CTC检测质控品的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种CTC检测质控品的制备方法，所述CTC检测质控品由人T淋巴细胞白血病细胞和肿瘤细胞混合后经冷冻干燥处理得到。本发明专利技术实施方式的CTC检测质控品，以人T淋巴细胞白血病细胞作为背景细胞，以肿瘤细胞作为目的细胞，采用冷冻干燥技术对两者混合的细胞进行冻干，并可长期运输保存。使用时只需对其进行复水便可进行后续测试，这样解决了血液具有时效性，伦理性，无法长期运输保存，人的个体差异比较大等问题。本发明专利技术的CTC检测质控品可以长期运输保存，并且可以极大可能的保证了对CTC检测的质检结果准确性。测的质检结果准确性。测的质检结果准确性。

【技术实现步骤摘要】
CTC检测质控品的制备方法


[0001]本专利技术是关于生物检测
，特别是关于一种CTC检测质控品的制备方法。

技术介绍

[0002]随着CTC检测技术的不断发展，越来越多的技术陆续涌现，在技术不断更新迭代的同时，该领域往往是针对于样本直接进行检测，没有一个标准的质控品对整个过程进行质控，无法判断检测结果的准确性及无法溯源造成某些问题出现的原因。此外，一些技术在测试或装机验证时会用新鲜的血液作为一个初步的质控，由于血液具有时效性，伦理性，无法长期运输保存，人的个体差异比较大等原因，这种方式无法长期满足该技术的需求。
[0003]公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种CTC检测质控品，其具有能够长期运输保存的优点。
[0005]本专利技术的目的还在于提供一种CTC检测质控品的制备方法。
[0006]为实现上述目的，本专利技术的实施例提供了一种CTC检测质控品，所述CTC检测质控品由人T淋巴细胞白血病细胞和肿瘤细胞混合后经冷冻干燥处理得到。
[0007]在本专利技术的一个或多个实施方式中，所述人T淋巴细胞白血病细胞为Jurkat细胞；所述肿瘤细胞为SK
‑
BR
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3细胞、ACHN细胞以及Huh7细胞中的任意一种。
[0008]在本专利技术的一个或多个实施方式中，所述人T淋巴细胞白血病细胞与肿瘤细胞的细胞数之比为106：(5～10)。
[0009]在本专利技术的一个或多个实施方式中，所述CTC检测质控品中所述肿瘤细胞的细胞数为50～100。
[0010]本专利技术的实施例还提供了一种CTC检测质控品的制备方法，包括以下步骤：
[0011]将人T淋巴细胞白血病细胞与冻干保护液混合重悬，并加入肿瘤细胞混合均匀；
[0012]进行初次冷冻；
[0013]进行二次冷冻和干燥处理，即得到所述CTC检测质控品。
[0014]在本专利技术的一个或多个实施方式中，所述冻干保护液按质量分数计，包括以下原料组分：5％
‑
10％的DMSO，1％
‑
2％的海藻糖，10％
‑
20％的PVP360，1％
‑
2％的BSA，余量为PBS缓冲液。
[0015]在本专利技术的一个或多个实施方式中，所述初次冷冻包括：
‑
80～
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75℃冷冻6～8h；
[0016]所述二次冷冻和干燥处理包括：在真空的条件下，
‑
60～
‑
55℃冷冻干燥12～16h。
[0017]在本专利技术的一个或多个实施方式中，所述制备方法还包括以下步骤：
[0018]对得到的所述CTC检测质控品进行质量检测。
[0019]在本专利技术的一个或多个实施方式中，对所述CTC检测质控品进行质量检测的步骤包括：
[0020]使用PBS缓冲液对所述CTC检测质控品进行充分重悬和复水；
[0021]使用CTC检测技术进行肿瘤细胞回收效率测试；
[0022]其中，所述肿瘤细胞回收效率＝CTC检测技术检测到的肿瘤细胞数量/CTC检测质控品中初始的肿瘤细胞数量
×
100％
[0023]在本专利技术的一个或多个实施方式中，对所述CTC检测质控品进行质量检测的步骤还包括：
[0024]对进行充分重悬和复水的CTC检测质控品进行染色并拍照，以观察复水处理后的所述人T淋巴细胞白血病细胞和肿瘤细胞的完整性。
[0025]与现有技术相比，根据本专利技术实施方式的CTC检测质控品，以人T淋巴细胞白血病细胞作为背景细胞，以肿瘤细胞作为目的细胞，采用冷冻干燥技术对两者混合的细胞进行冻干，并可长期运输保存。使用时只需对其进行复水便可进行后续测试，这样解决了血液具有时效性，伦理性，无法长期运输保存，人的个体差异比较大等问题。本专利技术的CTC检测质控品可以长期运输保存，并且可以极大可能的保证了CTC检测的准确性。
附图说明
[0026]图1是根据本专利技术实施例1中使用DAPI染色液对SK
‑
BR
‑
3细胞核进行染色的拍照图；
[0027]图2是根据本专利技术实施例1中使用CTC细胞的标志性表面阳性蛋白Pan
‑
CK抗体进行染色的拍照图；
[0028]图3是根据本专利技术实施例1中使用CTC细胞的标志性表面阴性蛋白CD45抗体进行染色的拍照图；
[0029]图4是图1～3的Merge图；
[0030]图5是根据本专利技术实施例1中使用DAPI染色液对Jurkat细胞核进行染色的拍照图；
[0031]图6是根据本专利技术实施例1中使用Jurkat细胞的标志性表面阳性蛋白CD45抗体进行染色的拍照图；
[0032]图7是根据本专利技术实施例1中使用Jurkat细胞的标志性表面阴性蛋白Pan
‑
CK抗体进行染色的拍照图；
[0033]图8是图5～7的Merge图；
[0034]图9是根据本专利技术一实施方式的CTC检测质控品的制备方法的流程图。
具体实施方式
[0035]下面结合附图，对本专利技术的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本专利技术的保护范围并不受具体实施方式的限制。
[0036]除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
[0037]肿瘤的发现和诊断目前仍高度依赖于影像学及肿瘤特异性血清标志物的方法，其不能及时有效的发现肿瘤的转移和复发。循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells，CTCs)是指自发或因诊疗操作由实体瘤或转移灶释放进入外周血循环的肿瘤细胞，是恶性肿瘤患
者出现术后复发和远处转移的重要原因。
[0038]越来越多新技术的发展使分离和鉴定循环肿瘤细胞成为可能，其CTC的检测已被认为是一个可靠的预后指标，在治疗过程中随时预测疾病的进展和患者的存活时间，从而能够为患者治疗制定更明确的治疗方案。
[0039]目前主流的CTC检测技术是先捕获(富集)后检测，少量方法是不捕获(富集)直接检测。CTC检测技术包括CTC的富集(分离)和CTC的分析鉴定(识别)。其方法可以分为生物化学特性富集法(亲和性富集法)和物理特性富集法。亲和性富集法主要是根据通过细胞表面特异性表达的蛋白质生物标志物分离靶细胞，包括正向捕获CTC的阳性富集法和负向去除白细胞的阴性富集法。物理特性富集法主要是根据CTC的大小、密度、力学和介电性能等物理特性将CTC筛选出来。其主要方法包括基于物理特性的粗分离技术，基于生化特性的免疫磁珠技术，基于物理或生化特性的微流控芯片技术。目前从本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CTC检测质控品，其特征在于，所述CTC检测质控品由人T淋巴细胞白血病细胞和肿瘤细胞混合后经冷冻干燥处理得到。2.如权利要求1所述的CTC检测质控品，其特征在于，所述人T淋巴细胞白血病细胞为Jurkat细胞；所述肿瘤细胞为SK
‑
BR
‑
3细胞、ACHN细胞以及Huh7细胞中的任意一种。3.如权利要求1所述的CTC检测质控品，其特征在于，所述人T淋巴细胞白血病细胞与肿瘤细胞的细胞数之比为106：(5～10)。4.如权利要求3所述的CTC检测质控品，其特征在于，所述CTC检测质控品中所述肿瘤细胞的细胞数为50～100。5.一种CTC检测质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将人T淋巴细胞白血病细胞与冻干保护液混合重悬，并加入肿瘤细胞混合均匀；进行初次冷冻；进行二次冷冻和干燥处理，即得到所述CTC检测质控品。6.如权利要求5所述的CTC检测质控品的制备方法，其特征在于，所述冻干保护液按质量分数计，包括以下原料组分：5％
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10％的DMSO，1％
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2％的海藻糖，10％
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20％的PVP360，1％
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【专利技术属性】
技术研发人员：颜菁，王伟，彭靖元，章桂香，侯舒捷，
申请(专利权)人：江苏汇先医药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：