一种CH25h在治疗H9N2亚型禽流感病毒感染药物中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种CH25h在治疗H9N2亚型禽流感病毒感染药物中的应用，包括以下步骤：S1、转录组测序分析：转录组测序分析25－羟基胆固醇治疗前后Raw264.7细胞基因表达水平的改变；S2、CH25h过表达效果鉴定：进行质粒转染，实时荧光定量PCR(RT

【技术实现步骤摘要】
一种CH25h在治疗H9N2亚型禽流感病毒感染药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医学领域，具体地说是一种CH25h在治疗H9N2亚型禽流感病毒感染药物中的应用。

技术介绍

[0002]禽流感是由禽流感病毒(Avianinfluenzavirus，AIV)引起的一种世界范围的禽类疫病，每一次严重爆发都会对养禽业造成巨大的经济损失。AIV是单股负链RNA病毒，属于正粘病毒科甲型流感病毒。病毒粒子呈典型的球形或杆状、丝状。直径大小为80
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120nm。病毒从内到外依次为囊膜蛋白质外壳、核衣壳，粒子表面覆盖有两种纤突，一种为形似棒状的三聚体血凝素(HA)，另一种是四聚体神经氨酸酶(NA)，呈蘑菇状。AIV的宿主范围十分广泛，目前已经从大量家禽、野鸟、人、猪、马和貂等哺乳动物身上分离到。野鸟是禽流感的天然宿主，并且在野鸟中不具有高致病性，但野鸟的迁徙会引起禽流感的跨远距离传播，感染其他物种后往往具有高致病性。AIV具有宿主品种适应性，在同一品种的个体间极易扩散，感染传播频率很高，但也偶尔会在相近品种之间发生种间传播，并且在极少本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CH25h在治疗H9N2亚型禽流感病毒感染药物中的应用，其特征在于，包括以下步骤：S1、转录组测序分析：转录组测序分析25－羟基胆固醇治疗前后Raw264.7细胞基因表达水平的改变；S2、CH25h过表达效果鉴定：进行质粒转染，实时荧光定量PCR(RT
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PCR)检测CH25h分子的mRNA水平；S3、H9N2病毒感染Raw264.7细胞：Raw264.7细胞的H9N2病毒感染实验，免疫荧光染色检测H9N2抗原表达，蛋白免疫印迹；S4、H9N2感染Raw264.7细胞关键宿主分子筛选：采用Raw264.7细胞作为感染模型，通过25－羟基胆固醇作用后利用二代测序平台对各组样本的转录组进行深度测序；S5、CH25h过表达质粒效率检测：针对CH25h目的基因序列，将基因序列克隆至表达质粒载体中，通过体外大肠杆菌扩增后用于细胞转染；S6、CH25h上调后对H9N2病毒感染的影响：转染CH25h分子表达质粒后，观察对病毒感染性的影响。2.如权利要求1所述CH25h在治疗H9N2亚型禽流感病毒感染药物中的应用，其特征在于：所述S1中采用核酸抽提试剂盒分别提取对照组、H9N2感染组、25－羟基胆固醇干预组、每组3个独立样本的核酸成分。3.如权利要求1所述CH25h在治疗H9N2亚型禽流感病毒感染药物中的应用，其特征在于：所述S1中基于测序结果进行大规模数据分析，分别比较对照组与H9N2感染组，H9N2感染组与25－羟基胆固醇治疗组的基因表达谱差异，通过统计学聚类分析筛选差异显著基因。4.如权利要求1所述CH25h在治疗H9N2亚型禽流感病毒感染药物中的应用，其特征在于：所述S2中实时荧光定量PCR/RT
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PCR检测CH25h分子的mRNA水平是采用南京诺唯赞生物科技股份有限公司的RNA提取试剂盒－产品编号：RC112
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01提取RNA。5.如权利要求1所述CH25h在治疗H9N2亚型禽流感病毒感染药物中的应用，其特征在于：所述S2中实时荧光定量PCR/...

【专利技术属性】
技术研发人员：马宁，徐国锋，张丽芳，冯建国，罗美化，张微，刘力，钟晓琳，李玉英，
申请(专利权)人：西南医科大学附属医院，
类型：发明
国别省市：