一种萃取平菇蛋白的绿色方法技术

本发明专利技术公开了一种萃取平菇蛋白的绿色方法，将平菇干燥后粉碎，得到平菇粉，将平菇粉以1：20料液比溶于去离子水中后，调pH10，然后加热至45

【技术实现步骤摘要】
一种萃取平菇蛋白的绿色方法


[0001]本专利技术属于蛋白质提取
，具体涉及一种萃取平菇蛋白的绿色方法。

技术介绍

[0002]平菇(Pleurotus ostreatus)隶属于伞菌目(Agaricales)、侧耳科(Pleurotaceae)、侧耳属(Pleurotus)，是我国当前栽培产量最高的四大食用菌品种之一。据报道，平菇蛋白具免疫调节、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化及抗高胆固醇血症等潜在功效，在医药领域应用前景大。研究表明，每100g干平菇中蛋白质含量可达19
‑
26g，必需氨基酸含量充足。近年来，食用菌已被认为是一种极具潜力的新型蛋白质来源，因此对于平菇蛋白的提取与研究具有重要的理论和实际意义。
[0003]目前最成熟的蛋白质提取方法是碱提酸沉法，此方法操作简单，成本低，但纯度较低，蛋白质在高浓度的酸或碱液中容易产生有害物质及发生不可逆变性，导致蛋白质营养价值下降。另一方面，目前常见的蛋白质分离纯化方法有凝胶色谱及离子色谱法、等电点沉淀法、电泳法及凝胶层析法等。传统色谱技术分离纯化蛋白质效率高、检测灵敏度高，但步骤过多，操作复杂，耗费试剂，操作成本较高，产品损失较大，不利于工业大规模生产。因此，需要寻求一种更经济高效、绿色环保的蛋白质萃取技术，来获得高纯度高产量且生物活性较高的产品。
[0004]随着绿色化学的发展，双水相萃取技术由于其分离条件温和、易放大、成本低廉和强大的可调节性在众多纯化技术中脱颖而出。它的优势在于，双水相体系中含有大量的水，萃取时接近生物物质的生理环境，因此蛋白质不会失活或变性，尤其适合用于热敏蛋白，并且能够同时做到分离、纯化两步骤一步完成。设备要求低，操作简单易于放大，可实现工业连续自动操作。但目前并没有采用双水相萃取平菇蛋白方面的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种萃取平菇蛋白的绿色方法，即双水相法。该方法简化了蛋白萃取过程，蛋白产率高、经济高效、绿色环保，易于放大操作。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]一种萃取平菇蛋白的绿色方法，包括如下步骤：
[0008](1)将平菇干燥后粉碎，得到平菇粉，将平菇粉以1：20料液比加入到去离子水中，搅拌溶解后，用氢氧化钠溶液调pH10，然后加热至45
‑
55℃，搅拌提取2
‑
4h，结束后离心，收集上清液，得到平菇蛋白粗提液；
[0009](2)往平菇蛋白粗提液中加入PEG2000、(NH4)2SO4和去离子水，混合均匀后得到双水相萃取体系，静置分层，得到上相和下相，保留上相；
[0010](3)将上相分离出来后，离心，将得到的沉淀水洗后冻干，得到平菇蛋白。
[0011]步骤(2)中，所述双水相萃取体系中，PEG2000的质量浓度为15％～40％，(NH4)2SO4的质量浓度为20％～25％。
[0012]进一步，步骤(1)中，所述离心条件为：3000g，20min。
[0013]进一步，步骤(2)中，所述双水相萃取体系中，平菇蛋白粗提液的质量占15％～27％，更优选为26％。
[0014]进一步，步骤(2)中，所述双水相萃取体系中，PEG2000的质量浓度为19.5％，(NH4)2SO4的质量浓度为22.6％。
[0015]进一步，步骤(2)中，所述静置分层的时间为30min。
[0016]进一步，步骤(3)中，所述离心条件为：3000g，10min。
[0017]与现有技术相比，本专利技术的技术方案具有如下技术效果：
[0018](1)本专利技术采用双水相萃取技术，对平菇蛋白进行提取，该方法具有操作条件温和、设备简单、易于操作、耗时短、成本低、无有机物质残留问题、试剂用量少、对环境和人体的危害小等优势。
[0019](2)本专利技术方法能够避免传统液
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液萃取技术中有机溶剂与活性物质直接接触，进而对生物活性物质起到保护作用，双水相萃取的生物亲和性能够使得初步纯化后的平菇蛋白直接应用于后续的各种研究中，使操作趋于简便。
[0020](3)本专利技术方法分离条件温和、操作步骤简单、耗时短，所需设备少。
[0021](4)本专利技术方法绿色环保、高效经济，平菇蛋白的产率高，并且能够保持蛋白的生物活性。
[0022](5)本专利技术方法各参数可按比例放大，易于实现工业化投产。
附图说明
[0023]图1为实施例1萃取得到的平菇蛋白的SDS
‑
PAGE电泳图。
具体实施方式
[0024]下面结合实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。所述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0025]实施例1
[0026]一种萃取平菇蛋白的绿色方法，包括如下步骤：
[0027](1)将平菇干燥后粉碎，得到平菇粉，将5g平菇粉以1：20料液比加入到去离子水中，搅拌溶解后，用1mol/L的氢氧化钠溶液调pH10，然后加热至50℃，搅拌提取2.5h，结束后离心(3000g，20min)，收集上清液，得到平菇蛋白粗提液；
[0028](2)往2.6g平菇蛋白粗提液中加入1.95gPEG2000、2.26g(NH4)2SO4和3.19g去离子水，混合均匀后得到双水相萃取体系，静置分层30min，得到上相和下相，保留上相；
[0029]采用考马斯亮蓝法测得上相中平均蛋白浓度为1.71mg/mL，平菇蛋白的萃取率为93.14％。其中，萃取率根据公式计算：E＝C
上
×
V
上
/(C
上
×
V
上
+C
下
×
V
下
)，其中C
上
、C
下
分别是双水相的上相和下相中蛋白质浓度，V
上
、V
下
分别是上相和下相的体积。
[0030](3)将上相物质分离出来后，离心(3000g，10min)，将得到的沉淀水洗后冻干，得到平菇蛋白1.15g。
[0031]图1为实施例1萃取得到的平菇蛋白的SDS
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PAGE电泳图，其中，泳道1为Marker，泳道2和3均为实施例1萃取得到的平菇蛋白，可以看出，平菇蛋白质的亚基分布较为集中，共
有3个条带，其中条带a和b在52
‑
66kDa之间，条带c在10
‑
15kDa之间。经比较，本专利技术萃取得到的平菇蛋白与同伞菌目香菇蛋白有类似条带(15kDa、22kDa、52.73kDa)，这说明双水相法能够萃取出平菇蛋白。
[0032]以上对本专利技术的具体实施例进行了描述，需要理解的是，本专利技术并不局限于上述特定实施方式。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种萃取平菇蛋白的绿色方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将平菇干燥后粉碎，得到平菇粉，将平菇粉以1：20料液比加入到去离子水中，搅拌溶解后，用氢氧化钠溶液调pH10，然后加热至45
‑
55℃，搅拌提取2
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4h，结束后离心，收集上清液，得到平菇蛋白粗提液；(2)向平菇蛋白粗提液中加入PEG2000、(NH4)2SO4和去离子水，混合均匀后得到双水相萃取体系，静置分层，得到上相和下相，保留上相；(3)将上相分离出来后，离心，将得到的沉淀水洗后冻干，得到平菇蛋白；步骤(2)中，所述双水相萃取体系中，PEG2000的质量浓度为15％～40％，(NH4)2SO4的质量浓度为20％～25％。...

【专利技术属性】
技术研发人员：王猛，谢慧贤，张英男，杨智涞，胡秋辉，杨文建，马宁，裴斐，马高兴，苏安祥，
申请(专利权)人：南京财经大学，
类型：发明
国别省市：