山楂籽中总黄酮的提取、分离、纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种山楂籽中总黄酮的提取、分离、纯化方法，属于天然产物提取、分离、纯化技术领域。本发明专利技术所述的方法包含酶解、去除挥发性成分、去杂、大孔树脂吸附、成分洗脱、凝胶柱纯化等步骤。利用本发明专利技术所述方法对山楂籽中总黄酮进行提取、分离、纯化，黄酮提取物的得率在10％以上，黄酮提取物中总黄酮含量在93％以上。上。

【技术实现步骤摘要】
山楂籽中总黄酮的提取、分离、纯化方法


[0001]本专利技术属于提取工艺
，涉及山楂籽中总黄酮的提取、分离、纯化方法。

技术介绍

[0002]山楂，俗名山里红、红果、棠棣、绿梨、酸楂，蔷薇科山楂属，是中国特有的药果兼用树种，其抗衰老作用位居群果之首。
[0003]山楂果可生吃或作果脯果糕，干制后可入药，具有降血脂、血压、强心、抗心律不齐等作用，同时也是健脾开胃、消食化滞、活血化痰的良药，对胸膈脾满、疝气、血淤、闭经等症有很好的疗效。山楂籽约占山楂总重的1/3，其所含成分与果肉差不多，同样具有显著降低血清中的胆固醇、抗氧化等功能。
[0004]在我国，每年山楂的使用量达数亿吨，其中数千万吨的山楂籽因得不到有效利用而当做废料丢弃，随着国家对资源节约、环境保护的日益重视，如何加强山楂籽的开发利用，变废为宝，发挥更好的经济效益和社会效益，是值得研究的课题。
[0005]到目前为止，已从山楂籽中分离、鉴定出271个成分，包括木脂素类、简单苯丙素类、黄酮类、挥发性组分和其他类成分。山楂籽提取物及其成分具有抗氧化活性、调节血脂功能，抗菌、抗肿瘤活性，抗炎和神经保护作用，此外，还具有促胃肠动力功能，抗心律失常和镇痛作用等。
[0006]山楂籽中具有含量丰富的黄酮类物质，对心血管系统具有明显且良好的治疗和保健功能。从山楂籽中提取黄酮类化合物，并将其应用在天然药物、食品添加剂或其他领域，能够充分提高山楂的利用率和经济价值。
[0007]近年来，对山楂籽黄酮提取工艺研究较多。“正交试验优选山楂籽中总黄酮的提取工艺，祝世发等，四川中医，2007年第25卷第5期”中通过正交试验优选山楂最佳提取工艺为采用10倍量、50％乙醇提取2次，每次0.5h。“超声波提取山楂籽总黄酮工艺优化及动力学研究，张巧明等，食品科技吗2020年第45卷第07期”中将超声波提取山楂籽总黄酮工艺条件优化为：超声温度45℃、乙醇浓度70％、超声时间90min，料液比为20:1(mL/g)，在该试验条件下，山楂籽总黄酮平均得率为7.26％。
[0008]传统的黄酮提取方法主要为采用甲醇、乙醇等有机溶剂提取，其对提取设备要求不高，适合大量生产，因此是目前企业首选的黄酮提取方法，但其溶剂用量大，提取效率不高。诸如超临界萃取、超声波辅助提取等现代提取技术，提取效率高、溶剂用量少，节省了人力物力，但其对设备要求高，且部分提取技术对设备参数要求精细，常应用于小型科研试验中，无法应用于工业生产。

技术实现思路

[0009]本专利技术的主要目的在于提供一种山楂籽中总黄酮的提取、分离、纯化方法，采用该方法制备的总黄酮含量高，有效成分损失少。
[0010]为实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：
[0011]一种山楂籽中总黄酮的提取、分离、纯化方法，含有以下步骤：
[0012]步骤A，提取过程，山楂籽粉碎，加入复合酶，调节pH至4
‑
6，在40
‑
50℃温度下酶解1
‑
3小时，调节pH至5
‑
8，在50
‑
70℃温度下继续酶解1
‑
3小时，酶解后去除挥发性成分；加入乙醇，调节乙醇体积分数为50
‑
80％，回流提取1
‑
3小时，提取液备用；
[0013]步骤B，调节提取液pH为4
‑
6，中加入壳聚糖
‑
海藻酸钠复合物，低温静置，除去沉淀物，浓缩，大孔树脂吸附；吸附后的大孔树脂依次采用纯化水、体积分数为50
‑
80％的乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得粗品，备用；
[0014]步骤C，步骤B所得粗品，进行凝胶柱层析，甲醇洗脱，收集红色色带，浓缩，干燥，即得。
[0015]进一步的，步骤A中，复合酶含有木质素酶、木聚糖酶、纤维素酶、β
‑
葡糖苷酶，使用比例为1:0.5
‑
1.5:2
‑
6:1
‑
4；进一步优选的，使用比例为1:0.8
‑
1:2.5
‑
4:2
‑
3。
[0016]所述复合酶的使用量为山楂籽重量的0.05
‑
0.2％；进一步优选的，所述的复合酶的使用量为山楂籽重量的0.1
‑
0.15％。
[0017]步骤B中，壳聚糖
‑
海藻酸钠复合物中，壳聚糖、海藻酸钠的比例为2
‑
7:3
‑
10；进一步优选的，壳聚糖、海藻酸钠的使用比例为3
‑
5:4
‑
7。
[0018]所述的壳聚糖
‑
海藻酸钠复合物的使用量为10
‑
20g/L；进一步优选为13
‑
16g/L。
[0019]步骤B中，大孔树脂为HPD
‑
600大孔树脂；步骤C中，葡聚糖凝胶柱为Sepharose 6B琼脂糖凝胶。
[0020]具体的，上述方法含有以下步骤：
[0021]步骤A，提取过程，山楂籽粉碎，加入复合酶，调节pH至4.5
‑
5.5，在40
‑
50℃温度下酶解1
‑
3小时，调节pH至6
‑
7.5，在50
‑
70℃温度下继续酶解1
‑
3小时，酶解后采用蒸馏方式，去除挥发性成分；加入乙醇，调节乙醇体积分数为60
‑
70％，回流提取1
‑
3小时，提取液备用；
[0022]步骤B，调节提取液pH为4
‑
6，中加入壳聚糖
‑
海藻酸钠复合物，低温静置，除去沉淀物，浓缩，HPD
‑
600大孔树脂吸附；吸附后的大孔树脂依次采用纯化水、体积分数为60
‑
70％的乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得粗品，备用；
[0023]步骤C，步骤B所得粗品，进行Sepharose 6B琼脂糖凝胶层析，甲醇洗脱，收集红色色带，浓缩，干燥，即得。
[0024]本专利技术具有以下有益效果：
[0025]1.本专利技术研究过程中发现，山楂籽中的挥发性成分对黄酮的提取有较大的影响，因此采用先去除山楂籽中挥发油等挥发性成分后，再进行提取，可明显提高黄酮提取物的提取率。
[0026]2.在去除山楂籽中挥发性成分时，采用了先进行酶解的方式，在不同的pH及温度下，复合酶充分发挥了酶解的作用，极大的提高了山楂籽中挥发性成分的去除作用，有利于黄酮提取物的提取。
[0027]3.在分离阶段，先采用壳聚糖
‑
海藻酸钠复合物去除提取物中的杂质，更有利于大孔树脂对黄酮成分的吸附，提高黄酮提取物中总黄酮的含量。
具体实施例
[0028本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种山楂籽中总黄酮的提取、分离、纯化方法，含有以下步骤：步骤A，提取过程，山楂籽粉碎，加入复合酶，调节pH至4
‑
6，在40
‑
50℃温度下酶解1
‑
3小时，调节pH至5
‑
8，在50
‑
70℃温度下继续酶解1
‑
3小时，酶解后去除挥发性成分；加入乙醇，调节乙醇体积分数为50
‑
80％，回流提取1
‑
3小时，提取液备用；步骤B，调节提取液pH为4
‑
6，加入壳聚糖
‑
海藻酸钠复合物，低温静置，除去沉淀物，浓缩，大孔树脂吸附；吸附后的大孔树脂依次采用纯化水、体积分数为50
‑
80％的乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，得粗品，备用；步骤C，步骤B所得粗品，进行凝胶柱层析，甲醇洗脱，收集红色色带，浓缩，干燥，即得。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤A中复合酶含有木质素酶、木聚糖酶、纤维素酶、β
‑
葡糖苷酶；所述的木质素酶、木聚糖酶、纤维素酶、β
‑
葡糖苷酶使用比例为1:0.5
‑
1.5:2
‑
6:1
‑
4。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘雪平，张永涛，赵莉，崔晓梅，刘凌霄，顾召帅，李静，唐洪杰，王靖，黄莉，
申请(专利权)人：浙江大学山东临沂现代农业研究院，
类型：发明
国别省市：