一种豌豆糖肽及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种豌豆糖肽及其制备方法与应用，属于豌豆糖肽制备技术领域。本发明专利技术以碱性蛋白酶酶解豌豆蛋白粉制备的豌豆肽为原料，豌豆肽与木糖共价结合，发生糖基化反应制得糖基化产物。采用本发明专利技术方法制得的糖基化产物具有高接枝度，且接糖量能够高达133.42mg/g。另外，采用本发明专利技术方法制得的糖基化产物具有更强的抗氧化活性，能够有效降低酒精对机体造成的氧化应激损伤，拮抗机体酒精性肝损伤。而且本发明专利技术糖基化产物能够通过调节机体Keap1

【技术实现步骤摘要】
一种豌豆糖肽及其制备方法与应用


[0001]本专利技术属于豌豆糖肽制备
，尤其涉及一种豌豆糖肽及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]酒精性肝损伤是长期大量饮酒引发的肝脏疾病。乙醇能够直接对各种细胞器、酶的结构和功能产生损害，同时也能够限制线粒体脂肪酸的β氧化，导致脂质过氧化反应，进而抑制谷胱甘肽的生物合成，继而使其抗氧化功能减弱。酒精在体内代谢可引起氧化应激和脂质过氧化反应，两者都会导致肝细胞内部分细胞器的结构发生改变，进而引起肝细胞功能的紊乱。此外，长期过量饮酒还会导致抗氧化酶的活性和数量下降，并加重肝脏氧化应激。因此寻找能够有效拮抗酒精性肝损伤的物质对于酒精性肝损伤的防治具有积极意义。
[0003]糖基化终产物是指在非酶促条件下，蛋白质、氨基酸、脂类或核酸等大分子物质的游离氨基与还原糖的醛基经过缩合、重排、裂解、氧化修饰后产生的一种稳定的终末产物。现有技术中对于豌豆肽糖基化改性和豌豆糖肽的生物学评价研究工作较少。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种豌豆糖肽及其制备方法与应用，本专利技术豌豆糖肽的制备方法能使糖基化产物的接糖量高达133.42mg/g，而且能够显著提高豌豆肽的抗氧化活性，采用本专利技术制备方法制备所得的豌豆糖肽具有显著的拮抗酒精性肝损伤效果。
[0005]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供了以下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种豌豆糖肽的制备方法，包括如下步骤：将木糖与豌豆肽混合溶于水中进行反应，反应体系中豌豆肽的浓度为2.5
‑
3.5％，选取分子量为200Da以上的样品即为豌豆糖肽。
[0007]优选的，所述木糖与豌豆肽的质量比为1:1
‑
3:1。
[0008]优选的，反应时溶液的pH值为8.0
‑
9.0。
[0009]优选的，所述反应的温度为83
‑
88℃，所述反应的时间为2.5
‑
3.5h。
[0010]优选的，所述豌豆肽为采用碱性蛋白酶酶解豌豆蛋白获得。
[0011]优选的，酶解所用的碱性蛋白酶酶量为900
‑
1100U/g蛋白。
[0012]优选的，酶解温度为45
‑
55℃，酶解的时间为1.5
‑
2.5h。
[0013]本专利技术还提供了一种上述制备方法制备所得的豌豆糖肽。
[0014]本专利技术还提供了一种上述豌豆糖肽在制备拮抗酒精性肝损伤产品中的应用。
[0015]优选的，所述豌豆糖肽的浓度为1000μg/mL以下。
[0016]本专利技术的有益效果：
[0017]本专利技术以碱性蛋白酶酶解豌豆蛋白粉制备的豌豆肽为原料，豌豆肽与木糖共价结合，发生糖基化反应制得糖基化产物。采用本专利技术方法制得的糖基化产物具有高接枝度，且
接糖量能够高达133.42mg/g，另外，采用本专利技术方法制得的糖基化产物具有更强的抗氧化活性，能够有效降低酒精对机体造成的氧化应激损伤，拮抗机体酒精性肝损伤。而且本专利技术糖基化产物能够通过调节机体Keap1
‑
Nrf2/ARE信号通路相对基因表达量的方式，减轻机体的酒精性肝损伤。
附图说明
[0018]图1为不同pH值对糖基化产物接枝度(A)、接糖量(B)和抗氧化活性(C)的影响；
[0019]图2为不同时间对糖基化产物接枝度(A)、接糖量(B)和抗氧化活性(C)的影响；
[0020]图3为不同温度对糖基化产物接枝度(A)、接糖量(B)和抗氧化活性(C)的影响；
[0021]图4为木糖与豌豆肽的不同质量比对糖基化产物接枝度(A)、接糖量(B)和抗氧化活性(C)的影响；
[0022]图5为不同豌豆肽浓度对糖基化产物接枝度(A)、接糖量(B)和抗氧化活性(C)的影响；
[0023]图6为不同酒精浓度对斑马鱼幼鱼生存率的影响；
[0024]图7为酒精对斑马鱼肝脏荧光形态和病理评价结果，其中A和B为荧光倒置显微镜下观察肝组织形态结果，a和b为石蜡切片、HE染色后观察结果，A、a为空白对照组，B、b为模型组；
[0025]图8为不同糖基化产物浓度对斑马鱼幼鱼生存率的影响；
[0026]图9为糖基化产物给药处理24h后斑马鱼幼鱼肝脏荧光形态变化，其中A.空白对照组；B.模型组；C.阳性对照组(GSH)；D.豌豆肽组；E.低剂量组；F.中剂量组；G.高剂量组；
[0027]图10为斑马鱼幼鱼肝组织病理观察结果，其中A.空白对照组；B.模型组；C.阳性对照组(GSH)；D.豌豆肽组；E.低剂量组；F.中剂量组；G.高剂量组；
[0028]图11为糖基化产物对斑马鱼酒精氧化损伤模型Keap1
‑
Nrf2/ARE通路的调控结果，其中(A)keap1水平，(B)Nrf2表达水平，(C)SOD表达水平，(D)CAT表达水平；
[0029]图12为糖基化产物对斑马鱼幼鱼与谷光甘肽合成相关基因表达的影响，其中(A)gstk1水平，(B)gsr表达水平，(C)gpxla表达水平，(D)idH1表达水平。
具体实施方式
[0030]本专利技术提供了一种豌豆糖肽的制备方法，包括如下步骤：将木糖与豌豆肽混合溶于水中进行反应，反应体系中豌豆肽的浓度为2.5
‑
3.5％，选取分子量为200Da以上的样品即为豌豆糖肽。
[0031]在本专利技术中，所述豌豆肽优选的为采用碱性蛋白酶酶解豌豆蛋白获得。本专利技术对于豌豆蛋白的具体来源没有特殊限定，采用本领域常规豌豆蛋白粉即可。本专利技术对于碱性蛋白酶的具体来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品即可。在本专利技术中，所述酶解所用的碱性蛋白酶酶量优选为900
‑
1100U/g蛋白，更优选为1000U/g蛋白；所述酶解的温度优选为45
‑
55℃，更优选为50℃，所述酶解的时间优选为1.5
‑
2.5h，更优选为2h。
[0032]在本专利技术中，获得豌豆肽后，优选的将木糖与豌豆肽按照质量比为1:1
‑
3:1的比例混合溶于水中，更优选的按照糖肽质量比2：1的比例混合溶于水中，使反应体系中豌豆肽的浓度优选为2.8
‑
3.2％。将木糖与豌豆肽混合溶于水中以后，优选的需搅拌均匀，本专利技术对
于搅拌的具体方式没有特殊限定。搅拌均匀后，优选的需调节反应溶液的pH值，所述pH值优选为8.0
‑
9.0，更优选为9.0。在本专利技术中，所述反应的温度优选为83
‑
88℃，更优选为85℃，所述反应的时间优选为2.5
‑
3.5h，更优选为3h。本专利技术对于木糖的具体来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品均可。本专利技术对于木糖的具体来源没有特殊限定，采用本领域常规市售产品均可。
[0033]本专利技术还提供了一种上述制备方法制备所得的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种豌豆糖肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将木糖与豌豆肽混合溶于水中进行反应，反应体系中豌豆肽的浓度为2.5
‑
3.5％，选取分子量为200Da以上的样品即为豌豆糖肽。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述木糖与豌豆肽的质量比为1:1
‑
3:1。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，反应时溶液的pH值为8.0
‑
9.0。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反应的温度为83
‑
88℃，所述反应的时间为2.5
‑
3.5h。5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓兰，郑喜群，刁思雨，赵丹，
申请(专利权)人：齐齐哈尔大学，
类型：发明
国别省市：