一种串联表达小干扰ＲＮＡ重组慢病毒载体的构建方法技术

技术编号：3828389 阅读：351 留言：0更新日期：2012-04-11 18:40

本发明专利技术公开了一种串联表达ｓｉＲＮＡ重组慢病毒载体的构建方法，主要步骤如下：（１）单靶点的ｓｉＲＮＡ重组慢病毒载体的构建：ａ．化学合成寡核苷酸链；ｂ．有义链、反义链退火；ｃ．退火片段连接至载体（２）双靶点的ｓｉＲＮＡ重组慢病毒载体的构建：ａ．利用ＰＣＲ从单靶点的ｓｉＲＮＡ重组慢病毒载体中扩增Ｕ６／Ｈ１－ｓｉＲＮＡ表达框；ｂ．将表达框连接至经ＸｈｏＩ酶切的单靶点的ｓｉＲＮＡ重组慢病毒载体；ｃ．酶切鉴定筛选表达框正向插入的克隆；（３）多靶点的串联ｓｉＲＮＡ重组慢病毒载体的构建：将Ｕ６／Ｈ１－ｓｉＲＮＡ表达框插入至双靶点的ｓｉＲＮＡ重组慢病毒载体，构建出三靶点的ｓｉＲＮＡ重组慢病毒载体，同法可获得多靶点串联的ｓｉＲＮＡ重组慢病毒载体。本发明专利技术适用于同时表达针对多个靶基因的ｓｉＲＮＡ，适用于长期沉默多个靶基因的研究。