肿瘤乏氧微环境响应型抗体-azo-PEG制造技术

本发明专利技术公开了肿瘤乏氧微环境响应型抗体

【技术实现步骤摘要】
肿瘤乏氧微环境响应型抗体
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azo
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PEG
5000
交联物及制备方法和应用


[0001]本专利技术属于医药领域，具体地涉及一种肿瘤乏氧微环境响应型抗体
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azo
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PEG5000交联物及制备方法和应用。

技术介绍

[0002]抗体是生物大分子中临床应用范围最广、极具竞争力的诊断试剂和治疗药物。在抗原结合特异性保证的基础上，抗体作为靶标识别探针，在肿瘤诊断和治疗中起着至关重要作用。与小分子药物相比，抗体药物具有高特异性、多功能活性和良好的生物相容性，使得此类药物具有易临床转化成功的优势。
[0003]到目前为止，已有100多株单抗被美国食品和药物管理局(FDA)批准。主要用于治疗包括癌症、感染、自身免疫性疾病和多种慢性顽固性疾病在内的不同类型疾病。经过近二百年持续发展，从最早的鼠源性单抗药物临床获批应用，到其它形式抗体如抗体片段、嵌合抗体、双特异性抗体(BsAb)、纳米抗体(Nanobody)及多种形式抗体衍生物如抗体
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药物结合物(ADC)和抗体融合蛋白等抗体药物相继成功获批在临床广泛应用于以肿瘤为主的多种疾病治疗。
[0004]然而，由于绝大多数抗原在非靶标组织也有不同程度表达，抗体的实际诊疗效果取决于靶组织中抗原分子的相对表达水平。对于基于抗体的肿瘤靶向诊断和治疗而言，迄今还没有发现肿瘤特异表达的生物标记，尤其是只表达在肿瘤细胞表面的特异性靶点，使得抗体在临床实际应用时出现不同程度的“交叉脱靶效应”(on
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target off
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tumor effect)。这不仅给实际治疗中带来了各种各样的抗体毒副反应，限制了抗体药物最大给药剂量，削弱了抗体治疗应有的最佳疗效，还带来了干扰的诊断或显像信号。
[0005]乏氧是实体肿瘤最常见微环境特征，并且与肿瘤快速进展和对化疗耐药形成密切相关。因此基于肿瘤组织独特的乏氧微环境特征，可利用其成为抗肿瘤治疗的新靶点。
[0006]因此，研制一种对乏氧微环境刺激响应的新型抗体，对消除抗体药物毒副反应、提升最大药物耐受剂量、扩展抗体治疗最佳窗口、延长患者靶向治疗后生存期具有有重要意义，且将来临床转化后也将具有良好的应用前景和泛癌普适性。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的是克服现有技术中治疗性抗体药物研发中普遍存在的交叉脱靶问题，提供一种肿瘤乏氧微环境响应型抗体
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azo
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PEG
5000
交联物。
[0008]本专利技术的第二个目的是提供一种肿瘤乏氧微环境响应型抗体
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azo
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PEG
5000
交联物的制备方法；
[0009]本专利技术的第三个目的是提供一种肿瘤乏氧微环境响应型抗体
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azo
‑
PEG
5000
交联物在制备荷瘤裸鼠模型中诊断显像剂的应用。
[0010]本专利技术的第四个目的是提供一种肿瘤乏氧微环境响应型抗体
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azo
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PEG
5000
交联物
在制备抗肿瘤靶向治疗药物中的应用。
[0011]本专利技术的技术方案概述如下：
[0012]肿瘤乏氧微环境响应型抗体
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azo
‑
PEG
5000
交联物，用式I所示：
[0013][0014]其中：R为亲本抗体HcHAb18单抗，所述交联物简称R
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azo
‑
PEG
5000
；azo
‑
PEG
5000
连接在亲本抗体表面赖氨酸上。
[0015]肿瘤乏氧微环境响应型抗体
‑
azo
‑
PEG
5000
交联物的制备方法，包括如下步骤：在pH＝9碱性条件下，将PEG
5000
‑
azo
‑
NHS与亲本抗体在10℃混合反应，反应产物经超滤纯化除盐后，得到肿瘤乏氧微环境响应型抗体
‑
azo
‑
PEG
5000
交联物。
[0016]所述PEG
5000
‑
azo
‑
NHS用下述方法制成：
[0017]1)在氮气保护下，搅拌下，在二氯甲烷中加入PEG
5000 1，降温到0
‑
5℃，加入氢氧化钠水溶液，控温0
‑
5℃，滴加对甲苯磺酰氯的二氯甲烷溶液，反应，得到化合物2即PEG
5000
对甲苯磺酯；PEG
5000 1结构式为
[0018]2)在氮气保护下，在搅拌下，在容器中加入水和对氨基苄醇3，在0
‑
5℃下加入浓盐酸，控温0
‑
5℃下滴加亚硝酸钠水溶液，加完后保温1个小时，滴加苯酚4的碳酸钠水溶液溶液，加完后自然升温到室温，室温搅拌3个小时，得固体化合物5即4
‑
((4
‑
(羟基甲基)苯基)偶氮苯)苯酚；
[0019]3)在氮气保护下,搅拌下，在容器中加入二甲基甲酰胺、化合物2和化合物5，80℃反应，得黄色固体化合物6即PEG
5000
‑
偶氮苯
‑
苄醇；
[0020]4)将化合物6溶解在干甲苯中，减压除去溶剂，再溶解在干二氯甲烷中，加入N,N'
‑
二琥珀酰碳酸酯，再加入三乙胺，室温下搅拌，得到黄色固体化合物7，即PEG
5000
‑
偶氮苯
‑
N
‑
羟基琥珀酰亚胺酯，简称为PEG
5000
‑
azo
‑
NHS；
[0021]合成路线为：
[0022][0023]上述肿瘤乏氧微环境响应型抗体
‑
azo
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PEG
5000
交联物在制备荷瘤裸鼠模型中诊断显像剂的应用。
[0024]上述肿瘤乏氧微环境响应型抗体
‑
azo
‑
PEG
5000
交联物在制备抗肿瘤靶向治疗药物中的应用。
[0025]本专利技术的优点：
[0026]本专利技术通过PEG
5000
‑
azo
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NHS与抗体游离赖氨酸伯胺基交联反应的抗体改造方法，可条件依赖的选择性调控亲本抗体活性，从而制备出类似前药的抗体交联物，达到改造后抗体赋予其对乏氧肝癌精准选择性靶向潜能。
[0027]本专利技术中，做所述的模型抗体为抗包括肝癌在内的针对多种实体肿瘤的HcHAb18(美妥珠)单抗，并已在临床试验中治疗应用。<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.肿瘤乏氧微环境响应型抗体
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azo
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PEG
5000
交联物，其特征是用式(I)所示：其中：R为亲本抗体HcHAb18单抗，所述交联物简称R
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azo
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PEG
5000
；azo
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PEG
5000
连接在亲本抗体表面赖氨酸上。2.权利要求1的肿瘤乏氧微环境响应型抗体
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azo
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PEG
5000
交联物的制备方法，其特征是包括如下步骤：在pH＝9碱性条件下，将PEG
5000
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azo
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NHS与亲本抗体在10℃混合反应，反应产物经超滤纯化除盐后，得到肿瘤乏氧微环境响应型抗体
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azo
‑
PEG
5000
交联物。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征是所述PEG
5000
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azo
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NHS用下述方法制成：1)在氮气保护下，搅拌下，在二氯甲烷中加入PEG
5000
(1)，降温到0
‑
5℃，加入氢氧化钠水溶液，控温0
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5℃，滴加对甲苯磺酰氯的二氯甲烷溶液，反应，得到化合物(2)即PEG
5000
对甲苯磺酯；PEG
5000
(1)...

【专利技术属性】
技术研发人员：张思河，齐方正，王博，苏慧珊，钱罗蒙，王洋，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：