本发明专利技术公开了一种生物样品中芒柄花黄素及其代谢产物的检测方法，该检测方法包括：(1)将生物样品进行处理，获得待测溶液；其中，所述生物样品包括生物体吸收芒柄花黄素后的含有芒柄花黄素及其代谢产物的含药血浆样品、含药尿液样品、含药粪便样品、含药肝脏样品和/或含药肝微粒体样品；(2)采用液相色谱和质谱检测所述待测溶液。本发明专利技术的检测方法能够较全面地表征芒柄花黄素的代谢产物，可以检测到包括原型在内的133个芒柄花黄素代谢产物。型在内的133个芒柄花黄素代谢产物。
【技术实现步骤摘要】
生物样品中芒柄花黄素及其代谢产物的检测方法
[0001]本专利技术涉及生物样品中芒柄花黄素及其代谢产物的检测方法。
技术介绍
[0002]黄芪为豆科黄芪属植物蒙古黄芪Astragalus memeranaceus(Fisch.)Bge.Var.Mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪A.membranaceus(Fisch.)Bge.的根。从黄芪中分离出来的芒柄花黄素因独特的异黄酮结构而具有雌激素样作用，具有较强的生物活性，包括抗炎、抗氧化，抗肿瘤、血管舒张、神经保护作用，此外，还能通过自噬分解脂滴，防止细胞内脂质积聚，降低血脂改善非酒精性脂肪肝等。芒柄花黄素因其优异的生物活性和潜在的药用价值而引起广泛关注。例如，CN113244218A公开了一种芒柄花黄素在制备治疗或和预防抑郁症药物中的应用。
[0003]目前，对芒柄花黄素的研究多集中于体内药效，而未发现对其代谢产物的检测方法的相关报道。芒柄花黄素在体内代谢过程和代谢产物尚不明确，亟需进一步研究。
技术实现思路
[0004]有鉴于此，本专利技术的目的是提供一种生物样品中芒柄花黄素及其代谢产物的检测方法，该方法能够较全面、准确地检测芒柄花黄素及其代谢产物。
[0005]本专利技术的目的通过如下技术方案实现。
[0006]本专利技术提供一种生物样品中芒柄花黄素及其代谢产物的检测方法，包括如下步骤：
[0007](1)将生物样品进行处理，获得待测溶液；其中，所述生物样品包括生物体吸收芒柄花黄素后的含有芒柄花黄素及其代谢产物的含药血浆样品、含药尿液样品、含药粪便样品、含药肝脏样品和/或含药肝微粒体样品；
[0008](2)采用液相色谱和质谱检测所述待测溶液，其中：
[0009]液相色谱条件为：色谱柱：C
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色谱柱；流动相：0.09～0.12vol％甲酸水溶液A与乙腈B；柱温：30～35℃；梯度洗脱程序：0～5min，5vol％～30vol％B；5～10min，30vol％～50vol％B；10～27min，50vol％～90vol％B；27～27.1min，90vol％～5vol％B；27.1～30min，5vol％B；
[0010]质谱条件为：电喷雾离子源为正负两种离子模式；鞘气流速：40～45arb；辅助气流速：9～10arb；喷雾电压：正离子模式下为3.7～3.8kV，负离子模式下为3.4～3.5kV；毛细管温度：310～320℃；辅助气体加热器温度：310～320℃；傅里叶高分辨扫描范围m/z 80～1200；分辨率17500～18000；归一化碰撞能量：10～50％。
[0011]根据本专利技术所述的检测方法，优选地，归一化碰撞能量为15～45％。
[0012]根据本专利技术所述的检测方法，优选地，质谱条件还包括：毛细管电压为
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36～
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35V；液相色谱条件还包括：流速为0.26～0.30mL/min；进样量为2.5～3μL。
[0013]根据本专利技术所述的检测方法，优选地，所述检测方法还包括如下步骤：
[0014](3)对质谱数据进行数据处理：采用分子式预测模块，对质谱解离得到的母离子和碎片离子的分子式进行预测，相关参数设定为：C[0～30]，H[0～30]，O[0～20]，N[0
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5]，S[0～1]，环和不饱和键数[3～15]，代谢物的质量精度误差在5ppm以内。
[0015]根据本专利技术所述的检测方法，优选地，采用超高效液相色谱
‑
质谱联用仪检测所述待测溶液；所述C
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色谱柱为ACQUITY UPLC BEH C
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色谱柱。
[0016]根据本专利技术所述的检测方法，优选地，所述将生物样品进行处理，获得待测溶液包括以下具体步骤：
[0017]将固相萃取柱用甲醇进行活化，再用水进行平衡至除去甲醇，然后取生物样品加入所述固相萃取柱，依次以水和甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液，吹干，残渣用甲醇复溶，涡旋振荡，离心，取上清液作为待测溶液。
[0018]根据本专利技术所述的检测方法，优选地，所述固相萃取柱为Grace Pure
TM
SPE C
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Low固相萃取柱。
[0019]根据本专利技术所述的检测方法，优选地，所述含药血浆样品由包括以下步骤制备而得：将含有芒柄花黄素及其代谢产物的血液置于肝素钠抗凝EP管中，离心，所得上清液即为含药血浆样品。
[0020]根据本专利技术所述的检测方法，优选地，所述含药尿液样品由包括以下步骤制备而得：将含有芒柄花黄素及其代谢产物的尿样离心，所得上清液即为含药尿液样品。
[0021]根据本专利技术所述的检测方法，优选地，所述含药粪便样品由包括以下步骤制备而得：将含有芒柄花黄素及其代谢产物的1重量份的粪便用4.5～5.5重量份的水超声提取，得到水提取液；将水提取液离心，所得上清液即为含药粪便样品。
[0022]本专利技术的检测方法能够对生物样品中的芒柄花黄素及其代谢产物进行有效检测和鉴别，具有广泛的适用性，可用于研究任何生物体内的代谢产物。根据本专利技术优选的实施方式，从含药血浆样品、含药尿液样品、含药粪便样品、含药肝脏样品和含药肝微粒体样品中检测到包括原型在内的133个芒柄花黄素代谢产物。
具体实施方式
[0023]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明，但本专利技术的保护范围并不限于此。
[0024]本专利技术提供一种生物样品中芒柄花黄素及其代谢产物的检测分析方法，包括如下步骤：(1)对生物样品进一步处理，获得待测溶液；(2)采用液相色谱和质谱检测所述待测溶液；(3)对质谱数据进行处理。任选地，还包括获得生物样品。
[0025]＜获得生物样品＞
[0026]本专利技术中，生物样品包括含药生物样品，含药生物样品是指生物体(例如人或动物)吸收芒柄花黄素后的含有芒柄花黄素及其代谢产物的含药血浆样品、含药尿液样品、含药粪便样品、含药肝脏样品和/或含药肝微粒体样品。优选地，生物样品包括含药生物样品，含药生物样品是指生物体(例如人或动物)吸收芒柄花黄素后的含有芒柄花黄素及其代谢产物的含药血浆样品、含药尿液样品、含药粪便样品、含药肝脏样品和含药肝微粒体样品。这样更有利于全面表征芒柄花黄素的代谢产物，提高检测的准确性。
[0027]本专利技术中，生物样品还可以包括空白生物样品，空白生物样品是指生物体(例如人
或动物)正常饮食下的空白血浆样品、空白尿液样品、空白粪便样品、空白肝脏样品和/或空白肝微粒体样品。
[0028]本专利技术中，所述动物优选为哺乳动物，包括但不限于小鼠、大鼠、豚鼠、兔、犬、猴等。
[0029]本专利技术的含药血浆样品由包括以下步骤制备而得：将含有芒柄花黄素及其代谢产物的血液置于肝素钠抗凝EP管中，离心，所得上清液即为含药血浆样品。在某些具体的实施方案中，将含有芒柄花黄素及其代谢产物的血液置于肝素钠抗凝EP管中，3本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种生物样品中芒柄花黄素及其代谢产物的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将生物样品进行处理，获得待测溶液；其中，所述生物样品包括生物体吸收芒柄花黄素后的含有芒柄花黄素及其代谢产物的含药血浆样品、含药尿液样品、含药粪便样品、含药肝脏样品和/或含药肝微粒体样品；(2)采用液相色谱和质谱检测所述待测溶液，其中：液相色谱条件为：色谱柱：C
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色谱柱；流动相：0.09～0.12vol％甲酸水溶液A与乙腈B；柱温：30～35℃；梯度洗脱程序：0～5min，5vol％～30vol％B；5～10min，30vol％～50vol％B；10～27min，50vol％～90vol％B；27～27.1min，90vol％～5vol％B；27.1～30min，5vol％B；质谱条件为：电喷雾离子源为正负两种离子模式；鞘气流速：40～45arb；辅助气流速：9～10arb；喷雾电压：正离子模式下为3.7～3.8kV，负离子模式下为3.4～3.5kV；毛细管温度：310～320℃；辅助气体加热器温度：310～320℃；傅里叶高分辨扫描范围m/z 80～1200；分辨率17500～18000；归一化碰撞能量：10～50％。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，归一化碰撞能量为15～45％。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，质谱条件还包括：毛细管电压为
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36～
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35V；液相色谱条件还包括：流速为0.26～0.30mL/min；进样量为2.5～3μL。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括如下步骤：(3)对质谱数据进行数据处理：采用分子式预测模块，对质谱解离得到的母离子和...
【专利技术属性】
技术研发人员：张加余，王少平，杨爱琳，宋书祎，周红燕，兰先明，
申请(专利权)人：滨州医学院，
类型：发明
国别省市：
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