骨髓间充质干细胞外泌体及其在治疗癌症中的应用制造技术

本发明专利技术涉及骨髓间充质干细胞外泌体及其在治疗癌症中的应用，具体提供了一种针对Flot2蛋白的抗体及其在用于制备治疗胃癌的药物中的用途。所述抗体能够特异性识别并高亲和力结合Flot2蛋白，这确保了所述抗体能够阻断Flot2蛋白并抑制胃癌细胞的增殖。将所述抗体与骨髓间充质干细胞外泌体联用后，能够有效地抑制癌细胞在小鼠体内的增殖，体现了良好的治疗效果。疗效果。

【技术实现步骤摘要】
骨髓间充质干细胞外泌体及其在治疗癌症中的应用


[0001]本申请涉及生物领域，更具体的涉及骨髓间充质干细胞外泌体及其在治疗癌症中的应用。

技术介绍

[0002]胃癌是起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，胃癌发病有明显的地域性差别，在我国的西北与东部沿海地区胃癌发病率比南方地区明显为高。好发年龄在50岁以上，男女发病率之比为2：1。由于饮食结构的改变、工作压力增大以及幽门螺杆菌的感染等原因，使得胃癌呈现年轻化倾向。胃癌可发生于胃的任何部位，其中半数以上发生于胃窦部，胃大弯、胃小弯及前后壁均可受累。绝大多数胃癌属于腺癌，早期无明显症状，或出现上腹不适、嗳气等非特异性症状，常与胃炎、胃溃疡等胃慢性疾病症状相似，易被忽略，因此，我国胃癌的早期诊断率仍较低。胃癌的预后与胃癌的病理分期、部位、组织类型、生物学行为以及治疗措施有关。
[0003]常用的胃癌化疗给药途径有口服给药、静脉、腹膜腔给药、动脉插管区域灌注给药等。常用的口服化疗药有替加氟、优福定、氟铁龙等。常用的静脉化疗药有氟尿嘧啶、丝裂霉素、顺铂、阿霉、依托泊苷、甲酰四氢叶酸钙等。近年来紫杉醇、草酸铂、拓扑酶抑制剂、希罗达等新的化疗药物用于胃癌治疗。近年来，肿瘤的治疗已成为众多医学工作者研究的热点，其中单克隆抗体靶向疗法治疗肿瘤显示出了良好的前景。其研究重点主要集中在将抗体与化学药物、酶、放射性核素、毒素和生物诱导剂等耦联后直接杀伤肿瘤或者利用抗体促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成等方面。目前，国际上与肿瘤治疗相关的抗体研究主要集中在将抗体与耦联物作用后直接杀伤肿瘤细胞，利用抗体促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤血管生成等方面。单抗与化疗药物相比具有治疗作用强、不良反应少、患者耐受性高等优点，因此单抗药物是未来重要的药物类型。
[0004]目前，临床上常用的治疗胃癌的单抗类药物根据其作用靶点主要分为作用于人表皮生长因子受体
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2(HER
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2)的抗HER
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2单抗类药物、作用于人表皮生长因子受体
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1(EGFR)的抗EGFR单抗类药物、作用于血管内表皮生长因子(VEGF)的抗VEGF单抗类药物、作用于血管内表皮生长因子受体(VEGFR)的抗VEGFR单抗类药物以及作用于程序性死亡受体
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1(PD
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1)的抗PD
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1单抗类药物。
[0005]西妥昔单抗(cetuxiumab)是重组人鼠嵌合型IgG1单克隆抗体，可以选择性地作用于EGFR，抑制EGFR与EGFR配体特异性结合。抗肿瘤机制与EGFR引起的信号传达有关，可通过抑制EGFR胞外区结构区域与配体结合，抑制受体形成二聚体、抑制EGFR上酪氨酸残基自身磷酸化、下调下游的信号传导、抑制肿瘤细胞的增殖。还可通过上调凋亡效应酶caspase
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3，P
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27的基因转录，减少其蛋白降解；下调bcl
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2的基因转录和蛋白的表达促进肿瘤细胞凋亡。VEGF为血管内表皮生长因子，VEGF家族主要有VEGF
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A，VEGF
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B，VEGF
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C，VEGF
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D，VEGF
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E以及蛇毒VEGF(snakevenomVEGF，svVEGF)。VEGF的主要作用是刺激血管内皮细胞增殖以及增加血管通透性。贝伐珠单抗(bevaci
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zumab)是一种特异性靶向VEGF
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A的人源化单克隆抗
体，可通过作用于VEGF，与VEGF特异性结合，抑制VEGF与受体VEGFR结合，抑制VEGFR磷酸化，阻断血管生成及下游信号转导，同时以内皮细胞为靶点可增加血管通透性，促使药物渗透至肿瘤细胞，抑制肿瘤细胞增殖，诱导肿瘤细胞凋亡。2002年获得FDA批准上市，用于一线治疗晚期结直肠癌。程序性死亡分子(PD
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1)，是一种新型负性共刺激分子。程序性死亡分子配体(PD
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L1)与PD
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1结合后可产生抑制性信号，抑制免疫细胞的活化和增殖，诱导免疫细胞凋亡，使免疫细胞产生对癌症细胞的免疫应答困难，进而使肿瘤细胞增殖、肿瘤发展。pembrolizumab通过与PD
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1结合，靶向作用于PD
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1/PD
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L1信号通路，抑制其信号传导，使T细胞恢复对癌症细胞的免疫应答，恢复抗肿瘤活性从而达到治疗胃癌的作用。
[0006]越来越多的研究发现其特征蛋白Flot2在肿瘤中异常表达，并且与肿瘤的侵袭转移相关，人Flot2的mRNA广泛表达于各类细胞。Flot2通过其SPFH结构域与肌动蛋白相互作用。此外，Flot2还可以通过磷酸化的方式增强细胞在细胞外基质的传播。这些研究提示Flot2与肿瘤的转移关系密切。在胃癌患者癌组织和癌旁组织中，Flot2基因在癌旁组织中的阳性表达率为27.8％，而在癌组织中的阳性表达率为93.3％，并且与组织学分级、浸润深度、淋巴结转移和TNM分期显著相关。采用siRNA干扰Flot2的表达后，胃癌细胞的增殖、迁移及转移能力都显著下降。这些结果表明Flot2蛋白的表达与胃癌的进展、预后不良密切相关，其机制可能与Flot2调控细胞增殖、转移和侵袭的能力有关。这些结果提示Flot2可能成为新的胃癌预后及治疗的靶点。胃癌细胞与正常胃黏膜上皮细胞相比，miR
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449a表达下调，而Flot2表达上调。荧光素酶报告基因证实Flot2是miR
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449a的一个新靶点。miR
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449a通过抑制Flot2的表达来调控胃癌细胞的侵袭。一组上皮间质转化(EMT)标志物的表达分析显示，miR
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449a降低间质标记物的表达和诱导上皮细胞标记物的表达，这与沉默Flot2的结果一致。此外，Flot2的上调是TGF
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β诱导胃癌细胞产生EMT的必要因素。结果显示，miR
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449a通过抑制TGF
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β介导的EMT抑制Flot2的表达进而导致胃癌细胞的侵袭能力降低。这些结果显示，Flot2与胃癌的侵袭相关，并且受miR
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449a的调控。因此，Flot2可以作为一个潜在的胃癌生物标志物和有前景的胃癌治疗靶点。但是针对Flot2常规的都是siRNA药物的开发，而针对该靶点开发疗效显著、提高患者生存质量且不易耐药的新型单抗是药学研发人员努力的方向。

技术实现思路

[0007]本专利技术首先提供了特异性针对Flot2的单克隆抗体。
[0008]进一步的，本专利技术单克隆抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
[0009]进一步的，本专利技术还提供了一种改进的单克隆抗体，所述改进是在重链可变区氨基酸序列SEQ ID NO.1和轻链可变区氨基酸序列SEQ ID 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种特异性针对Flot2蛋白的单克隆抗体，其特征在于单克隆抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。2.编码如权利要求1所述抗体的DNA分子。3.包含如权利要求2所述DNA分子的重组表达载体。4.包含如权利要求3所述载体的宿主细胞，所述宿主细胞包含原核细胞、酵母或哺乳动物细胞。5.一种抑制Fl...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛伟，马进强，
申请(专利权)人：广州耀旭干细胞科技有限公司，
类型：发明
国别省市：