红绿光切换式交通信号灯基因编辑阳性报告富集系统技术方案

本发明专利技术公开了一种红绿光切换式交通信号灯基因编辑阳性报告富集系统。构建了新型的红绿光“切换式”报告载体以及相应的验证用CRISPR/Cas系统的表达载体。通过CRISPR/Cas系统同时打靶基因组、报告载体，利用SSA修复机制对报告载体中的双荧光报告基因及抗性基因一体化表达盒进行修复。该报告富集系统可以简单、快速检测被转染细胞中的核酸酶活性，并高效富集基因编辑阳性细胞。效富集基因编辑阳性细胞。

【技术实现步骤摘要】
红绿光切换式交通信号灯基因编辑阳性报告富集系统


[0001]本专利技术属于基因工程
，涉及可用于CRISPR/Cas系统介导基因编辑阳性细胞富集的红绿光“切换式”交通信号灯(Traffic Light Reporter，TLR)基因编辑阳性报告富集系统。

技术介绍

[0002]CRISPR/Cas9基因编辑技术是继ZFNs(Zinc
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finger nuclease)和TALENs(Transcription activator
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like effector nuclease)之后的新一代基因编辑技术。自2012年首次报道利用来源于酿脓链球菌(S.pyogenes)II型CRISPR/Cas9系统(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR/CRISPR
‑
associated protein
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9nuclease,Cas9)的蛋白和导向RNA(guide RNA、gRNA)可以体外本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因编辑阳性细胞报告富集系统，其特征在于：该系统包括位点特异性的报告载体；所述报告载体包括双荧光报告基因与抗性基因一体化表达盒，所述一体化表达盒包括位于该表达盒的转录区域的与抗性基因编码序列同源的上游片段、与抗性基因编码序列同源的下游片段、第一荧光蛋白的基因编码序列、第二荧光蛋白的基因编码序列以及由导向RNA识别的第一靶序列和第二靶序列，所述第一靶序列位于所述上游片段与第一荧光蛋白的基因编码序列之间，所述第二靶序列位于所述下游片段与第一荧光蛋白的基因编码序列之间，所述上游片段和所述下游片段包括用于进行单链退火修复并在修复后使所述一体化表达盒从表达第一荧光蛋白转换为进行相应抗性基因与第二荧光蛋白的串联表达的同向重复序列。2.根据权利要求1所述一种基因编辑阳性细胞报告富集系统，其特征在于：所述上游片段、所述第一靶序列、第一荧光蛋白的基因编码序列、所述第二靶序列、所述下游片段和第二荧光蛋白的基因编码序列采用同一个开放阅读框，该开放阅读框通过设置在所述第二靶序列与所述下游片段之间的终止密码子分隔。3.根据权利要求1所述一种基因编辑阳性细胞报告富集系统，其特征在于：所述同向重复序列为200～350bp。4.根据权利要求1所述一种基因编辑阳性细胞报告富集系统，其特征在于：所述第二荧光蛋白的基因编码序列位于所述下游片段后侧，所述一体化表达盒的转录区域还包括用于连接所述下游片段和第二荧光蛋白的基因编码序列的剪切肽序列。5.根据权利要求1所述一种基因编辑阳性细胞报告富集系统，其特征在于：所述第一荧光蛋白为红色荧光蛋白，第二荧光蛋白为绿色荧光蛋白。6.根据权利要求1所述一种基因编辑阳性细胞报告富集系统，其特征在于：所述上...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐坤，吕明，张智英，马宝霞，王旭，孟祥宇，李尚朴，杨森，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：