/L。其它步骤同实施例1。
[0020]实施例3：平铺白珠无性系组培快繁的方法， 步骤5采用初代培养基配方为：MRM +蔗糖25 g/L + TDZ 1.2 mg/L +活性炭0.6 g/L；步骤6采用增殖培养基配方为：MRM+蔗糖25 g/L + 2
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IP12.5 mg/L + NAA0.08 mg/L +活性炭0.6 g/L；步骤7，生根培养基配方为：1/2MRM+蔗糖25 g/L + IBA0.3 mg/L +活性炭0.6g/L。
[0021]其它步骤同实施例1。
[0022]本专利技术中初代培养基的基础培养基MRM搭配不同浓度TDZ将影响茎段萌芽的死亡率、成活率率和污染率。不同浓度TDZ下，培养45d后对茎段萌芽的影响列于下表1中。
[0023]表1不同浓度TDZ对茎段萌芽的影响
TDZ浓度（mg/L）接种数（株）诱导成功数（株）死亡数（株）污染数（株）成活率（%）死亡率（%）污染率（%）生长状况1301212640.0040.0020.00容易诱导出侧芽，侧芽叶色正常，植株生长状况良好1.2301611353.3036.7010.00容易诱导出侧芽，侧芽叶色正常，植株生长状况良好1.4301513250.0043.306.00容易诱导出侧芽，侧芽叶色正常，植株生长状况良好2301511450.0036.6713.33诱导出侧芽，但叶色均为红色，植株生长状况不佳330817526.6756.6716.67最不容易诱导出侧芽，且植株生长状况异常，伴随有褐化、玻璃化等现象
[0024]继代培养中，不同细胞分裂素、生长素对无菌苗生长具有影响。表2为本专利技术不同浓度2
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IP对无菌苗生长的影响情况，从表2中可以看出，2
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IP浓度在7.5
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12.5mg/L时植株株高增长量大，最大可达3.63
±
1.94 cm。
[0025]表2不同浓度2
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IP对无菌苗生长的影响2‑
IP浓度（mg/L）株高增长量（cm）生长状况51.94
±
0.86植株增高较缓慢，伴随有少量植株出现不定芽7.52.86
±
1.69植株增高迅速，发育正常103.63
±
1.94植株增高迅速，发育正常
12.53.16
±
1.75植株增高迅速，发育正常
[0026]此外，与本专利技术的2
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IP对比，选用不同浓度ZT、不同浓度6
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BA、不同浓度TDZ对无菌苗进行继代培养，培养90 d后，观察并记录植株生长情况，并统计株高和增殖系数列于下表3、4、5中。从表2、3、4、5中可以看出，当选用本专利技术的2
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IP时植株增高迅速，发育正常，作为对比的不同浓度ZT、不同浓度6
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BA、不同浓度TDZ对无菌苗进行继代培养情况不及2
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IP。
[0027]表3不同浓度ZT对无菌苗生长的影响ZT浓度（mg/L）株高（cm）生长状况11.79
±
0.39生长迅速，叶和茎发育正常21.41
±
0.55生长较缓慢，叶和茎本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.平铺白珠无性系组培快繁的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：步骤1，选取植株当年生幼嫩的茎段为外植体；步骤2，外植体去叶，切成带腋芽的4
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5 cm的小段；步骤3，清洁外植体；步骤4，对外植体进行消毒；步骤5，对消毒后的外植体进行初代培养；步骤6，初代无菌苗继代培养；步骤7，继代培养后的不定芽进行生根培养；所述步骤5采用的初代培养基配方为：MRM +蔗糖25
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30 g/L + TDZ1
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1.4 mg/L +活性炭0.6
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1 g/L；所述步骤6采用的继代培养基配方为：MRM+蔗糖25
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30 g/L + 2
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【专利技术属性】
技术研发人员：段绍林，王思之，关文灵，李叶芳，姜仕新，段靖宇，李颖，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
国别省市：