一种内生真菌柄孢壳菌及其在铁皮石斛栽培中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种内生真菌柄孢壳菌及其在铁皮石斛栽培中的应用。分类命名为柄孢壳菌Zopfiella sp.，分类地位为子囊菌纲球壳菌目粪壳菌科柄孢壳菌属，菌株号为JSNLSHDC

【技术实现步骤摘要】
一种内生真菌柄孢壳菌及其在铁皮石斛栽培中的应用


[0001]本专利技术涉及微生物
，尤其涉及一种内生真菌柄孢壳菌及其在铁皮石斛栽培中的应用。

技术介绍

[0002]铁皮石斛是兰科石斛属多年生附生草本植物，主要分布于浙江、安徽、福建等长江流域以南各省，具有滋阴润肺厚肠胃等功效，《中国药典》2020版收载有铁皮石斛和石斛，是我国珍稀中药材之一。
[0003]野生石斛对生长环境要求苛刻，多附生于悬崖峭壁的石壁上或石缝中，生长缓慢，其种子没有胚乳，难萌发，自然条件下，需与真菌共生才能完成整个生活史。长期无节制的采挖和生境的破坏，导致野生铁皮石斛资源日趋濒危。目前，随着组培快繁技术在铁皮石斛种苗繁育中的应用，铁皮石斛的人工栽培日趋成熟，但组培苗由于是异养生长而成，移栽在大田后，没有适合的真菌与其共生，导致其存在移栽成活率低、生长慢、有效要用成分含量低等诸多问题。
[0004]研究表明，铁皮石斛的菌根真菌与石斛共生，不仅可以促进种子萌发、提高组培苗移栽的成活率和生长速度，增加种苗的抗逆性，还能为植株提供其生长所需的各种营养，从而促进其生长发育。近年来，石斛菌根方面的研究力度逐渐加大，如何筛选出作用显著的菌根菌剂，进一步促进铁皮石斛生长，已成为石斛产业绿色健康发展的一个重要的应用研究方向。

技术实现思路

[0005]专利技术目的：针对现有技术的不足与缺陷，本专利技术的目的之一是提供一种柄孢壳菌Zopfiella sp.菌株JSNLSHDC
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3，及其生产的微生物菌剂。本专利技术的另一个目的是提供上述菌株菌剂在铁皮石斛栽培中的应用。
[0006]技术方案：本专利技术的内生真菌柄孢壳菌，其分类命名为柄孢壳菌Zopfiella sp.，分类地位为子囊菌纲球壳菌目粪壳菌科柄孢壳菌属，菌株号为JSNLSHDC
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3，现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.18562，保藏日期为2019年09年02日。保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101。
[0007]该菌株的主要生物学特性为：在PDA培养基上培养7d，菌落直径7.2cm，生长适中。菌落扁平，菌丝为灰白色，生长呈放射状，边缘不整齐，呈锯齿状，反面灰白色，不沉淀色素，在人工培养条件下不易产孢。
[0008]扩增ITS区全序列并进行测序，PCR扩增得到的16sRNA全序列(SEQ ID NO.1)GTAAGTGGGGGTTTTTACGGCAGGCGCCCGCGCCACTCCGCAGCGAGGTTGTCTACTACGCTCGGTGTGGACAGCGAGCCCGCCACTGGTTTTCGGGGCCTGCGGTCGGACGCAGGTCCCCAACACAAGCCCGGGGGCTTGATGGTTGAAATGACGCTCGGACAGGCATGCCCGCCAGAATACTGGCGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGC
AATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTGACTCATTTTAAGTACAGTACTCAGAGAGGCCGGTAAAAAAGCAATGGTTTGGGTGCCTCCGGCAGGCCCTCGGCGGCCCCCCGCGGGTGGGCGGGGGGCCGGCCTGCCGAAGCAACTGTTCAGTGGTTCGTTCGCGATGGTTTGTGGGAGTTTTGCAACTCTTTAATGATCCCTCCGCAGGTTC。
[0009]本专利技术的内生真菌柄孢壳菌在铁皮石斛栽培中的应用。
[0010]本专利技术的菌株JSNLSHDC
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3生产的微生物菌剂。
[0011]本专利技术的菌株JSNLSHDC
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3生产的微生物菌剂的制备方法：包括下述步骤：
[0012]1)以玉米粉为培养基质、硫酸铵为外源氮源，葡萄糖为外源碳源，制备成固体培养基；pH调至5.5～6.5，灭菌后接种菌株JSNLSHDC
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3；
[0013]2)在25℃～30℃，12h光照/12h暗培养条件下培养20d～30d；
[0014]3)将步骤2)培养好的固体菌剂粉碎成粉末状，获得微生物菌剂。
[0015]所述的步骤1)中玉米粉、硫酸铵、葡萄糖的质量比为40～50:5:8～10；每100g上述质量比混合物加纯净水45g～55g，混匀灭菌制成固体培养基。
[0016]所述的灭菌条件为121℃和0.11MP的高压条件下灭菌30min。
[0017]本专利技术的菌株JSNLSHDC
‑
3生产的微生物菌剂在铁皮石斛栽培中的应用。
[0018]每立方铁皮石斛栽培基质接种菌剂的接种量为20g～50g。
[0019]所述的铁皮石斛栽培基质相对含水量维持在60％～90％之间10d以上。
[0020]有益效果：与现有技术相比，本专利技术具有以下显著优点：本专利技术内生真菌柄孢壳菌Zopfiella sp.菌株JSNLSHDC
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3对铁皮石斛幼苗促生长作用明显，施用后能显著提高铁皮石斛苗的叶绿素含量，降低其丙二醛(MDA)含量，从而促进其生长及增强抗逆性。同时，该菌株能够人工培养、培养条件简单、施用方便、容易保存，易于规模化生产，具有良好的开发应用前景。
附图说明
[0021]图1为本专利技术的菌株培养的菌落正面形态图；
[0022]图2为本专利技术的菌株培养的菌落背面形态图。
具体实施方式
[0023]下面结合附图及具体实施方式对本专利技术的技术方案做进一步的描述。
[0024]实施例1：
[0025]菌株JSNLSHDC
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3是2017年6月在江苏省句容市江苏农博园内石斛栽培区兜唇石斛根系分离获得的。
[0026]离方法为：取新鲜的兜唇石斛根，将根段表面上的基质用流动的自来水冲洗干净后，在超净工作台内用滤纸吸干表面的水分，然后分次浸入75％酒精45s，0.1％次生汞溶液浸泡消毒5min。消毒完成后，用灭菌的去离子水冲洗3～4次以彻底去除消毒剂，用灭菌的滤纸吸干根表面的残留水滴，然后用灭菌的解剖刀将根段切成0.5～1mm左右的组织段。将组织段转移到加有硫酸链霉素(50～100μg/mL)的PDA培养基平板上，每个平板上接种5个组织段，每种培养基接15个平板。将分离获得的内生真菌进行回接试验，得到本专利技术所述菌株，将该菌株定名为JSNLSHDC
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3，该菌株能明显促进石斛幼苗的生长，提高幼苗的成活率。
[0027]菌株JSNLSHDC
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3的菌落特征如下：上述菌株在PDA培养基上培养7d，菌落直径7.2cm，生长适中。菌落扁平，菌丝为灰白色，生长呈放射状，边缘不整齐，呈锯齿状，反面灰白色，不沉淀色素，在本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种内生真菌柄孢壳菌，其分类命名为柄孢壳菌Zopfiella sp.，菌株号为JSNLSHDC
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3，现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.18562，保藏日期为2019年09年02日。2.权利要求1所述的内生真菌柄孢壳菌在铁皮石斛栽培中的应用。3.权利要求1所述的菌株JSNLSHDC
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3生产的微生物菌剂。4.权利要求3所述的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：包括下述步骤：1)以玉米粉为培养基质、硫酸铵为外源氮源，葡萄糖为外源碳源，制备成固体培养基；pH调至5.5～6.5，灭菌后接种菌株JSNLSHDC
...

【专利技术属性】
技术研发人员：席刚俊，贾君，杨鹤同，史俊，高大响，马爱军，丁久玲，方敏彦，张勇，
申请(专利权)人：江苏农林职业技术学院，
类型：发明
国别省市：