葛根素的提取方法及葛根在制备保护肝脏药物中的用途技术

本发明专利技术公开了一种葛根素的提取方法及葛根在制备保护肝脏中的用途，从葛根中提取葛根素；其主要步骤如下：①粉碎、提取；②浓缩；③上柱；④洗脱；⑤浓缩；⑥萃取、浓缩，获得葛根素粗提取物。经过动物实验证明，葛根素具有很好的解毒护肝之功效。与现有技术相比，本发明专利技术具有提取的葛根素纯度高、使用方便的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药
，具体涉及一种葛根素的提取方法及葛根在制备 保护肝脏药物中的用途。
技术介绍
肝脏作为人体内最大的"化工厂"，肩负着分解进入人体一切物质的重任， 特别是对人体有害物质的分解(包括酒精、化学药物、食物的农药残留等)，当 人体有害物质长期大量摄入时，就会导致肝脏自身中毒，肝细胞受到损伤，临 床上常见的脂肪肝、酒精肝及转氨酶、转肽酶增高的主要原因在肝细胞受损肝 脏中毒所致。葛根又叫粉葛、葛藤，生长于地面上的为藤状植物，地下部分为根块状， 葛根生于山坡草丛、路旁、疏林中较阴湿处，在我国分布广泛，盛产广西、广 东、湖南等地。葛根全身是宝，在我国有悠久的应用历史，连葛藤、葛叶、葛 花都有应用之法。经历代医药家不断总结和试验，得出葛根具有性凉、气平、 味甘，具清热、降火、排毒诸功效。用现代医学方法进一步分析表明，葛根中 富含多达13种异黄酮类物质，包括葛根素、葛雌素、葛根素木糖甙、大豆黄酮 等，葛根素对高血压、高血脂、高血糖和心脑血管疾病有疗效。而现有提取葛 根素的方法很多，但是其提取的纯度不高，并且由于葛根的产量大，人们对葛 根的用途还有待进一步发掘。
技术实现思路
因此人类对葛根的用途仍存在需求，.至今为止，还没有发现任何有关本专利技术药物的报道，本专利技术人经过反复研究，终于找到了葛根提取物葛根素的另一 提取方法及其用途。 ' 本专利技术的目的是提供一种葛根素的提取方法。 本专利技术的另一 目的是提供葛根在制备保护肝脏中的用途。本专利技术所述葛根提取物葛根素在保护肝脏功能方面有较好的疗效，可以从葛根中提取葛根素；其主要步骤如下① 粉碎、提取将葛根粉碎后过io目筛，称取定量葛根粉，置于提取罐中，先用其质量4倍体积的蒸镏水或浓度为95%乙醇或甲醇作溶剂回流提取l 1.5h ，过滤，滤渣再用2倍体积的上述溶剂回流提取lh ，再次过滤，收集、 合并两次滤液，获得葛根素粗提液；② 浓縮将醇提取液置于真空浓縮器中，控制真空度为-0. 1 0.08MPa ， 浓縮温度为85 90。C ，回收甲醇或乙醇；③ 上柱取定量活化DIOI大孔吸附树脂装柱，按照其对葛根素的吸附容 量计算出应吸附的提取液体积，将提取液泵入树脂柱中，控制流出液速度为1 -1.5倍树脂柱体积/h ，使葛根素吸附于DIOI吸附树脂上；④ 洗脱当上柱液流完后，先用蒸馏水洗涤，洗去糖类、蛋白质、鞣质水 溶性杂质，直至洗脱液近无色时止，然后用70%的乙醇溶液进行洗脱，控制洗 脱液流出速度为1-1.5倍树脂柱体积/h ，用12倍树脂体积的洗脱液即可 洗脱被树脂吸附的85%以上的葛根素； 浓縮将洗脱液置于真空浓縮机中，控制真空度为-0. 1 0.08MPa，浓 縮温度为85 9(TC ，回收乙醇直至浓縮液相对密度为1.2时止；⑥萃取、浓缩、干燥将浓縮液置于萃取器中，加入等体积正丁醇，反复萃取4次，收集正丁醇相，再次进行真空减压浓縮至干，浓缩条件同提取液，获 得葛根素粗提取物。本专利技术是专利技术人经过长期大量摸索总结得来的，发现所述葛根提取物葛根 素在保护肝脏功能方面有较好的疗效。经过动物实验证明，葛根具有很好的解毒护肝之功效。与现有技术相比， 本专利技术具有提取的葛根素纯度高、使用方便的优点。 具体实施例方式本专利技术所述葛根提取物葛根素在保护肝脏功能方面有较好的疗效，可以从葛根中提取葛根素；其主要步骤如下① 粉碎、提取将葛根粉碎后过IO目筛，称取定量葛根粉，'置于提取罐 中，先用其质量4倍体积的蒸馏水或浓度为95%乙醇或甲醇作溶剂回流提取l 1.5h ，过滤，滤渣再用2倍体积的上述溶剂回流提取lh ，再次过滤，收集、 合并两次滤液，获得葛根素粗提液；② 浓縮将醇提取液置于真空浓縮器中，控制真空度为-0. 1 0.08MPa ， 浓缩温度为85 9(TC ，回收甲醇或乙醇；◎上柱取定量活化DIOI大孔吸附树脂装柱，按照其对葛根素的吸附容 量计算出应吸附的提取液体积，将提取液泵入树脂柱中，控制流出液速度为1 -1.5倍树脂柱体积/h ，使葛根素吸附于DIOI吸附树脂上； 洗脱当上柱液流完后，先用蒸馏水洗涤，洗去糖类、蛋白质、鞣质水 溶性杂质，直至洗脱液近无色时止，然后用70 %的乙醇溶液进行洗脱，控制 洗脱液流出速度为1-1.5倍树脂柱体积/h ，用12倍树脂体积的洗脱液即 可洗脱被树脂吸附的85。％以上的葛根素；⑤ 浓縮将洗脱液置于真空浓縮机中，控制真空度为-O. 1 0.08MPa，浓 縮温度为85 90°C ，回收乙醇直至浓縮液相对密度为1. 2时止；⑥ 萃取、浓縮、干燥将浓縮液置于萃取器中，加入等体积正丁醇，反复萃 取4次，收集正丁醇相，再次进行真空减压浓縮至干，浓縮条件同提取液，获 得葛根素粗提取物。葛根素粗操取物为浅褐色粉末。将获得的葛根素粗提取物再次用有机溶剂溶解，进行重结晶，.可获得高纯反广叩。观察葛根素(葛根素)对肝硬化大鼠肝脏缺血再灌注损伤是否具有保护作用。方法首先建立大鼠肝硬化动物模型，在此模型基础上建立大鼠全肝缺血 再灌注模型，比较用葛根素预处理对缺血再灌注后，肝组织光镜下的形态学改变；血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和氧化亚 氮(NO)、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性，及肝组织中NO、 肿瘤坏死因子a (TNF-a) 、 MDA含量、SOD活性变化。结果葛根素预处理可使大鼠血清NO含量、肝组织NO含量及SOD活性明 显增高；而血清ALT、 AST、 MDA含量及肝组织TNF-a 、 MDA含量明显降低；肝 组织形态损伤也有所减轻。结论葛根素对肝硬化大鼠肝缺血再灌注损伤有显著的保护作用，其主要 是减少NO的降低、扩张血管、改善微循环；清除氧自由基、减轻脂质过氧化。本试验通过葛根素预处理及缺血预处理对肝硬化大鼠肝脏I/R损伤保护作 用的对比，探讨葛根素是否对肝硬化大鼠肝脏的I/R损伤具有保护作用，并进一步研究其作川机制。 1 材料与方法1.1动物Wastar大鼠200只，体重200 220g，雌雄各半。 1. 2仪器与试剂奧林巴斯2700全自动生化分析仪、DY89-1全自动 玻璃匀浆机、ArthosHTII酶标仪、SANYO MDF-330型-70。C低温冰箱、HH21-600 型恒温水浴箱、722分光光度计。CC14，泸州市鑫达化工有限公司提供，批号 2008713;食用酒，泸州市食品厂提供；葛根素注射液哈尔滨三联药业有限公司 提供，批号09102B; SOD测定试剂盒，南京建成生物工程研究所提供，黄嘌呤 氧化酶法测定，批号20080716; MDA测定试剂盒，南京建成生物工程研究所提 供；TBA法测定，批号20080716; NO测定试剂盒，南京建成生物工程研究所提 供，亚硝酸盐法测定，批号20080719; TNF-a测定试剂盒，上海森雄科技实业 有限公司，双抗休夹心ABC-ELISA法测定，批号20080719。 1. 3 模型制备及试验方法1. 3. 1 大鼠肝硬化模型制备经大鼠腹部皮下注射CCL大豆油溶液， 前4次剂量为0. 5m丄/100g体重60% CCl4大豆油溶液，每隔3天1次，第4次后 间隔7天注射第5次(可减少大鼠死亡率)，第5次起剂量改为0. 3ml/100g体 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种葛根素的提取方法，其主要步骤如下：　①粉碎、提取　将葛根粉碎后过１０目筛，称取定量葛根粉，置于提取罐中，先用其质量４倍体积的蒸馏水或浓度为９５％乙醇或甲醇作溶剂回流提取１～１．５ｈ，过滤，滤渣再用２倍体积的上述溶剂回流提取１ｈ， 再次过滤，收集、合并两次滤液，获得葛根素粗提液；　②浓缩　将醇提取液置于真空浓缩器中，控制真空度为－０．１～０．０８ＭＰａ，浓缩温度为８５～９０℃，回收甲醇或乙醇；　③上柱　取定量活化Ｄ１０１大孔吸附树脂装柱，按照其对葛根素 的吸附容量计算出应吸附的提取液体积，将提取液泵入树脂柱中，控制流出液速度为１－１．５倍树脂柱体积／ｈ，使葛根素吸附于Ｄ１０１吸附树脂上；　④洗脱　当上柱液流完后，先用蒸馏水洗涤，洗去糖类、蛋白质、鞣质水溶性杂质，直至洗脱液近无色时止 ，然后用７０％的乙醇溶液进行洗脱，控制洗脱液流出速度为１－１．５倍树脂柱体积／ｈ，用１２倍树脂体积的洗脱液即可洗脱被树脂吸附的８５％以上的葛根素；　⑤浓缩　将洗脱液置于真空浓缩机中，控制真空度为－０．１～０．０８ＭＰａ，浓缩温度为８ ５～９０℃，回收乙醇直至浓缩液相对密度为１．２时止；　⑥萃取、浓缩、干燥将浓缩液置于萃取器中，加入等体积正丁醇，反复萃取４次，收集正丁醇相，再次进行真空减压浓缩至干，浓缩条件同提取液，获得葛根素粗提取物。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：叶道群，
申请(专利权)人：南阳市海达生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]