一株枯草芽孢杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一株枯草芽孢杆菌及其应用。所述枯草芽孢杆菌通过重离子诱变获得，为枯草芽孢杆菌ZT

【技术实现步骤摘要】
一株枯草芽孢杆菌及其应用


[0001]本专利技术属于微生物发酵
，尤其涉及一株枯草芽孢杆菌及其应用。

技术介绍

[0002]血液流动受阻时容易形成血栓，会导致包括脑梗塞和心肌梗塞在内的多种心脑血管疾病的产生。此外，许多疾病也会诱发血栓并发症，从而增加死亡率。虽然目前纤维蛋白溶解药物被广泛使用，但也有一些缺点，如作用延迟、潜在的副作用、价格昂贵和不能口服等，难以被推广和接受。纳豆激酶具有积极地促进血液流变作用，与传统的血栓治疗药物相比，纳豆激酶具有易吸收、溶栓效率高、半衰期长、方便口服、安全性高等特点。纳豆激酶能够通过直接或间接途径预防和溶解血栓，可口服性是其被关注和受欢迎的关键原因之一。纳豆激酶相关功能性食品的开发是日常用于预防心脑血管疾病的良好途径。此外，在临床研究中发现纳豆激酶可以有效的改善血栓患者的临床症状且无不良反应，然而市场上还没有用于预防或治疗血栓类疾病的纳豆激酶功能性食品或药物。
[0003]纳豆激酶一直未能进行工业化生产，阻碍了其在市场上的应用，这主要是因为可以产纳豆激酶的菌株未能达到大规模生产的条件。目前在提高纳豆激酶产量的方法中，多采用菌株筛选、基因改造和优化发酵条件等手段。但天然分离的野生菌株存在着产量或产酶活力较低的问题；对菌种进行基因改造后存在着遗传稳定性和安全性暂不能保障的问题；优化菌种的发酵条件也会因菌种本身的性质而限制了纳豆激酶的产量。因此，应该从菌种上解决根本性问题，找到一株高产、稳定的纳豆激酶生产菌株是促进纳豆激酶工业化生产和推广其应用的前提。

技术实现思路
<br/>[0004]鉴于现有技术所存在的问题，本专利技术提供一株枯草芽孢杆菌及其应用,具体涉及一种重离子辐照枯草芽孢杆菌突变菌及其在生产纳豆激酶中的应用。
[0005]本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：
[0006]本专利技术提供一株枯草芽孢杆菌，该枯草芽孢杆菌的名称为枯草芽孢杆菌ZT
‑
S1(Bacillus subtilis ZT
‑
S1)，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉大学，保藏号：CCTCC NO:M 20221973，保藏日期：2022年12月13日。
[0007]该枯草芽孢杆菌通过重离子诱变获得，具有可高产纳豆激酶的优点。与野生菌株相比，该菌株所产纳豆激酶活性能够提高65.52％。本专利技术提供的诱变后枯草芽孢杆菌培养简单，易于生长，遗传稳定,具有良好的应用前景。
[0008]本专利技术提供一种菌剂，包括上述枯草芽孢杆菌和/或上述枯草芽孢杆菌的发酵物。上述菌剂可以用于生产纳豆激酶，具有产纳豆激酶活性高等优点。
[0009]本专利技术提供上述枯草芽孢杆菌的发酵方法，包括以下步骤：将上述枯草芽孢杆菌接种到发酵培养基进行发酵培养。
[0010]进一步，以枯草芽孢杆菌种子液进行接种，接种量为0.5
‑
10％；发酵培养时间为
12
‑
72h；发酵培养温度为27
‑
45℃；采用摇床发酵培养，转速为90
‑
210r/min。
[0011]进一步，发酵培养基包括：碳源10
‑
50g/mL，氮源5
‑
50g/mL，无机盐5
‑
30g/mL。
[0012]采用上述的培养条件以及发酵培养基有利于枯草芽孢杆菌的发酵培养以及产纳豆激酶。
[0013]本专利技术提供上述枯草芽孢杆菌在生产纳豆激酶和/或提高发酵物中纳豆激酶酶活中的应用。
[0014]本专利技术提供上述菌剂在生产纳豆激酶和/或提高发酵物中纳豆激酶酶活中的应用。
[0015]本专利技术提供一种生产纳豆激酶和/或提高发酵物中纳豆激酶酶活的方法包括以下步骤：采用上述枯草芽孢杆菌发酵培养。在发酵培养获得发酵物后，还可以包括从发酵物分离提取纳豆激酶的步骤。
[0016]进一步，发酵培养时间为12
‑
72h；发酵培养温度为27
‑
45℃；采用摇床发酵培养，转速为90
‑
210r/min；以枯草芽孢杆菌种子液进行接种，接种量为0.5
‑
10％，优选地，接种量为1％
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3％。发酵培养过程中采用的发酵培养基可以包括：碳源10
‑
50g/mL，氮源5
‑
50g/mL，无机盐5
‑
30g/mL。采用上述的培养条件以及发酵培养基有利于枯草芽孢杆菌的发酵培养以及产纳豆激酶。
附图说明
[0017]图1为枯草芽孢杆菌ZT
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S1在酪蛋白培养基上的菌落形态。
[0018]图2为枯草芽孢杆菌ZT
‑
S1在琼脂糖
‑
纤维蛋白平板上的活力示意图。
[0019]图3为尿激酶活力单位与溶解圈直径的线性关系图。
具体实施方式
[0020]以下结合附图对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。
[0021]本专利技术提供的枯草芽孢杆菌ZT
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S1(Bacillus subtilis ZT
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S1)，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国武汉大学，保藏号：CCTCC NO:M 20221973，保藏日期：2022年12月13日。
[0022]本专利技术提供的枯草芽孢杆菌ZT
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S1，是以自发酵纳豆中分离得到的枯草芽孢杆菌ZZ
‑
S1为出发菌，通过12C
6+
重离子诱变后筛选获得。
[0023]本专利技术提供的枯草芽孢杆菌的诱变和分离筛选的步骤如下：
[0024](1)将枯草芽孢杆菌ZZ
‑
S1(从自发酵纳豆中分离获得)接种于LB液体培养基中，在30
‑
40℃下培养12
‑
24h，得到对数期的枯草芽孢杆菌，制备成细胞浓度为108个/mL的菌悬液。
[0025]LB液体培养基配方包括：胰蛋白胨10g/L，酵母提取物5g/L，氯化钠10g/L，溶剂为水。
[0026](2)将步骤(1)的菌悬液取2mL于辐照皿中，在辐照剂量为10
‑
200Gy，重离子束的离子束能量和剂量分别为60
‑
100Mev/u和20
‑
60Gy/min，靶源距为100
‑
200cm时，对出发菌株ZZ
‑
S1进行辐照处理，每个辐照剂量下设置3个平行。
[0027](3)将步骤(2)中得到的经辐射处理的菌悬液，首先通过酪蛋白培养基筛选出具有水解酪蛋白能力的菌株，再通过琼脂糖
‑
纤维蛋白平板筛选，最终得到枯草芽孢杆菌突变株ZT
‑
S1。
[0028]步骤(3)中，所述酪蛋白培养基的配方包括：酪蛋白5
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株枯草芽孢杆菌，其特征在于，菌株名称为枯草芽孢杆菌ZT
‑
S1(Bacillus subtilis ZT
‑
S1)，保藏编号为CCTCC NO:M 20221973。2.一种菌剂，其特征在于，包括权利要求1所述枯草芽孢杆菌和/或权利要求1所述枯草芽孢杆菌的发酵物。3.一种权利要求1所述枯草芽孢杆菌的发酵方法，包括以下步骤：将权利要求1所述枯草芽孢杆菌接种到发酵培养基进行发酵培养。4.根据权利要求3所述发酵方法，其特征在于，以枯草芽孢杆菌种子液进行接种，接种量为0.5
‑
10％；发酵培养时间为12
‑
72h；发酵培养温度为27
‑
45℃；采用摇床发酵培养，转速为90
‑
210r/min。5.根据权利要求3或4所述发酵方法，其特征在于，发酵...

【专利技术属性】
技术研发人员：晏磊，盛亚男，王事成，刘涛，赵丹，
申请(专利权)人：黑龙江八一农垦大学，
类型：发明
国别省市：