一种鉴别绿壳蛋鸡基因型的引物组合物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体提供一种鉴别绿壳蛋鸡基因型的引物组合物及其应用。本发明专利技术所提供的引物组合物包括SLCO1B3基因插入EAV

【技术实现步骤摘要】
一种鉴别绿壳蛋鸡基因型的引物组合物及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种鉴别绿壳蛋鸡基因型的引物组合物及其应用。

技术介绍

[0002]鸡蛋蛋壳按颜色主要分为褐壳、白壳、粉壳、绿壳，是消费者在选购鸡蛋时首先关注的特征之一，其中，绿壳鸡蛋以其独特的蛋壳颜色在许多国家深受消费者喜爱。鸡的绿壳蛋性状是由单基因(O)控制的质量性状，显性纯合子(O/O)个体和显性杂合子(O/o)个体都产绿壳蛋。如果公鸡为杂合子(O/o)，则后代群体理论上一半个体都含有非绿壳蛋基因(o)，这种遗传特点使得依据表型进行纯合绿壳蛋鸡的选育存在困难，有必要使用分子手段对O基因进行精准选择，留下基因型为O/O的个体进行纯繁。目前已经证明鸡的绿壳蛋性状是由SLCO1B3基因上游5
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端一段4.2kb的插入序列引起，并提出了包含4.2kb的长片段PCR扩增来鉴别产绿壳蛋鸡及鸡绿壳蛋基因型的方法来准确区分产绿壳蛋鸡基因型。
[0003]在此基础上，邓学梅等人对PCR扩增引物和程序进行了改进，较好地缩短了检测时间、提高了检测准确性、降低了检测费用，但是这种方法在实际应用中，PCR扩增效率和稳定性有待提高，这可能是使用了不同的Tap酶或引物设计不佳导致的。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术中引物PCR扩增效率和稳定性较低的问题，本专利技术提供一种鉴别绿壳蛋鸡基因型的引物组合物及其应用。
[0005]第一方面，本专利技术提供用于鉴别绿壳蛋鸡基因型的引物组合，包括两对引物对，引物对1的序列为tgaccagcgtagataaacatg(SEQ ID NO.1)和aggttccgaacgcgatgtgac(SEQ ID NO.2)；引物对2的序列为tgaccagcgtagataaacatg(SEQ ID NO.1)和aggtaatgttcattagctac(SEQ ID NO.3)。
[0006]第二方面，本专利技术提供一种试剂或试剂盒，含有上述的引物组合。
[0007]在本专利技术提供的试剂或试剂盒中，还包括2
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TSINGKE Master Mix。
[0008]第三方面，本专利技术提供鉴别绿壳蛋鸡基因型的方法，包括如下步骤：以待测鸡的DNA基因组为模板，用上述的引物组合或上述试剂或试剂盒，进行PCR扩增，获得PCR扩增产物，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。
[0009]在本专利技术提供的鉴别绿壳蛋鸡基因型的方法，若只得到422bp的条带，则待测鸡的SLCO1B3基因基因型为O/O显性纯合型，若只得到292bp的条带，则待测鸡的SLCO1B3基因基因型为o/o隐性纯合型；若得到422bp和292bp的两条条带，则待测鸡的SLCO1B3基因基因型为O/o杂合型。
[0010]本专利技术还请求保护上述的引物组合或上述的试剂或试剂盒，在鉴别鸡是否产绿壳蛋中的应用。
[0011]第四方面，本专利技术提供鉴别鸡是否产绿壳蛋的方法，包括如下步骤：以待测鸡的
DNA基因组为模板，用上述的引物或上述试剂或试剂盒，进行PCR扩增，获得PCR扩增产物，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。
[0012]所述PCR扩增的反应条件为：94℃预变性4分钟；94℃变性80s，54℃退火80s，72℃延伸60s，35个循环；72℃延伸10min；PCR反应体系：50μL体系，2
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TSINGKE Master Mix 25μL，上游引物(10μM)1μL，下游引物(10μM)1μL，DNA模板1μL，ddH2O 22μL。
[0013]在本专利技术提供的鉴别鸡是否产绿壳蛋的方法中，若只得到422bp的条带，则待测鸡为产绿壳蛋鸡；若只得到292bp的条带，则待测鸡不产绿壳蛋；若得到422bp和292bp的两条条带，则待测鸡为产绿壳蛋鸡。
[0014]本专利技术的有益效果在于：
[0015]利用本专利技术所提供的引物组合，能够更加准确鉴定出O/O基因型个体，具有稳定性高、准确度高、成本低的特点。
附图说明
[0016]为了更清楚地说明本专利技术或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作一简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0017]图1是SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示引物的扩增产物电泳结果。图中所用marker由5,000bp、3,000bp、2,000bp、1,000bp、750bp、500bp、250bp、100bp共8条双链DNA组成，其中750bp为指示带，浓度约为150ng/5μL，其余条带浓度均为50ng/5μL；WLH代表白来航。
[0018]图2是SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示引物的扩增产物电泳结果。图中所用marker由5,000bp、3,000bp、2,000bp、1,000bp、750bp、500bp、250bp、100bp共8条双链DNA组成，其中750bp为指示带，浓度约为150ng/5μL，其余条带浓度均为50ng/5μL；WLH代表白来航。
[0019]图3是非绿壳蛋序列blast比对结果图。
[0020]图4是绿壳蛋序列blast比对结果图。
[0021]图5是本专利技术设计引物(以下统称引物1)与邓学梅等人设计引物(以下统称引物2)扩增效果对比图。图中所用marker由2,000bp、1,000bp、750bp、500bp、250bp、100bp共8条双链DNA组成，其中750bp为指示带，浓度约为150ng/5μL，其余条带浓度均为50ng/5μL；WLH代表白来航。
具体实施方式
[0022]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本专利技术中的附图，对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0023]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0024]实施例1
[0025]以包含SLCO1B3基因的待测鸡全基因组DNA为模板，设计特定的引物对以引物对扩增鸡SLCO1B3基因EAV
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HP插入片段序列，将扩增产物在1％的琼脂糖凝胶电泳上进行电泳，电泳完毕后采用凝胶成像系统拍照，判定个体基因型。具体实施方法：
[0026](1)特定引物的设计
[0027]鸡绿壳蛋性状是由1号染色体上SLCO1B3基因上游5
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端一段4.2kb的插入序列引起，所以只需检测个体是否携带这段插入序列即可推定个体表型。
[0028]EAV
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HP插入片段扩增片段引物序列为：
[0029]上游引物：tgacc本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于鉴别绿壳蛋鸡基因型的引物组合，其特征在于，包括两对引物对，引物对1的序列为tgaccagcgtagataaacatg和aggttccgaacgcg atgtgac；引物对2的序列为tgaccagcgtagataaacatg和aggtaatgttcattagct ac。2.一种试剂或试剂盒，其特征在于，含有权利要求1所述的引物组合。3.根据权利要求2所述的试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒中，还包括2
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TSINGKE Master Mix。4.一种鉴别绿壳蛋鸡基因型的方法，其特征在于，包括如下步骤：以待测鸡的DNA基因组为模板，用权利要求1所述的引物组合或权利要求2
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3任一项所述试剂或试剂盒，进行PCR扩增，获得PCR扩增产物，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，若只得到422bp的条带，则...

【专利技术属性】
技术研发人员：曲鲁江，任旭芳，刘聪，朱博，曹国敏，谭文宝，程欢，陈安琪，李树平，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：