一种ODC基因在制备检测或治疗肌肉血管生成受阻的产品中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，具体涉及一种ODC基因在制备检测或治疗肌肉血管生成受阻的产品中的应用。本发明专利技术首次发现ODC可以作为检测或治疗肌肉血管生成受阻的标志物，为检测肌肉血管生成提供了有力的理论指导和技术支撑，具有检测更为简便快速，成本更低，准确率、灵敏度和特异性更高等优点。本发明专利技术对制备肌肉血管生成受阻早期检测和治疗相关产品具有重要的指导意义，有望为研制和治疗肌肉萎缩的营养策略产品提供理论依据。养策略产品提供理论依据。养策略产品提供理论依据。

【技术实现步骤摘要】
一种ODC基因在制备检测或治疗肌肉血管生成受阻的产品中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种ODC基因在制备检测或治疗肌肉血管生成受阻的产品中的应用。

技术介绍

[0002]血管在肌肉发育中扮演着重要作用，其正常生成是保证肌肉发育的关键。肌肉萎缩常常伴随着血管生成降低的现象，促进肌肉血管生成则可激活骨骼肌卫星细胞，缓解肌肉萎缩，促进肌肉发育。肌肉血管生成还与肌肉再生有密切关系，降低肌肉血管生成可以损害肌肉的再生能力。此外，肌肉发育取决于机体氨基酸的供应，而血管主要扮演为肌肉组织提供营养物质的作用，其生成降低可降低氨基酸等其他营养物质的供应，从而影响肌肉发育。因此，肌肉血管生成不仅可反映肌肉发育情况，同时还可为预防人类肌肉萎缩等方面提供理论指导。宫内生长受限仔猪肌肉发育受阻，因此可利用宫内生长受限仔猪模型研究肌肉血管生成与肌肉发育的关系。
[0003]鸟氨酸脱羧酶(Ornithine decarboxylase，ODC)是催化鸟氨酸生成腐胺的限速酶。在血管生成方面，ODC是微血管在体外正常生成以及血管内皮细胞迁移的必要条件，其活性降低可通过AKT信号通路降低血管内皮细胞体外血管生成。然而目前ODC基因在肌肉血管生成方面的研究还尚未见报道。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中的上述不足，本专利技术的目的在于提供一种ODC基因在制备检测或治疗肌肉血管生成受阻的产品中的应用。
[0005]为了达到上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案为：
[0006]提供一种ODC基因在制备检测或治疗肌肉血管生成受阻的产品中的应用。
[0007]进一步地，检测肌肉血管生成受阻的产品包括：通过RT
‑
PCR、免疫检测或酶联免疫吸附试验检测肌肉血管生成受阻的产品。
[0008]进一步地，通过RT
‑
PCR检测肌肉血管生成受阻的产品包括至少一对特异性扩增ODC基因的引物。
[0009]进一步地，特异性扩增ODC基因的引物为ODC
‑
F和ODC
‑
R，其核苷酸序列如下所示：
[0010]ODC
‑
F：GTCTGTCGCCTCAGTGTCAA；
[0011]ODC
‑
R：CCTCAGATCCAGGAAATCCA。
[0012]进一步地，通过免疫检测检测肌肉血管生成受阻的产品包括：与ODC基因编码的蛋白特异性结合的抗体，包括多克隆抗体和单克隆抗体。
[0013]进一步地，通过酶联免疫吸附试验检测肌肉血管生成受阻的产品包括：检测ODC酶活性的ELISA试剂盒。
[0014]本专利技术的原理：
[0015]1.以正常初生重和宫内生长受限(Intrauterine Growth Restriction,IUGR)仔猪为研究对象，发现IUGR仔猪肌肉重量、肌纤维数量和面积显著降低，标志肌肉发育受阻模型成功建立。
[0016]2.在肌肉发育受阻模型建立的基础上，进一步研究发现：肌肉发育受阻仔猪肌肉CD31和VEGF
‑
A蛋白质表达水平降低，说明肌肉血管生成降低；转录组测序和蛋白质免疫印迹结果表明肌肉发育受阻仔猪肌肉鸟氨酸脱羧酶(Ornithine decarboxylase,ODC)基因和蛋白质表达水平降低，且差异基因富集在多胺代谢过程。进一步检测发现ODC催化产物腐胺含量降低，且ODC水平与血管生成成正相关。
[0017]3.通过体外实验发现抑制ODC降低猪血管内皮细胞血管生成。
[0018]本专利技术的有益效果为：
[0019]1.本专利技术首次发现ODC可以作为检测或治疗肌肉血管生成受阻的标志物，为检测肌肉血管生成提供了有力的理论指导和技术支撑，具有检测更为简便快速，成本更低，准确率、灵敏度和特异性更高等优点。
[0020]2.本专利技术对制备肌肉血管生成受阻早期检测和治疗相关产品具有重要的指导意义，有望为研制和治疗肌肉萎缩的营养策略产品提供理论依据。
附图说明
[0021]图1为实施例1中宫内生长受阻仔猪肌肉发育与血管生成差异比较示意图；
[0022]图2为实施例2中宫内生长受阻仔猪肌肉血管生成标志基因筛选相关示意图；
[0023]图3为实施例3中ODC调控猪血管内皮细胞血管生成相关示意图。
具体实施方式
[0024]下面对本专利技术的具体实施方式进行描述，以便于本
的技术人员理解本专利技术，但应该清楚，本专利技术不限于具体实施方式的范围，对本
的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本专利技术的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本专利技术构思的专利技术创造均在保护之列。
[0025]实施例1宫内生长受阻仔猪肌肉发育与血管生成差异比较
[0026]1.妊娠母猪在妊娠第110天被移至产房，并单独饲养。分娩后记录仔猪出生体重，计算仔猪平均出生体重。然后将二十头新生仔猪按出生体重分为正常出生体重组(对照组)和低出生体重组。对照组和低出生体重组的仔猪平均出生体重分别为1162
±
98g和724
±
31g(平均值
±
标准差)。出生当天，屠宰、收集背最长肌样本，一部分肌肉样品置于液氮中快速冷冻，并储存在
‑
80℃冰箱中，另取一部分固定于4％多聚甲醛中。
[0027]2.肌肉血管生成分析
[0028]将固定于4％多聚甲醛的肌肉样品进行石蜡包埋，包埋好的肌肉样品石蜡块5μm切片，并进行CD31免疫组化染色。将染色好的切片放于显微镜下拍照，每张切片随机选取5个视野拍照，并利用Image J软件统计CD31表达情况。
[0029]3.肌纤维面积和数量分析
[0030]将固定于4％多聚甲醛的肌肉样品进行石蜡包埋，包埋好的肌肉样品石蜡块5μm切片，并进行苏木精
‑
伊红染色。将染色好的切片放于显微镜下拍照，每张切片随机选取5个视
野拍照，并利用Image J软件统计肌纤维面积和数量。
[0031]4.肌肉CD31和VEGF
‑
A蛋白质表达水平
[0032]采用RIPA蛋白质裂解液提取肌肉中总蛋白，随后利用BCA法测定提取的组织总蛋白，并根据测得的蛋白质浓度，将所有样品稀释至同一浓度。每个样品取等质量的蛋白(50μg)，按照样品体积：上样缓冲液(5
×
SDS)＝4:1的比较加入上样缓冲液，混匀后放于95℃环境中变性10min。随后进行蛋白质免疫印迹分析，蛋白质条带分别孵育CD31(Abcam，USA)，VEGF
‑
A (Proteintech，USA)和β
‑
Actin(CST，USA)抗体。曝光后，使用软件对条带密度进行量化分析。
[0033]5.试验结果
[0034]试验结果如图1所示，结果发现：与正常初生重仔猪相比，宫内生长本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种ODC基因在制备检测或治疗肌肉血管生成受阻的产品中的应用。2.根据权利要求1所述的ODC基因在制备检测或治疗肌肉血管生成受阻的产品中的应用，其特征在于，所述检测肌肉血管生成受阻的产品包括：通过RT
‑
PCR、免疫检测或酶联免疫吸附试验检测肌肉血管生成受阻的产品。3.根据权利要求2所述的ODC基因在制备检测或治疗肌肉血管生成受阻的产品中的应用，其特征在于，所述通过RT
‑
PCR检测肌肉血管生成受阻的产品包括至少一对特异性扩增ODC基因的引物。4.根据权利要求3所述的ODC基因在制备检测或治疗肌肉血管生成受阻的产品中的应用，其特征在于，所述特异性扩增ODC基因的引物为ODC
‑...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡诚军，彭维祺，冀凤杰，吕仁龙，侯冠彧，周汉林，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，
类型：发明
国别省市：