一种预防HPV感染的多肽消毒剂组合物制造技术

本发明专利技术公开了一种预防HPV感染的多肽消毒剂组合物及多肽妇科温敏凝胶、多肽妇科栓剂，属于病毒消毒剂技术领域。其有效成分包括由如SEQ ID NO.01所示的第一多肽Gassericin T、如SEQ ID NO.02所示的第二多肽Alloferon

【技术实现步骤摘要】
ID NO.02所示的第二多肽Alloferon
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1的混合多肽，其中，第一多肽的浓度为6
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8μM/Kg，第二多肽的浓度为17
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19μM/Kg。
[0011]优选的，所述第一多肽的浓度为6.68μM/Kg，所述第二多肽的浓度为17.39μM/Kg。
[0012]优选的，还包括泊洛沙姆P407、P188、透明质酸钠和乳酸
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乳酸钠缓冲液，该凝胶在体温成胶，易于在腔道粘附，延长药效。
[0013]为了解决上述技术问题，本专利技术提出的另一技术方案是：一种预防HPV感染的多肽妇科栓剂，其有效成分包括由如SEQ ID NO.01所示的第一多肽Gassericin T、如SEQ ID NO.02所示的第二多肽Alloferon
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1的混合多肽，其中，第一多肽的浓度为6
‑
8μM/Kg，第二多肽的浓度为17
‑
19μM/Kg。
[0014]优选的，所述第一多肽的浓度为6.68μM/Kg。
[0015]优选的，所述第二多肽的浓度为17.39μM/Kg。
[0016]优选的，还包括甘油、明胶、乳酸
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乳酸钠缓冲液，该栓剂有弹性，不易折断，易于在腔道缓慢溶于分泌液，延长药效。
[0017]有益效果：
[0018]本专利技术成分安全，安全性高，适用范围广，并能有效预防HPV病毒感染和减轻HPV感染引发的炎症。
[0019]第一多肽、第二多肽及其组合物能够显著上调卵巢切除小鼠阴道中lgA和lgM表达，说明第一多肽、第二多肽及其组合物上调免疫球蛋白表达，抑制炎症，具有减轻HPV引发炎症反应的特性。
[0020]第二多肽与重组HPV16 E6具有高亲和力；第二多肽可以挽救P53在HPV16阳性癌细胞中的转录和表达活性。
[0021]第一多肽在6.68μM/Kg时达到最佳抗炎浓度，第二多肽在17.39μM/Kg到达最佳抗炎浓度；第一多肽和第二多肽的组合物在优选浓度下72h抗炎率可达到13％，96h抗炎率可达到20％，协同抗炎效果显著。
[0022]第一多肽、第二多肽及其组合物能够降低IL
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1β、IL
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2、IL
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4、IL
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5的水平，因此具有抗炎作用；二者组合物具有协同抗炎效果，且抗炎作用优于阿司匹林。
[0023]细胞毒性测定显示，即使较高浓度的第一多肽或第二多肽对人正常卵巢上皮细胞显示无毒性作用。
附图说明
[0024]下面结合附图对本专利技术的作进一步说明。
[0025]图1为本专利技术实施例2中的第一多肽、第二多肽及其组合物对lgA和lgM表达的影响。
[0026]图2为本专利技术实施例3中的第二多肽与HPV E6的结合能力评价。
[0027]图3为本专利技术实施例4中的第二多肽诱导P53及其靶基因表达结果。
[0028]图4为本专利技术实施例5中不同浓度第一多肽和第二多肽的抗炎效果。
[0029]图5为本专利技术实施例6中第一多肽、第二多肽及其组合物上调炎症因子表达结果。
具体实施方式
[0030]以下通过具体实施方式结合附图对本专利技术的技术方案进行进一步的说明和描述。
[0031]实施例1：第一多肽(Peptide 1)和第二多肽(Peptide 2)的合成方法
[0032]采用固相合成方法分布表合成第一多肽(Peptide1)和第二多肽(Peptide 2)。以二氯树脂为载体树脂，加入所需氨基酸，以N，N
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二异丙基乙胺(DIC)和1
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羟基苯并三唑(HOBt)为缩合剂，Fmoc
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氨基酸为原料缩合，每一步氨基酸连接率用Fmoc法测量。将肽和树脂复合物清洗干燥后加入2mL裂解液，室温反应1小时，抽滤，加过量冰无水乙醚沉淀30min，3000r/min离心5min收集沉淀，反复多次。将收集到沉淀真空干燥沉淀至恒重。经电喷雾离子化质谱(ESI/MS)测定粗肽分量，然后与理论分子量(Peptide 1：7480.5Da；Peptide2：1265.3Da)对照，经真空冷冻干燥后得纯品。
[0033]实施例2：第一多肽(Peptide 1)、第二多肽(Peptide 2)及其组合物(Peptide 1+Peptide 2)对lgA和lgM表达的影响
[0034]实验方法：
[0035]十周龄ICR雌性小鼠随机分为5组，分别为假手术组(Sham)、卵巢切除术组(OVX)、OVX+Peptide 1组、OVX+Peptide 2组和OVX+Peptide 1+Peptide 2组，每组5只。除假手术组外的小鼠均通过卵巢切除术进行去势。小鼠腹腔注射4％水合氯醛溶液麻醉后，俯卧姿势将其固定后清理手术区毛发，用酒精碘伏对小鼠下背部以及侧腹部消毒，在小鼠下背部距两后肢上缘约0.5cm的背中线处向下用手术刀切开一个2
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3cm的纵向切口，用圆头剪扩张分离皮肤与肌肉，在左侧约0.5cm后从创口可见肌层和被它覆盖住的白色脂肪组织，用镊子夹起肌层并切开，轻轻拨开脂肪组织找到左侧卵巢，结扎与左侧卵巢紧密相连的子宫角，摘除左侧卵巢、输卵管和部分子宫角并缝合切开的肌层。以相同操作摘除右侧卵巢。缝合右侧肌层后观察是否出血，然后缝合小鼠皮肤，再次在手术区用酒精碘伏消毒。术后对伤口施用局部抗生素以预防感染并降低因手术导致的动物死亡率。假手术组不摘除卵巢，其他操作与实验组相同。每日阴道推注Peptide 1(6.68μM/Kg)、Peptide 2(17.39μM/Kg)及其组合物，持续八周。给药结束后取阴道组织切片进行免疫荧光染色，检测免疫球蛋白lgA和lgM的表达量，分析荧光强度如图1所示。
[0036]OVX+Peptide 1、OVX+Peptide 2及其组合物的lgA和lgM荧光强度均显著增加，说明第一多肽、第二多肽及其组合物具有上调免疫球蛋白表达、抑制炎症作用，具有减轻HPV引发炎症反应的特性。
[0037]实施例3：基于BIACore分子结合系统检测第二多肽(Peptide 2)与HPV的结合能力
[0038]材料及试剂：Series S Sensor Chip CM5(GE Life100530)、HPV16E6纯化蛋白、Peptide 2、Amine Coupling Kit(GELife100050、PBS、甘氨酸
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盐酸缓冲溶液(pH 2.5))。
[0039]实验方法：
[0040]使用BIACore T200仪器研究所选亲和体分子与目标蛋白的实时生物特异性相互作用。靶蛋白HPV16 E6固定在CM5芯片的羧酸葡聚糖表面上，不同浓度的Peptide 2在25℃下以30μL/min的速度通过芯片。如图2所示，检测到共振信号呈浓度依赖性增加，表明Peptide2与重组HPV16 E6结合良好。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种预防HPV感染的多肽消毒剂组合物，其特征在于：其有效成分包括由如SEQ ID NO.01所示的第一多肽Gassericin T、如SEQ ID NO.02所示的第二多肽Alloferon
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1的混合多肽，其中，第一多肽的浓度为6
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8μM/Kg，第二多肽的浓度为17
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19μM/Kg。2.根据权利要求1所述的多肽消毒剂组合物，其特征在于：所述第一多肽的浓度为6.68μM/Kg，所述第二多肽的浓度为17.39μM/Kg。3.根据权利要求1或2所述的预防HPV感染的多肽消毒剂组合物，其特征在于：还包括蒲公英、金银花、金盏花、透明质酸钠、甘油和水。4.一种预防HPV感染的多肽妇科温敏凝胶，其特征在于：其有效成分包括由如SEQ ID NO.01所示的第一多肽Gassericin T、如SEQ ID NO.02所示的第二多肽Alloferon
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1的混合多肽，其中，第一多肽的浓度为6
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8μM/Kg，第二多肽的浓度为17
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19μM/Kg。5.根据权利要求4所述的多肽妇科温敏凝...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晔，曾子晏，张祥瑞，王天园，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：