一种用于提取黑茶微生物胞外酶的蛋白提取缓冲液和提取方法技术

本发明专利技术涉及微生物蛋白提取技术领域，公开了一种提取黑茶微生物胞外酶的蛋白提取缓冲液和提取方法。蛋白提取缓冲液包括：水、Tris

【技术实现步骤摘要】
一种用于提取黑茶微生物胞外酶的蛋白提取缓冲液和提取方法


[0001]涉及微生物蛋白提取
，尤其涉及一种提取黑茶微生物胞外酶的蛋白提取缓冲液和提取方法。

技术介绍

[0002]黑茶是经过特殊堆积发酵过程的后发酵茶，黑茶加工中涉及独特的微生物发酵工序是影响黑茶质量的主要因素，目前关于微生物酶在黑茶发酵过程中的作用，大部分的研究是通过零星检测茶叶或微生物发酵液中酶活变化情况，从而证明其产酶能力，继而间接论证其风味品质的形成，但是具体有哪些酶类参与茶叶中物质的转化等问题，尚未有明确的实验依据。
[0003]中国论文《普洱茶发酵样品胞外酶提取方法的建立》公开了提取蛋白提取缓冲液的配方：提取缓冲液A(10％(w/v)TCA
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丙酮，0.07％beta
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巯基乙醇，2％PVPP)；提取缓冲液B(50mM Tris
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HCl pH7.5，100mM KCl，50mM EDTA
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Na2，2％PVPP，30％蔗糖)；提取缓冲液C(65mM Tris
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HCl 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于提取黑茶微生物胞外酶的蛋白提取缓冲液，其特征在于，包括以下组分：水、Tris
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HCl缓冲液、十二烷基硫酸钠SDS、KCl、pH值为7.4～8.5的乙二胺四乙酸EDTA、交联聚乙烯吡咯烷酮PVPP、蔗糖、二硫苏糖醇DTT、苯甲基磺酰氯PMSF蛋白酶抑制剂；所述黑茶包括六堡茶、茯砖茶、清砖茶、康砖茶、普洱茶。2.根据权利要求1所述的一种用于提取黑茶胞外酶的蛋白提取缓冲液，其特征在于，将所述组分混合得到的蛋白提取缓冲液中Tris
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HCl缓冲液为45～55mmol/L、SDS为1.5～2.5％、KCl为90～110mmol/L、EDTA为0.4～0.6mmol/L、PVPP为1.5～2.5％、蔗糖为25～35％、DTT为4.5～5.5mmol/L、PMSF蛋白酶抑制剂为0.08～0.12mmol/L。3.一种使用权利要求1或2任一所述的蛋白提取缓冲液提取黑茶微生物胞外酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将黑茶样品与所述蛋白提取缓冲液混合超声震荡得提取液，过滤离心后取上清液，再加入三氯乙酸TCA
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丙酮溶液，混匀得混合液，
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20℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹洪波，萧涵，郑雪雪，李勤，王超，
申请(专利权)人：湖南农业大学，
类型：发明
国别省市：