粒细胞巨噬细胞集落刺激因子突变体制造技术

本发明专利技术基于以下发现，即沙格司亭的序列中的氨基酸取代产生具有简化可制造性的产品。的氨基酸取代产生具有简化可制造性的产品。的氨基酸取代产生具有简化可制造性的产品。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】粒细胞巨噬细胞集落刺激因子突变体
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年10月26日提交的美国临时专利申请号63/105,425和2021年4月21日提交的美国临时专利申请号63/177,481的权益和优先权，所述美国临时专利申请的内容特此通过引用整体并入。


[0003]本专利技术总体上涉及关于突变体粒细胞
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巨噬细胞集落刺激因子(GM
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CSF)的组合物和方法。
[0004]序列表
[0005]本申请含有序列表，所述序列表以ASCII格式经由EFS
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Web提交并特此通过引用整体并入。所述ASCII副本创建于2021年10月20日，名称为“PNR
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003PC_ST25.txt”并且大小为4,096字节。

技术介绍

[0006]集落刺激因子CSF是指四种糖蛋白的家族，所述糖蛋白控制和协调广泛分布的骨髓细胞沉积物的细胞产生。这些包括：粒细胞
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巨噬细胞CSF(GM
‑r/>CSF)、粒细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM
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CSF)蛋白的组合物，所述重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM
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CSF)蛋白包含与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有至少约97％同一性且在位置N37、E38和/或T39或与其对应位置处具有取代或缺失。2.如权利要求1所述的重组蛋白，其中位置N37或与其对应位置处的氨基酸是极性和电荷中性亲水性氨基酸。3.如权利要求2所述的重组蛋白，其中所述极性和电荷中性亲水性氨基酸选自谷氨酰胺(Q)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)、脯氨酸(P)和半胱氨酸(C)。4.如权利要求3所述的重组蛋白，其中所述极性和电荷中性亲水性氨基酸是谷氨酰胺(Q)。5.如权利要求1所述的重组蛋白，其中位置E38或与其对应位置处的氨基酸是疏水性脂肪族氨基酸和/或不是脯氨酸。6.如权利要求5所述的重组蛋白，其中所述疏水性脂肪族氨基酸选自丙氨酸(A)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)。7.如权利要求1所述的重组蛋白，其中位置T39或与其对应位置处的氨基酸是疏水性脂肪族氨基酸。8.如权利要求7所述的重组蛋白，其中所述疏水性脂肪族氨基酸选自丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、亮氨酸(L)、异亮氨酸(I)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)。9.如权利要求8所述的重组蛋白，其中所述疏水性脂肪族氨基酸是丙氨酸(A)。10.如权利要求1
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9中任一项所述的重组蛋白，其中所述组合物结合和/或激活所述粒细胞
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巨噬细胞集落刺激因子受体(GM
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CSF
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R
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α或CSF2R)。11.如权利要求10所述的重组蛋白，其中所述GM
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CSF
‑
R
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α在细胞表面上表达。12.如权利要求11所述的重组蛋白，其中所述细胞是造血祖细胞。13.如权利要求12所述的重组蛋白，其中所述造血祖细胞是免疫细胞。14.如权利要求12所述的重组蛋白，其中所述造血祖细胞经辐照。15.如上述权利要求中任一项所述的重组蛋白，其中所述重组人GM
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CSF是可溶的。16.如上述权利要求中任一项所述的重组蛋白，其中所述重组人GM
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CSF在功能上类似于沙格司亭。17.如上述权利要求中任一项所述的重组蛋白，其中所述重组人GM
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CSF包含多种分子形式。18.如权利要求17所述的重组蛋白，其中所述分子形式选自非糖基化形式、O
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糖基化形式、N
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糖基化形式和N+O糖基化形式。19.如上述权利要求中任一项所述的重组蛋白，其中所述重组人GM
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CSF基本上不含高甘露糖基化形式。20.如上述权利要求中任一项所述的重组蛋白，其中所述重组人GM
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CSF在通过反相高效液相色谱法(RP
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HPLC)定量时解析为三个峰。21.如上述权利要求中任一项所述的重组蛋白，其中当通过反相高效液相色谱法(RP
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HPLC)定量时，所述重组人GM
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CSF在小于约20分钟的保留时间下不提供显著峰。22.如上述权利要求中任一项所述的重组蛋白，其中所述重组人GM
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CSF在不使用有机溶剂纯化时基本上不含高甘露糖基化形式。
23.如上述权利要求中任一项所述的重组蛋白，其中所述重组人GM
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CSF任选地在不使用反相C4 HPLC柱进行纯化时基本上不含高甘露糖基化形式。24.一种核酸分子，所述核酸分子编码如上述权利要求中任一项所述的重组人GM
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CSF。25.如权利要求24所述的核酸，其中所述核酸分子具有密码子优化的序列。26.一种非人宿主细胞，所述非人宿主细胞表达如权利要求23或24所述的核酸分子。27.如权利要求26所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是酵母细胞。28.如权利要求27所述的宿主细胞，其中所述酵母细胞是非甲基营养型酵母细胞。29.如权利要求28所述的宿主细胞，其中所述宿主细胞是酿酒酵母细胞。30.一种药物组合物，所述药物组合物包含上述权利要求中任一项所述的重组人GM
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CSF和药学上可接受的赋形剂或载体。31.一种治疗正在进行或已经进行癌症疗法或者正在进行或已经进行骨髓移植和/或已经急性暴露于骨髓抑制剂量的辐照的患者或受试者的方法；所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的如权利要求30所述的药物组合物。32.如权利要求31所述的方法，其中通过调节造血祖细胞的克隆扩增、存活、分化和激活状态来治疗所述患者。33.如权利要求31所述的方法，其中通过调节骨髓单核细胞谱系、通过促进巨核细胞和红系祖细胞的增殖来治疗所述患者。34.如权利要求31所述的方法，其中通过调节造血祖细胞、通过刺激嗜中性粒细胞、巨噬细胞和/或树突细胞的存活、增殖和激活来治疗所述患者。35.如权利要求31所述的方法，其中在骨髓移植后通过调节造血祖细胞、通过刺激嗜中性粒细胞、巨噬细胞和/或树突细胞的存活、增殖和激活来治疗所述患者。36.一种治疗方法，所述治疗方法包括向患者施用治疗有效量的如权利要求30所述的药物组合物，或使细胞与有效量的如权利要求30所述的药物组合物接触并施用治疗有效量的所述细胞，其中所述疗法：加速嗜中性粒细胞恢复和/或降低诱导化学疗法后感染的发生率；将造血祖细胞动员到外周血中以通过白细胞去除术收集和移植；加速自体或同种异体骨髓或外周血祖细胞移植后的骨髓重建；治疗自体或同种异体骨髓移植后嗜中性粒细胞恢复延迟或移植失败；和/或治疗急性放射综合征的造血综合征(H
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ARS)。37.一种用于治疗冠状病毒感染的方法，所述方法包括：向有需要的患者施用有效量的包含如权利要求1
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22中任一项所述的重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM
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CSF)蛋白的组合物。38.如权利要求36所述的方法，其中所述冠状病毒是乙型冠状病毒，任选地选自严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS
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CoV
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2)、SARS
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CoV、中东呼吸综合征
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冠状病毒(MERS
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CoV)、HCoV
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HKU1和HCo V
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OC43。39.如权利要求37所述的方法，其中所述冠状病毒是甲型冠状病毒，任选地选自HCoV
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NL63和HCoV
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229E。
40.如权利要求39所述的方法，其中所述冠状病毒是SARS
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CoV
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2。41.如权利要求40所述的方法，其中所述患者患有COVID
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19。42.如权利要求37
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41中任一项所述的方法，其中所述患者患有发烧、咳嗽、气短、腹泻、上呼吸道症状、下呼吸道症状、肺炎和急性呼吸综合征中的一种或多种。43.如权利要求37
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42中任一项所述的方法，其中所述患者缺氧。44.如权利要求37
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43中任一项所述的方法，其中所述患者患有呼吸窘迫。45.如权利要求37
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44中任一项所述的方法，其中所述方法预防或减轻所述患者中急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的发展。46...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：合作伙伴治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：