一种诱导剂在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的检测方法技术

本发明专利技术属于诱导剂的制备技术领域，公开了一种诱导剂在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的检测方法，采用了尿酸酶抑制剂氧嗪酸钾为基础联合尿酸前体物质腺嘌呤，以灌胃的方式来诱导大鼠高尿酸血症动物模型，探索了氧嗪酸钾的给药剂量(1000、1500mg/kg)和腺嘌呤的给药剂量(0、50、100mg/kg)。维持长期稳定的高尿酸水平及较高的存活率是高尿酸血症模型的关键要素。本实验的血清学指标结果显示，造模1周后与正常组相比模型组动物的血尿酸水平均有显著升高(P<0.05)，并在持续灌胃的5周内血尿酸水平一直维持较高且较稳定的水平；除腺嘌呤高剂量组(氧嗪酸钾1500mg/kg+腺嘌呤100mg/kg及氧嗪酸钾1000mg/kg+腺嘌呤100mg/kg)外，各组大鼠的存活率较高，均能达到0.875以上。均能达到0.875以上。均能达到0.875以上。

【技术实现步骤摘要】
一种诱导剂在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的检测方法


[0001]本专利技术属于医疗
，尤其涉及一种诱导剂在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的检测方法。

技术介绍

[0002]尿酸是嘌呤代谢的终产物，高尿酸血症是由于嘌呤代谢障碍使得尿酸生成增加和/或尿酸排泄减少所导致的一种代谢性疾病。随着生活水平的提高，人们摄入的食物结构发生了重大变化，蛋白质及脂肪的摄入显著提高，高脂血症和高尿酸血症的发病率也明显提高。
[0003]酵母膏、氧嗪酸钾、腺嘌呤、黄嘌呤、次黄嘌呤、乙胺丁醇等造模剂单剂或组合制剂通过灌胃及腹腔注射等方式给药，可诱导啮齿类动物高尿酸肾损伤模型。而给药方式、使用的药物及其剂量各异，不同种属的啮齿类动物对药物的敏感性各不相同，导致造模周期不一致、动物肾脏损伤程度差异较大。因此急需一种一种诱导剂在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的检测方法，来避免这些问题。

技术实现思路

[0004]针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种诱导剂在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的检测方法。
[0005]本专利技术是这样实现的，一种诱导剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种诱导剂在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一，体重约230g成年雄性SD大鼠50只，随机分为5组:正常组(100％普通饲料饲喂)；A组(3％氧嗪酸钾+11％酵母膏+86％普通饲料饲喂)；B组(0.15％腺嘌呤+12％酵母膏+87.85％普通饲料饲喂)；C组(100mg/kg腺嘌呤+1500mg/kg氧嗪酸钾，每日早晚各灌胃1次)；D组(50mg/kg腺嘌呤+1500mg/kg氧嗪酸钾，每日早上灌胃1次)；步骤二，观察时间为5周，每周检测各组大鼠体重、大鼠血清尿酸、肌酐、尿素氮等指标，5周后，检测大鼠双肾重与体重的比值，同时对肾进行病理切片观察；步骤三，对SD大鼠空腹血生化水平检；诱导SD大鼠高尿酸血症模型；SD大鼠组织样本的收集与检测；组织炎症、纤维化相关基因表达：逆转录聚合酶链反应；组织炎症和纤维化相关蛋白表达检测。2.如权利要求1所述诱导剂在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的检测方法，其特征在于，所述SD大鼠空腹血生化水平检具体包括：实验开始前对所有大鼠进行空腹血清尿酸值测定，选取空腹血清尿酸值在60～80μmol/L的大鼠作为实验对象；此后每周用静脉留置针穿刺尾静脉取大鼠血样0.5mL于EP管中，常温静置0.5h后，1000
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g离心10min，取上清液，用罗氏生化自动分析仪检测血尿酸、血肌酐、血尿素氮。3.如权利要求1所述诱导剂在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的检测方法，其特征在于，所述诱导SD大鼠高尿酸血症模型具体包括：用0.5％羧甲基纤维素钠溶液悬浮不同浓度的氧嗪酸钾与腺嘌呤联合造模分为7组，其中正常对照组标记为NC，不同的模型组分别标记为UA1～UA6，每组8只大鼠；灌胃1次/d，连续5周，5周后停止造模，正常饲养1周；对大鼠每日称重，并按照1mL/100g体重的剂量进行灌胃。4.如权利要求1所述诱导剂在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的检测方法，其特征在于，所述SD大鼠组织样本的收集与检测具体包括：(1)第5周各组大鼠用7％水合氯醛(0.5mL/100g体重)腹腔注射麻醉，保定后备皮消毒，打开腹腔及胸腔，暴露心脏，穿刺右心室采血1mL用于血生化检测，快速剪取双肾至手术盘，去除肾被膜、称重，计算肾脏指数(肾重/体重)，观察肾脏的病理改变，取一个肾的1/4放入组织包埋盒用10％中性甲醛浸泡48h后，用于肾组织病理苏木精
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伊红及Masson染色；(2)按照2010年国际肾脏病理学会提出的慢性肾病分型国际标准，综合HE及Masson染色结果进行评分；(3)另取肾组织的各1/4冻存于液氮中，且根据各组动物的肾脏组织学病变程度，选择动物存活率较高、肾组织相对病变较轻的UA2与UA5组动物的肾脏组织分别用于肾组织炎症、纤维化相关因子的基因表达差异分析及其蛋白表达水平分析，以确定后续研究动物造模采用的方案。5.如权利要求1所述诱导剂在诱导大鼠高尿酸肾损伤模型中的检测方法，其特征在于，所述组织炎症、纤维化相关基因表达具体包括：
Trizol法提取总RNA后，用核酸蛋白定量仪检测浓度及纯度，取1μgRNA溶液按照VazymeHiScriptⅡQ RT SuperMix for qPCR试剂盒说明书逆转录成互补DNA溶液；以GAPDH为内参，通过上海生工设计并合成相应上下游引物，按照Vazyme AceQTM qPCR SYBR Green MasterMix试剂盒说明书，用20μL体系在实时荧光定量PCR扩增仪上进行反应，反应条件为95℃3min，40个循环(...

【专利技术属性】
技术研发人员：李兰，陆燕蓉，廖光能，李胜富，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：