一种黄芪降解多糖的制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及中药加工技术领域，公开了一种黄芪降解多糖的制备方法和应用，采用超声辅助H2O2‑

【技术实现步骤摘要】
一种黄芪降解多糖的制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及中药加工
，更具体的说是涉及一种黄芪降解多糖的制备方法和应用。

技术介绍

[0002]黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根，是一种常见的中药材植物，主产于山西、甘肃、黑龙江等地。黄芪作为传统中药，具有补气固表、增强免疫力、抗菌消炎等功效。黄芪中主要含有多糖、皂苷、黄酮等多种化学成分，其中以黄芪多糖(Astragalus polysaccharides，APS)的应用研究较多。APS具有抗氧化、抗炎、抑菌和免疫调节等多种生理活性。然而天然APS由于分子量大，黏度高、水溶性差，难以穿透多个细胞膜屏障，无法进入生物体内发挥功能活性。因此降解APS，制备低分子量的黄芪降解多糖(Degradation Astragalus polysaccharides，DAPS)，对提高APS的生物活性具有重要意义。
[0003]降解多糖主要有化学降解法、物理降解法、酶降解法，化学降解又包括氧化、酸、碱降解等。近年来，H2O2氧化法是应用较多的多糖降解方法，利用H2O2分解产生的羟自由基氧化断裂多糖间糖苷键，该方法绿色环保且可控性强。但由H2O2自发产生羟自由基进行多糖降解过程缓慢。
[0004]阿尔兹海默氏病(Alzheimer disease，AD)是一种严重的神经退行性疾病，同时伴随记忆力和认知能力的丧失，最终导致残疾和依赖性。AD的主要特征在于细胞外老年斑(SP)和细胞内神经原纤维缠结(NFT)，斑块由β淀粉样蛋白(Aβ)的聚集体和原纤维的沉积物组成，而NFT是由高磷酸化微管相关蛋白Tau产生的。AD发病机理复杂，仍不清楚。有几种相互竞争的假设，包括遗传学，淀粉样蛋白假说，胆碱能假说，自由基损伤假说，钙稳态平衡失衡假说和凋亡假说。秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans，C.elegans)简称线虫，属于线形动物门线虫纲，是研究物质抗衰老的重要模式生物之一，由于其非常适合阐明AD治疗药物引起药理作用及各种分子机制，已被广泛的运用到AD的研究领域。CL4176使用肌肉细胞特异性启动子myo－3来控制Aβ的表达，使线虫表型上出现抽搐症状，复制了AD的症状和病理变化，从而可以明显地区分转基因的线虫。
[0005]因此，如何提供一种提取率及纯度高，又同时具有抗CL4176秀丽隐杆线虫体内Aβ蛋白毒性的黄芪降解多糖的制备方法是本领域技术人员亟待解决的难题。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术提供了一种黄芪降解多糖的制备方法和应用，采用超声辅助H2O2‑
Vc体系降解黄芪多糖(APS)得到黄芪降解多糖(DAPS)，H2O2能够氧化Vc，快速生成羟自由基，多糖的降解速率明显提高，同时，超声辅助氧化降解可以将两种方法的优势结合，协同发挥作用。本专利技术的DAPS能够延迟CL4176线虫寿命，改善CL4176线虫瘫痪情况，提高该线
虫运动能力、热应激能力及氧化应激能力。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0008]一种黄芪降解多糖的制备方法，包括以下步骤：
[0009](1)向黄芪中加入乙醇溶液进行回流脱脂，过滤、阴干，得到脱脂黄芪，然后加入去离子水浸泡，进行微波提取、过滤，得到滤液；
[0010](2)向滤液中加入无水乙醇进行醇沉，离心，将沉淀复溶，减压浓缩，冷冻干燥，得到黄芪粗多糖；
[0011](3)将黄芪粗多糖配置成水溶液，加入木瓜蛋白酶进行酶解，然后离心抽滤得到上清液，加入无水乙醇进行醇沉，离心，将沉淀复溶，减压浓缩，冷冻干燥，得到黄芪多糖；
[0012](4)将黄芪多糖配置成水溶液，调节溶液pH，然后加入H2O2和Vc，通过超声辅助H2O2联合Vc降解黄芪多糖，得到黄芪降解多糖。
[0013]优选的，步骤(1)中所述脱脂黄芪和去离子水的料液比为1：10～14(g
·
mL
‑1)；所述乙醇溶液的体积浓度为75％。
[0014]优选的，步骤(1)中所述微波提取的功率为500～600W，温度为70～90℃，时间为2～3h，次数为3次。
[0015]优选的，步骤(2)和步骤(3)中：加入无水乙醇至乙醇体积浓度为85％；所述醇沉的温度为4℃，时间为48h；所述离心的条件为，在3500～4000r
·
min
‑1下离心15～20min。
[0016]上述技术方案的有益效果是：该醇沉条件下能得到分子量范围最大的黄芪多糖，醇沉浓度达到85％，不再有黄芪多糖的析出。
[0017]优选的，步骤(3)中所述水溶液的浓度为10～15mg
·
mL
‑1，黄芪粗多糖与木瓜蛋白酶的质量比为4～6：1。
[0018]上述技术方案的有益效果是：最优的除去黄芪粗多糖中的蛋白质，并不破坏黄芪粗多糖的结构，最大程度保证多糖的提取率。
[0019]优选的，步骤(3)中所述酶解的条件为，先在55℃下酶解3h，然后加热至95℃灭酶10min。
[0020]优选的，步骤(4)中所述水溶液的浓度为10～15mg
·
mL
‑1，调节溶液pH至3～4，H2O2的浓度为7.5～10mmol
·
L
‑1，H2O2与VC的质量比为1：0.8～1。
[0021]上述技术方案的有益效果是：在H2O2体系中加入Vc，H2O2能够氧化Vc，快速生成羟自由基，多糖的降解速率明显提高，同时，超声辅助氧化降解可以将两种方法的优势结合，协同发挥作用。
[0022]优选的，步骤(4)中所述超声的温度为60～70℃，功率为800～1000W，降解时间为3～4h。
[0023]根据上述方法制备得到的一种黄芪降解多糖。
[0024]根据上述的一种黄芪降解多糖在制备治疗阿尔兹海默症药物中的应用。
[0025]本专利技术采用秀丽隐杆线虫CL4176模型的阿尔兹海默症线虫模型，应用本专利技术制备的DAPS给药，结果表明，本专利技术的DAPS能够延迟CL4176线虫寿命，改善CL4176线虫瘫痪情况，提高该线虫运动能力、热应激能力及氧化应激能力。
[0026]经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术提供了一种黄芪降解多糖的制备方法和应用，具有如下优异效果：
[0027](1)本专利技术采用自由基联合超声波降解法的多糖降解方法，不仅可以解决大分子量黄芪多糖溶解性差、生物利用度低的缺点，还能提高黄芪多糖的纯度，并提高黄芪多糖的生物活性。
[0028](2)本专利技术公开的制备方法具有操作方便、省时高效和无污染等优点。
[0029](3)本专利技术制备的黄芪降解多糖具有降低CL4176线虫体内Aβ毒性的功效。
附图本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种黄芪降解多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)向黄芪中加入乙醇溶液进行回流脱脂，过滤、阴干，得到脱脂黄芪，然后加入去离子水浸泡，进行微波提取、过滤，得到滤液；(2)向滤液中加入无水乙醇进行醇沉，离心，将沉淀复溶，减压浓缩，冷冻干燥，得到黄芪粗多糖；(3)将黄芪粗多糖配置成水溶液，加入木瓜蛋白酶进行酶解，然后离心抽滤得到上清液，加入无水乙醇进行醇沉，离心，将沉淀复溶，减压浓缩，冷冻干燥，得到黄芪多糖；(4)将黄芪多糖配置成水溶液，调节溶液pH，然后加入H2O2和Vc，通过超声辅助H2O2联合Vc降解黄芪多糖，得到黄芪降解多糖。2.根据权利要求1所述的一种黄芪降解多糖的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述脱脂黄芪和去离子水的料液比为1：10～14(g
·
mL
‑1)；所述乙醇溶液的体积浓度为75％。3.根据权利要求1所述的一种黄芪降解多糖的制备方法，其特征在于，步骤(1)中所述微波提取的功率为500～600W，温度为70～90℃，时间为2～3h，次数为3次。4.根据权利要求1所述的一种黄芪降解多糖的制备方法，其特征在于，步骤(2)和步骤(3)中：加入无水乙醇至乙醇体积浓度为85％；所述醇沉的温度为4℃，时间为48h；所述离心的条件为...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵宏，刘嘉悦，汤威威，高琪，邵梦婷，
申请(专利权)人：佳木斯大学，
类型：发明
国别省市：