一种对脑组织切片脱水和封片的方法技术

本发明专利技术涉及免疫组化切片制备技术领域，特别是涉及一种对脑组织切片脱水封片的方法。本发明专利技术通过适宜梯度浓度的乙醇溶液进行梯度脱水，每个浓度进行适宜时间的脱水，可以解决脱水过度导致脑组织干裂，以及脱水不够导致透明时，脑组织切片内的水与二甲苯反应形成液滴的问题，从而可以将脑组织免疫组化切片制备的成功率由30％提高至100％，对脑组织切片具有良好的脱水透明效果。好的脱水透明效果。好的脱水透明效果。

【技术实现步骤摘要】
一种对脑组织切片脱水和封片的方法


[0001]本专利技术涉及免疫组化切片制备
，特别是涉及一种对脑组织切片脱水和封片的方法。

技术介绍

[0002]传统的冰冻切片技术使用甲醛灌流固定组织样品，通过冰冻切片包埋剂速冻；虽然冰冻切片的染色效率较高，但是往往观察效果不理想，主要由于冰冻切片免疫组织化学染色后的脱水透明条件不佳。当染色结果良好，但因为脱水透明处理不当，会造成组织干硬碎裂，或表面沾有污染物而导致切片观察扫描效果差。现有脱水透明方法的一般流程，即：使用逐渐升高体积分数的乙醇溶液脱去切片中的水分和透明组织的二甲苯，但尚不能针对特定的组织(如脑组织)有良好的脱水透明效果。

技术实现思路

[0003]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种对脑组织切片脱水和封片的方法。本专利技术提供的方法对脑组织切片具有良好的脱水透明效果，可以将脑组织免疫组化切片制备的成功率由30％提高至100％。
[0004]为了实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0005]本专利技术提供了一种对脑组织切片脱水的方法，包括以下步骤：
[0006]将染色后的切片浸没在体积分数为50％的乙醇溶液中100～120s，得到第一切片；
[0007]将所述第一切片浸没在体积分数为70％的乙醇溶液中100～120s，得到第二切片；
[0008]将所述第二切片浸没在体积分数为80％的乙醇溶液中100～120s，得到第三切片；
[0009]将所述第三切片浸没在体积分数为95％的乙醇溶液中100～120s，得到第四切片；
[0010]将所述第四切片浸没在体积分数为95％的乙醇溶液中100～120s，得到第五切片；
[0011]将所述第五切片浸没在体积分数为100％的乙醇中100～120s，得到第六切片；
[0012]将所述第六切片浸没在体积分数为100％的乙醇中100～120s，得到第七切片。
[0013]优选的，所述染色后的切片在体积分数为50％的乙醇溶液中浸没前还包括：将染色后的切片在蒸馏水中浸没5～10s。
[0014]优选的，所述染色的方法包括：将脑组织切片在二氨基联苯胺中染色后，得到染色的脑组织切片；
[0015]将染色的脑组织切片转移至PBS缓冲液中，终止染色反应。
[0016]优选的，所述转移的方法包括：利用毛笔将染色的脑组织切片转移至PBS缓冲液中。
[0017]优选的，终止染色反应后，还包括：将终止染色反应的脑组织切片转移至阳离子防脱载玻片上，得到染色后的切片。
[0018]优选的，所述转移的方法包括：利用毛笔将终止染色反应的脑组织切片顺着PBS缓冲液的流动方向裱至阳离子防脱载玻片上，得到染色后的切片。
[0019]优选的，所述将终止染色反应的脑组织切片转移至阳离子防脱载玻片上后，还包括：将脑组织切片压实，使脑组织切片和阳离子防脱载玻片紧密贴合。
[0020]本专利技术还提供了一种对脑组织切片脱水封片的方法，包括以下步骤：
[0021]利用上述技术方案所述的方法制备得到第七切片；
[0022]将所述第七切片依次进行透明和封片；
[0023]所述透明的方法包括：将所述第七切片浸没在纯度为100％的二甲苯中3～5min，得到第八切片；将所述第八切片浸没在纯度为100％的二甲苯中3～5min，得到第九切片。
[0024]优选的，所述封片用的封片剂包括中性树胶和二甲苯；所述中性树胶和二甲苯的体积比为(1.5～2.5)：1。
[0025]优选的，所述脑组织切片包括小鼠脑组织切片。
[0026]有益效果：
[0027]本专利技术提供了一种对脑组织切片脱水的方法，包括以下步骤：将染色后的切片浸没在体积分数为50％的乙醇溶液中100～120s，得到第一切片；将所述第一切片浸没在体积分数为70％的乙醇溶液中100～120s，得到第二切片；将所述第二切片浸没在体积分数为80％的乙醇溶液中100～120s，得到第三切片；将所述第三切片浸没在体积分数为95％的乙醇溶液中100～120s，得到第四切片；将所述第四切片浸没在体积分数为95％的乙醇溶液中100～120s，得到第五切片；将所述第五切片浸没在体积分数为100％的乙醇中100～120s，得到第六切片；将所述第六切片浸没在体积分数为100％的乙醇中100～120s，得到第七切片。本专利技术通过适宜梯度浓度的乙醇溶液进行梯度脱水，每个浓度进行适宜时间的脱水，可以解决脱水过度导致脑组织干裂，以及脱水不够导致透明时，脑组织切片内的水与二甲苯反应形成液滴的问题，从而可以将脑组织免疫组化切片制备的成功率由30％提高至100％，对脑组织切片具有良好的脱水透明效果。
附图说明
[0028]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
[0029]图1为实施例1所用的摇床和六孔板；
[0030]图2为实施例1所用的毛笔；
[0031]图3为实施例1中脱水和透明用的立式染缸；
[0032]图4为实施例1中50％乙醇溶液立式染缸浸没有切片的示意图；
[0033]图5为实施例1制备的封片后的脑组织切片图；左下角每格标尺为1mm；
[0034]图6为实施例1制备的封片后的脑组织切片放大图左下角每格标尺为100μm；
[0035]图7为对比例1制备的封片后的脑组织切片图；左下角每格标尺为1mm；
[0036]图8为对比例2制备的封片后的脑组织切片图；左下角每格标尺为100μm；
[0037]图9为对比例3制备的封片后的脑组织切片图；左下角每格标尺为1mm。
具体实施方式
[0038]本专利技术提供了一种对脑组织切片脱水封片的方法，包括以下步骤：
[0039]将染色后的切片浸没在体积分数为50％的乙醇溶液中100～120s，得到第一切片；
[0040]将所述第一切片浸没在体积分数为70％的乙醇溶液中100～120s，得到第二切片；
[0041]将所述第二切片浸没在体积分数为80％的乙醇溶液中100～120s，得到第三切片；
[0042]将所述第三切片浸没在体积分数为95％的乙醇溶液中100～120s，得到第四切片；
[0043]将所述第四切片浸没在体积分数为95％的乙醇溶液中100～120s，得到第五切片；
[0044]将所述第五切片浸没在体积分数为100％的乙醇中100～120s，得到第六切片；
[0045]将所述第六切片浸没在体积分数为100％的乙醇中100～120s，得到第七切片。
[0046]本专利技术将脑组织切片进行染色。在本专利技术中，所述脑组织切片优选包括石蜡切片或冷冻切片，更优选为小鼠脑组织的石蜡切片或冷冻切片。
[0047]在本专利技术中，所述染色的方法优选包括：将脑组织切片在二氨基联苯胺中染色后，得到染色的脑组织切片；
[0048]将染色的脑组织切片转移至本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种对脑组织切片脱水的方法，其特征在于，包括以下步骤：将染色后的切片浸没在体积分数为50％的乙醇溶液中100～120s，得到第一切片；将所述第一切片浸没在体积分数为70％的乙醇溶液中100～120s，得到第二切片；将所述第二切片浸没在体积分数为80％的乙醇溶液中100～120s，得到第三切片；将所述第三切片浸没在体积分数为95％的乙醇溶液中100～120s，得到第四切片；将所述第四切片浸没在体积分数为95％的乙醇溶液中100～120s，得到第五切片；将所述第五切片浸没在体积分数为100％的乙醇中100～120s，得到第六切片；将所述第六切片浸没在体积分数为100％的乙醇中100～120s，得到第七切片。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述染色后的切片在体积分数为50％的乙醇溶液中浸没前还包括：将染色后的切片在蒸馏水中浸没5～10s。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述染色的方法包括：将脑组织切片在二氨基联苯胺中染色后，得到染色的脑组织切片；将染色的脑组织切片转移至PBS缓冲液中，终止染色反应。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述转移的方法包括：利用毛笔将染色的脑组织切片转移...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦丽华，王涵菲，王文娟，孙艳荣，张婧琳，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：