一种生产角鲨烯的酿酒酵母的构建方法技术

本发明专利技术公开了一种生产角鲨烯的酿酒酵母的构建方法。本发明专利技术公开的重组酿酒酵母将法尼基焦磷酸合成酶FPPS和角鲨烯合成酶SQS共定位到脂滴表面表达，将HMG1基因替换成截短的tHMG1基因，敲除了OPI3和CHO2基因，并表达了外源PLIN3基因。本发明专利技术利用分子定位技术将合成角鲨烯的关键酶FPPS和SQS共定位于酿酒酵母的脂滴表面，拉近了参与连续催化的酶的空间距离，并利用脂滴贮存角鲨烯，减轻了角鲨烯对宿主细胞的毒性，进一步通过调节脂滴的大小和数量，使角鲨烯产量提高了6倍。使角鲨烯产量提高了6倍。

【技术实现步骤摘要】
一种生产角鲨烯的酿酒酵母的构建方法


[0001]本专利技术属于合成生物学和发酵工程领域，涉及一种生产角鲨烯的酿酒酵母的构建方法。

技术介绍

[0002]酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)作为模式工业微生物，具有明确的遗传背景和成熟的基因操作方法，并且具有良好的遗传稳定性，已被广泛应用于多种天然产物的生物合成研究。酿酒酵母相比于原核微生物具有完整的细胞器结构，这些细胞器已被证明可作为生产特定产物的区室，利用细胞内区室来生产天然产物具有诸多优势，不仅可以实现参与催化的酶聚集，而且可以有效减轻产物对细胞的毒性。脂滴(Lipid Droplet，LD)是酿酒酵母的一种细胞器，常被细胞专门用来存储脂质，通过操纵酿酒酵母的基因以调节脂滴的大小和数量，可使脂滴成为一种具有潜力的代谢产物存储“仓库”。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于通过对酿酒酵母进行基因改造，使其能够生产角鲨烯。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供了一种生产角鲨烯的酿酒酵母的构建方法，并以发酵法生产角鲨烯为例，验证了基因本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，将法尼基焦磷酸合成酶FPPS和角鲨烯合成酶SQS共定位到脂滴表面表达，将HMG1基因替换成截短的tHMG1基因，敲除了OPI3和CHO2基因，并表达了外源PLIN3基因。2.如权利要求1所述的重组酿酒酵母，其特征在于，所述重组酿酒酵母以BY4742为出发菌株。3.如权利要求1所述的重组酿酒酵母，其特征在于，所述FPPS和所述SQS通过与油质蛋白Ole形成融合蛋白Ole
‑
FPPS
‑
SQS而共定位到脂滴表面表达。4.如权利要求1
‑
3任一项所述的重组酿酒酵母，其特征在于，所述重组酿酒酵母通过P
GAL10
强化表达FPPS和SQS，通过组成型强启动子P
PDC1
强化表达PLIN3。5.如权利要求1
‑
4任一项所述的重组酿酒酵母的构建方法，包括如下步骤：将出发酿酒酵母S1中的HMG1基因替换成截短的tHMG1基因，得到酿酒酵母S2；将所述酿酒酵母S2中的OPI3和CHO2基因敲除，得到酿酒酵母S4；在所述酿酒酵母S4中表达外源PLIN3基因，得到酿酒酵母S5；在所述酿酒酵母S5中转入编码融合蛋白Ole
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FPPS
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SQS的质粒，即得。6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述出发酿酒酵母S1为B...

【专利技术属性】
技术研发人员：王琛，王竞辉，单雨瑶，吴计划，
申请(专利权)人：万华化学集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：