MRG15作为衰老标记物的应用制造技术

本发明专利技术公开了MRG15作为衰老标记物的应用。本发明专利技术首次公开一种新型的衰老标记物——死亡因子相关蛋白MRG15。MRG15在衰老的间充质干细胞中表达量显著下调，并且MRG15的敲除能够通过影响细胞周期以及衰老相关蛋白的表达诱导细胞衰老。本发明专利技术揭露了通过检测细胞中MRG15的表达从而判断衰老，可发展为elisa试剂盒对MRG15进行定量，以及MRG15敲除诱导MSC衰老的作用机制。老的作用机制。老的作用机制。

【技术实现步骤摘要】
MRG15作为衰老标记物的应用


[0001]本专利技术属于生物医学类
，涉及死亡因子相关蛋白MRG15在衰老过程中作为一种新型生物标记物的鉴定，可以预测MSC等细胞的衰老与健康状态，具体涉及MRG15作为衰老标记物的应用。

技术介绍

[0002]细胞衰老领域已成为亟待发展的重要科学分支，它将为有效治疗与衰老相关疾病以及延长人类健康寿命带来了巨大希望。但是由于该领域仍处于起步阶段，关于细胞衰老的表征及其在生物体衰老和生理学中的地位还存在许多困惑，如何定义细胞衰老水平仍是亟待解决的关键问题。
[0003]MORF蛋白家族与细胞增殖能力的降低以及细胞衰老密切相关，该蛋白家族最初被定义是源于其蛋白家族成员MORF4的过表达可以诱导细胞衰老。有研究人员推测该家族另一成员MRG15可能通过与MORF4相互作用在细胞衰老过程中发挥作用，但并未有深入研究。此外，有研究表明敲除了MRG15的小鼠胚胎，大多数在出生前便会死亡，并且胚胎呈现白色，即可能存在血管形成以及造血的缺陷。而能够存活的小鼠在出生后不久便会死亡，且多个器官系统严重异常，MRG15敲除的小鼠胚胎成纤维细胞MEFs的生长曲线明显低于野生型MEFs。这些早期研究结果表明MRG15可能影响细胞的增殖功能，但是目前MRG15与细胞衰老功能相关的研究结果目前尚未有明确报道。
[0004]在本专利技术中，申请人首次发现MRG15可以作为一种新型衰老标志物。具体的，本专利技术公开了MRG15在衰老的细胞中表达量显著下降，并且MRG15的敲除能够诱导细胞衰老，在间充质干细胞和人胚肾上皮293T细胞中均观察到。此外，本专利技术亦揭示了MRG15的敲除诱导细胞发生衰老的作用机制，即通过影响细胞衰老通路中相关基因cdkn2b、rb1、rbl1、cdk2、e2f1的表达，从而影响细胞衰老。
[0005]衰老是一个复杂的过程，找到衰老标记物对细胞衰老进行表征成为细胞衰老研究中不可或缺的一部分。用特定衰老标记物识别衰老的细胞，比如衰老的MSC，有助于控制衰老的分子过程，从而确定衰老相关的MSC功能障碍的影响因素，对优化MSC的临床治疗效果甚至逆转MSC的功能障碍都起着关键性作用，帮助恢复个体的健康以及减轻衰老相关疾病。并且，通过模拟或者靶向衰老标记物对于后续抗衰药物的设计能够起到指导作用。

技术实现思路

[0006]本专利技术的第一个目的是针对现有技术的不足，提出了MRG15作为一种衰老标记物的应用。
[0007]作为优选，MRG15在衰老细胞中的表达量降低。
[0008]作为优选，抑制MRG15的表达减少细胞增殖，诱导细胞衰老。
[0009]作为优选，MRG15通过影响细胞衰老通路中相关基因cdkn2b、rb1、rbl1、cdk2、e2f1的表达。
[0010]本专利技术的第二个目的是提供一种衰老标记物的检测产品，包括检测MRG15的试剂。
[0011]作为优选，所述检测产品包括试剂盒或芯片。
[0012]作为优选，所述芯片包括固相载体以及附着于其上的特异性识别MRG15的探针。
[0013]作为优选，所述试剂盒包括特异性识别MRG15的探针。
[0014]本专利技术的第三个目的是提供生物标记物MRG15在制备延缓衰老产品中的应用。
[0015]本专利技术的有益效果在于：
[0016]本专利技术首次提出MRG15作为一种新型衰老标记物的作用及机理，主要以人间充质干细胞MSC为模型，公开了如下机理：在衰老的MSC细胞中MRG15的表达量显著降低，并且抑制细胞中MRG15的表达可以减少细胞的增殖以及诱导细胞衰老，RNA
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seq结果表明这种效应是通过影响细胞衰老通路中相关基因cdkn2b、rb1、rbl1、cdk2、e2f1的表达产生的。同时还发现在人胚肾上皮293T细胞中可起相同的作用。本专利技术揭露了通过检测细胞中MRG15的表达从而判断衰老，可发展为elisa试剂盒对MRG15进行定量，以及MRG15敲除诱导MSC衰老的作用机制。
附图说明
[0017]图1为MRG15在年轻和衰老MSC中表达量的比较结果；其中A为MRG15在年轻和衰老MSC中表达量的westernblot结果分析图，MRG15在衰老的MSC中表达明显降低，B为MRG15在年轻和衰老MSC中表达的相对丰度值；
[0018]图2为正常MSC以及敲除了MRG15的MSC的SA
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b
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gal染色结果，敲除了MRG15的MSC中SA
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b
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gal染色呈现蓝色的阳性细胞显著增加；
[0019]图3为正常MSC以及敲除了MRG15的MSC的累计细胞群体倍增曲线；
[0020]图4为正常人胚肾上皮细胞293T以及敲除了MRG15的293T细胞的SA
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b
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gal染色结果，敲除了MRG15的293T细胞中SA
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b
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gal染色呈现蓝色的阳性细胞显著增加；
[0021]图5为293T以及敲除了MRG15的293T细胞中衰老相关基因p16的表达差异；
[0022]图6为正常MSC以及敲除了MRG15的MSC中差异表达基因的聚类分析热图；
[0023]图7为正常MSC以及敲除了MRG15的MSC中与细胞衰老通路相关基因表达量的差异分析。
具体实施方式
[0024]下面结合实施例和附图对本专利技术作进一步的说明，而非限定本专利技术。
[0025]本专利技术中使用的不同代数的间充质干细胞MSC，通过westernblot分析死亡因子相关蛋白MRG15在年轻细胞和衰老细胞中的表达量。接着设计shRNA
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MRG15，包慢病毒侵染年轻MSC制备MRG15敲除的MSC，传代，一方面计算累计细胞群体倍增指数，另一方面对敲除以及未敲除的MSC进行SA
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β
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gal染色。并对敲除以及未敲除的MSC进行RNA
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seq分析观察MRG15敲除对MSC衰老影响的分子机制。另外，还采用HEK293T细胞，同样包慢病毒侵染293T细胞制备MRG15敲除的293T细胞，并对敲除以及未敲除的293T细胞进行SA
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β
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gal染色，并通过免疫印记westernblot分析对已知衰老相关基因p16表达分析验证。所有实验结果均是由独立的三次重复实验得到，采用不配对的t检验分析数据，均用士SEM表示。P值<0.05为显著性差异标准(*<0.05，**<0.01)。
[0026]实施例一：MRG15与细胞衰老的相关性
[0027]通过Westernblot检测MRG15与细胞衰老的相关性，实验证明原代培养至衰老的MSC细胞中MRG15的表达量显著降低；通过构建MRG15基因敲除的稳转株，与正常细胞进行SA
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.MRG15作为一种衰老标记物的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，MRG15在衰老细胞中的表达量降低。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，抑制MRG15的表达减少细胞增殖，诱导细胞衰老。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，MRG15的敲除影响细胞衰老通路中相关基因cdkn2b、rb1、rbl1、cdk2、e2f1的表达，从而影响MSC细胞衰老。5.一种衰老标记物的检...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪虎，李玉文，
申请(专利权)人：杭州师范大学，
类型：发明
国别省市：