本发明专利技术涉及生物医学技术领域，特别涉及生物标志物PGLYRP2及其试剂盒在诊断系统性红斑狼疮活动度中的应用。本发明专利技术提供了一种首创的、易于临床操作的诊断系统性红斑狼疮活动度的生物标志物PGLYRP2以及其试剂盒，该生物标志物可灵敏地、特异地诊断系统性红斑狼疮的疾病活动以及脂代谢异常；本发明专利技术首次将易变位点做成试剂盒并发现在系统性红斑狼疮患者中进行高效表达，因此试剂盒可用于评估系统性红斑狼疮疾病的疾病活动。狼疮疾病的疾病活动。狼疮疾病的疾病活动。
【技术实现步骤摘要】
生物标记物PGLYRP2及其试剂盒的应用
[0001]本专利技术涉及生物医学
，特别涉及生物标志物PGLYRP2在制备诊断系统性红斑狼疮或评估疾病活动度的产品中的应用。
技术介绍
[0002]系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)好发于育龄期女性，是一种多器官受累的慢性自身免疫性疾病，影响多个终末器官，包括肾脏、大脑、心脏等。其中肾脏累及是系统性红斑狼疮发病率和死亡率的主要原因，影响约60％的患者，是影响系统性红斑狼疮预后主要原因之一。除了传统的狼疮病情活动的常规评估指标，如抗双链DNA、补体C3，C4等，以及传统的肾损伤标志物如肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)和蛋白尿等，仍需要更多对系统性红斑狼疮疾病活动敏感性强并能预测更多脏器组织损害或不良预后的生物标志物出现。
[0003]研究发现系统性红斑狼疮疾病活动性与心脏代谢风险状态相关，自身抗体和免疫复合物可通过损伤血管内皮细胞，影响脂蛋白代谢，使得内皮损伤与动脉粥样硬化的保护机制失去平衡，最终导致动脉粥样硬化，系统性红斑狼疮患者动脉粥样硬化、心肌梗死、心力衰竭等的发生率与健康人群相比增加2倍。血脂异常在系统性红斑狼疮患者动脉粥样硬化中起着关键作用，但确切机制尚不明确。目前为止，对于系统性红斑狼疮疾病活动与血脂代谢异常相关研究进展甚少。
[0004]肽聚糖识别蛋白2(Peptidoglycan recognition protein 2,PGLYRP2)，是一种先天免疫模式识别受体，在肝脏组织中特异性表达并参与调节炎症。PGLYRP2可以分离交联的细菌肽聚糖(PGN)，通过水解N
‑
乙酰氨基甲酸和L
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丙氨酸之间的酰胺键，从而将其消化成碎片。关于PGLYRP2与自身免疫性疾病相关研究极少，有研究显示在关节炎诱导模型中，PGLYRP2作为诱导细胞因子、趋化因子及其一些受体是必需的；还有报道称，抗PGLYRP2可能为类风湿关节炎的新型标志物；PGLYRP2为胆固醇逆转运(RCT)和血脂异常相关蛋白，PGLYRP2在维持先天免疫和慢性炎症方面很重要，高水平的PGLYRP2诱导长期炎症，促进动脉粥样硬化病变的形成，可导致RCT受损和慢性炎症，导致动脉粥样硬化和心肌梗塞。还有报道称PGLYRP2还参与肿瘤微环境中的免疫反应、感染性疾病、炎症反应和脑部疾病等活动。截止到目前，还没有研究描述过PGLYRP2在系统性红斑狼疮中的表达情况及与疾病相关性。因此，本研究旨在检测系统性红斑狼疮病例的血清PGLYRP2水平，并探讨其与疾病活动、脏器受累的联系。
[0005]近年来对系统性红斑狼疮发病机制的研究不断深入，但是仍然尚无能同时特异性评估系统性红斑狼疮疾病活动度、脏器组织受累及血脂代谢异常的生物学标志物被广泛认可并接受。寻找一种在系统性红斑狼疮的早期阶段能够有效预测早期肾脏受累的生物标志物对改善狼疮肾炎的治疗及预后非常重要。我们的研究发现了一种便于临床操作的生物学标志物，既与系统性红斑狼疮活动指数显著相关，可作为系统性红斑狼疮临床疾病活动度判断指标之一，且是系统性红斑狼疮肾炎恶化的预测因子，同时与脂代谢指标相关，可为临
床同步预测系统性红斑狼疮疾病活动及脂代谢异常相关疾病发病提供预测价值。
技术实现思路
[0006]本专利技术首次发现血清PGLYRP2在系统性红斑狼疮患者血清表达水平是增高的，是系统性红斑狼疮患者全身疾病活动良好指标，同时可作为肾功能纵向恶化的预测因素，也是狼疮性肾炎预后不良的危险因素；并且首次发现PGLYRP2表达水平与系统性红斑狼疮脂质代谢异常相关，从而预测系统性红斑狼疮心血管疾病发生风险。
[0007]有鉴于此，本专利技术提供了生物标志物PGLYRP2在制备诊断系统性红斑狼疮或评估疾病活动度的产品中的应用。本专利技术克服现有技术诊断及评估系统性红斑狼疮疾病活动度的缺陷，提供一种新型诊断系统性红斑狼疮、评估其疾病活动度的生物标志物。
[0008]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0009]本专利技术提供了一种系统性红斑狼疮进行辅助诊断的标记物，更为准确的测定了系统性红斑狼疮，对已形成的系统性红斑狼疮进行确诊并评价其活动度。
[0010]一种检测系统性红斑狼疮的基因表达谱检测试剂盒，所述试剂盒含有检测PGLYRP2蛋白或其蛋白片段特异结合的物质；和/或，与PGLYRP2基因或其基因片段特异结合的物质。
[0011]所与PGLYRP2基因或其基因片段特异结合的物质包括引物对、探针、反义寡核苷酸、适配体中的一种或几种。
[0012]所述引物对包括：扩增PGLYRP2基因的引物对，如下：
[0013][0014]所述PGLYRP2基因的检测位点为rs34440547、rs892145、rs74688727、rs3813135，以上位点的上下游引物如下：
[0015][0016]所述扩增引物用于PGLYRP2的基因表达水平。
[0017]一种与检测系统性红斑狼疮相关的SNP位点，所述的SNP位点位于PGLYRP2基因编码区，为整个基因的序列第3407位，其碱基为A/G；PGLYRP2基因编码区，为整个基因的序列第7216位，其碱基为T；PGLYRP2基因编码区，为整个基因的序列第7692位，其碱基为T；PGLYRP2基因编码区，为整个基因的序列第7889位，其碱基为A中的任意一种或二种以上组合。
[0018]一种用于检测系统性红斑狼疮的试剂盒，包括以下试剂：
[0019](1)试剂1：第一次长片段PCR扩增的试剂；
[0020](2)试剂2：第二次高含量PCR扩增的试剂；
[0021](3)引物与探针：所述用于PCR扩增的试剂包含本专利技术所述的引物组和DNA探针；
[0022](4)内标物：管家基因引物对。
[0023]所述DNA探针的核苷酸序列如下：
[0024]核苷酸序列
[0025]探针1CGCCTTATCTGGGCCGCCCGAAGCTGCTGCAGCTGCCGCTGGG
[0026]探针2CGCCTTATCCGGGCCGCCCGAAGCTGCTGCAGCTGCCGCTGGG
[0027]探针3TTAACCAAGGCCTTCCTCAATGGCGCCCTGGATGG
[0028]探针4TGGTACTGGCACCTGATGGCTCGACCGTGGCTGTGGA
[0029]探针5AAAGTGCCAGCTGCCAAGACCAGACACACAGCTTCT
[0030]所述DNA探针的两端分别标记有荧光基团和淬灭基团，所述荧光基团为FAM，所述淬灭基团为Eclipse。
[0031]一种用于检测系统性红斑狼疮的试剂盒的使用方法，所述试剂盒的检测方法包括以下步骤：
[0032]1)核酸提取：提取待测样本的DNA；
[0033]制备反应体系：制备15μL定量PCR反应体系，包括模板DNA、dN本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种检测系统性红斑狼疮活动度的基因表达谱检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有检测PGLYRP2蛋白或其蛋白片段特异结合的物质；和/或，与PGLYRP2基因或其基因片段特异结合的物质。2.根据权利要求1所述的基因表达谱检测试剂盒，其特征在于，所与PGLYRP2基因或其基因片段特异结合的物质包括引物对、探针、反义寡核苷酸、适配体中的一种或几种。3.根据权利要求2所述的基因表达谱检测试剂盒，其特征在于，所述引物对包括：扩增PGLYRP2基因的引物对，如下：4.根据权利要求2所述的基因表达谱检测试剂盒，其特征在于，所述PGLYRP2基因的单核苷酸多态性位点为rs34440547、rs892145、rs74688727、rs3813135。5.根据权利要求4所述的基因表达谱检测试剂盒，其特征在于，所述rs34440547、rs892145、rs74688727、rs3813135的上下游引物如下：6.根据权利要求1所述的基因表达谱检测试剂盒，其特征在于，所述扩增引物用于PGLYRP2基因的表达水平。7.一种与检测系统性红斑狼疮活动度相关的SNP位点，其特征在于，所述的SNP位点位于PGLYRP2基因编码区，为整个序列第3407位，其碱基为A或G；PGLYRP2基因编码区，为整个序列第7216位，其碱基为T；PGLYRP2基因编码区，为整个序列第7692位，其碱基为T；PGLYRP2基因编码区，为整个序列第7889位，其碱基为A中的任意一种或二种以上组合。8.一种用于检测系统性红斑狼疮活动度的试剂盒，包括以下试剂：(1)试剂1：第一次长片段PCR扩增的试剂；(2)试剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：李慧，
申请(专利权)人：山东中医药大学附属医院，
类型：发明
国别省市：
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