狂犬病、破伤风双效价人免疫球蛋白及其制备方法技术

一种狂犬病、破伤风双效价人免疫球蛋白，其狂犬病抗体效价不小于１００ＩＵ／ｍＬ，破伤风抗体效价不小于６０ＩＵ／ｍＬ，蛋白质含量不大于１７５ｇ／Ｌ，免疫球蛋白纯度不低于总蛋白含量的９２％。其原料血浆的制备方法是选择供血浆者接种狂犬病疫苗，至少１５天后再接种吸附破伤风疫苗，以获取狂犬病抗体效价不低于６ＩＵ／ｍＬ，同时破伤风抗体效价不低于５ＩＵ／ｍＬ的原料血浆，且应保证混合后原料血浆狂犬病抗体效价不低于１０ＩＵ／ｍＬ，破伤风抗体效价不低于８ＩＵ／ｍＬ。本发明专利技术的免疫球蛋白可用于被狂犬或其他疯动物咬伤或抓伤暴露患者的免疫。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，涉及一种生物免疫制品，特别是涉及一种能同时预防人狂犬病及破伤风的双效价免疫球蛋白及其制备方法。
技术介绍
狂犬病是一种病原体为核糖核酸型的弹性病毒。世界卫生组织统计，全球三分之二以上的国家和地区有狂犬病流行，我国及东南亚地区处于世界狂犬病高发区，其病例约占全球的70%以上。狂犬病一旦发病，目前尚无法医治，死亡率几乎达iooy。。根据冊o推荐的狂犬免疫接种方案，对暴露者注射人狂犬病免疫球蛋白(RIg),然后肌肉注射狂犬病疫苗，以确保暴露者免疫效果。该方法被世界卫生组织公认为是目前唯一有效的预防方法。破伤风是一种严重威胁人类生命健康的急性特异性感染疾病，由破伤风杆菌侵入人体伤口、生长繁殖、产生毒素引起。破伤风杆菌及其毒素不能侵入正常的皮肤和粘膜，故破伤风都发生在伤后。 一切开放性损伤均有发生破伤风的可能。人体破伤风免疫球蛋白(TIg )是经乙肝疫苗接种后再经破伤风类毒素(TD )免疫的具有高效价破伤风抗体的血浆，经低温乙醇法分级沉淀、加压过滤分离提纯，并经病毒灭活处理，用于防治破伤风。世界卫生组织要求，在对病犬咬伤积极预防狂犬病的同时，也应预防破伤风。目前我国临床使用的狂犬病人免疫球蛋白和破伤风人免疫球蛋白均为单一效价，使用时需要多次注射，临床使用不便，而且费用高。制备一种即能预防狂犬病同时又能预防破伤风发生的双效价免疫球蛋白，将会有较大的社会效益和经济效益。
技术实现思路
本专利技术的目的在于弥补现有技术及产品效能的不足，提供 一种即能预防狂犬病同时又能预防破伤风发生的双效价免疫球蛋白及制备方法。本专利技术提供的狂犬病、破伤风双效价人免疫球蛋白含有高效价的狂犬病抗体及破伤风抗体，其免疫球蛋白纯度不低于总蛋白含量的92%;狂犬病抗体效价不小于100IU/ml,破伤风抗体效价不小于60IU/mL;蛋白质含量不大于175g/L。本专利技术提供的狂犬病、破伤风双效价人免疫球蛋白仅与抗人的血清产生沉淀线，与抗马、抗牛、抗猪、抗羊的血清均不产生沉淀线。本专利技术提供的狂犬病、破伤风双效价人免疫球蛋白与正常人血清比较，主要沉淀线应为IgG，且其IgG单体及二聚体的含量之和不低于92%。本专利技术将狂犬病、破伤风双效价人免疫球蛋白制成常规的液体型或冻干剂型使用。本专利技术的狂犬病、破伤风双效价人免疫球蛋白的制备方法是将双效价原料血浆经常规的低温乙醇蛋白分离法分级沉淀，提取免疫球蛋白组分，经加压过滤、离心、病毒灭活处理等必要的工序制成免疫球蛋白液体或冻干剂型。其制备方法的关键在于原料血浆的制备，具体方法是1) 选择身体健康，符合血液制品原料血浆规定要求的供血浆者接种狂犬病疫苗，至少15天后再应用吸附破伤风疫苗进行免疫接种；2) 以固相酶联免疫法(ELISA)定量检测原料血浆的狂犬病抗体及破伤风抗体，单一血浆的狂犬病抗体效价不低于6IU/mL,破伤风抗体效价不低于5IU/mL,其它符合"血液制品原料血浆规程"要求，釆集为狂犬病、破伤风双效价人免疫球蛋白原料血浆；3) 混合釆集的狂犬病、破伤风双效价人免疫球蛋白原料血浆，混合后血浆的狂犬病抗体效价不低于10IU/mL,破伤风抗体效价不低于8IU/mL。本专利技术釆集得到的原料血浆应低温冰冻储存，其保存期不超过2年。作为制备狂犬病、破伤风双效价人免疫球蛋白原料的混合原料血浆，每批次需由不少于IOO名供血浆者的原料血浆混合而成。本专利技术的狂犬病、破伤风双效价人免疫球蛋白可用于被狂犬或其他疯动物咬伤或抓伤暴露患者的免疫。其使用量以狂犬病抗体效价计，按20IU/kg体重计算， 一次注射。如个体所需免疫球蛋白注射总剂量大于10mL时，可在1~2曰内分次注射。随后即可进行狂犬病疫苗的注射。本专利技术提供的狂犬病、破伤风双效价人免疫球蛋白 一次注射即可预防狂犬病和破伤风，使用简单方便，具有较大的社会效益和经济效益。本专利技术免疫球蛋白的原料血浆制备方法简单，免疫球蛋白制备成本低。具体实施例方式实施例11、 供血浆者的免疫选择身体健康，符合血液制品原料血浆规定要求的供血浆者，在0、 3、 7、14、 28天分别接种狂犬病疫苗2、 2、 1、 1、 2剂。接种狂犬疫苗30天后，再应用吸附破伤风疫苗，接照0、 14、 28天剂量不小于0. 5mL进行免疫接种，并建立详细的免疫记录。2、 供血浆者的血浆筛选釆集选择固相酶联免疫法(ELISA)分别定量检测供血浆者血清或血浆中的狂犬病抗体及破伤风抗体，狂犬病抗体效价不小于6IU/mL,同时破伤风抗体效价不小于5IU/mL,蛋白质含量(双缩脲法)不低于55g/L，丙氨酸氨基转移酶(赖氏法)不高于25单位，乙型肝炎表面抗原阴性，梅毒阴性，HIV-l/HIV-2抗体阴性，HCV抗体阴性等符合国家要求的血浆为特免血浆，按血液制品原料血浆规程要求釆集为狂犬病、破伤风双效价免疫球蛋白原料血浆，低温冰冻储存，保存期不超过2年。3、 狂犬病、破伤风双效价人免疫球蛋白的制备(1) 将100名以上供血浆者的血浆融化混合，混合后血浆狂犬病抗体效价不低于10IU/mL、破伤风抗体效价不低于8IU/mL为合格原料血浆；(2) 分离后的无菌血浆，在0 4。C下离心去除冷沉淀；6(3) 去除冷沉淀后的血浆用醋酸缓冲液调节pH值至6. 8 ~ 7. 2,加95°/。乙醇至 反应液最终浓度为8~10%,反应液温度至-1~-3°(:,离心得沉淀；(4) 在上清液中加95%乙醇至反应液最终浓度为19~21%，以醋酸缓冲液调节 pH值至6. 5-6. 8,反应液温度至-4~-5°C，分离得沉淀；(5) 将步骤(4)的沉淀以15 ~ 20倍沉淀量的溶解液搅拌溶解；(6) 在上清液中加95%乙醇至反应液最终浓度为14~17%，以醋酸缓冲液调节 pH值至5. 0-5.2，反应液温度至-4~-5°C,分离得沉淀；(7) 在上清液中加95°/。乙醇至反应液最终浓度为24 ~ 26%,以碳酸氢纳缓冲液 调节pH值至7. 0~7. 2，反应液温度至-5 -7。C,分离得沉淀；(8) 将步骤(7)的沉淀用10倍沉淀量的溶解液搅拌溶解，调节pH值为7. 0~ 7.2,温度至0-2。C，蛋白浓度在1. 5~2. 5%，离心得沉淀；(9) 将步骤(8)的沉淀用溶解液搅拌至溶解，经超滤、脱醇、脱盐、浓缩，得到含有高效价的狂犬病、破伤风双效价人免疫球蛋白原液；(10) 调整上述原液的pH值为3. 8~4. 2，蛋白浓度5%，经24 25'C孵放21天和纳米膜过滤的双病毒灭活处理；(11) 调整灭活的原液，使蛋白浓度不超过17.5%，狂犬病抗体效价不低于 100IU/mL，破伤风效价不低于60IU/mL， pH值为6.6~7.2,并加入一定比例的甘氨酸及适量麦芽糖作为保护剂制成半成品；(12) 分装为成品，检定合格。 4、检定(1) 活性狂犬病抗体效价不低于100IU/mL，破伤风效价不低于60IU/mL。(2) 鉴别免疫双扩散法仅与抗人的血清产生沉淀线，与抗马、抗牛、抗猪、抗羊 的血清不产生沉淀线。7免疫电泳法与正常人血清比较，主要沉淀线应为IgG。(3) 蛋白质含量 不高于175g/L。(4) 纯度免疫球蛋白含量不低于蛋白质总量的92%。(5) 分子大小分布IgG单体与二聚体含量之和不低于92%。(6) 外观应为无本文档来自技高网...

【技术保护点】
狂犬病、破伤风双效价人免疫球蛋白，含有高效价的狂犬病抗体和破伤风抗体，其免疫球蛋白纯度不低于总蛋白的９２％，狂犬病抗体的效价不小于１００ＩＵ／ｍＬ，同时破伤风抗体效价不小于６０ＩＵ／ｍＬ，蛋白质含量不大于１７５ｇ／Ｌ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：孙思才，周凯，
申请(专利权)人：山西康宝生物制品股份有限公司，
类型：发明
国别省市：14[中国|山西]