可转移的I-F型CRISPR-Cas基因组编辑系统技术方案

已经建立了通用的基于I型CRISPR

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】可转移的I
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F型CRISPR
‑
Cas基因组编辑系统
专利

[0001]本专利技术一般涉及微生物的遗传修饰，特别是使用可转移的基于CRISPR
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CAS的基因组编辑系统。
[0002]专利技术背景
[0003]成簇规律间隔短回文重复(CRISPR)和相关的CRISPR蛋白(Cas)为细菌提供了针对外来遗传元件(如噬菌体感染)的适应性免疫((Marraffini,et al.Nature 526,55
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61,doi:10.1038/nature15386(2015))。依赖于小的CRISPR RNA(crRNA)实现位点特异性DNA靶向和干扰，CRISPR
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Cas介导的基因工程系统的应用以其强大的特异性和可重编程的能力彻底改变了遗传学领域(Adli,Nature Communications 9,doi:10.1038/s41467
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018
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04252
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2(2018))。r/>[0004]基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于改变、添加或删除微生物细胞中的一个或多个基因的系统，其包含(a)核酸I
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F型cas系统载体，其包含(i)I
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F型cas操纵子，其包含cas基因cas1、cas2
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3、cas8f、cas5、cas7和cas6，以及配置成促进所述cas基因在所述微生物细胞中转录的核酸序列；(ii)一种或多种编码整合酶的基因；(iii)识别为整合位点的核酸序列，所述整合位点配置成识别并将所述载体附着到所述微生物基因组内的靶附着位点；(iv)配置成Flp重组酶靶位点的两条核酸序列；和(v)一个或多个报告基因和配置成在整合到所述微生物细胞基因组中后促进所述报告基因转录的核酸序列；其中所述载体配置成经由在所述靶附着位点处附着而整合到所述微生物细胞的基因组中；和(b)核酸编辑载体，其包含一种或多种CRISPR RNA(crRNA)核酸和修复供体，所述核酸编辑载体配置成通过所述I
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F型CRISPR
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Cas系统改变、添加和/或删除所述微生物细胞中的一个或多个靶基因组位点。2.权利要求1所述的系统，其还包含(c)核酸靶向载体，其包含一种或多种CRISPR RNA(crRNA)核酸，所述核酸配置成破坏所述微生物细胞基因组中的所述I
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F型cas系统载体内所述一个或多个报告基因的转录和/或表达所需的一个或多个靶基因组位点。3.权利要求1或权利要求2所述的系统，其中所述核酸I
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F型cas系统载体内的所述一个或多个报告基因为lacZ报告基因。4.权利要求2或权利要求3所述的系统，其中所述靶向载体包含crRNA核酸，所述核酸配置成破坏与酰基
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高丝氨酸
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内酯合酶的表达相关的一个或多个基因。5.权利要求1
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4中任一项所述的系统，其中所述I
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F型cas操纵子为来自铜绿假单胞菌菌株PA154197的I
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F型cas操纵子。6.权利要求1
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5中任一项所述的系统，其中所述微生物基因组内的所述靶附着位点为铜绿假单胞菌的attB位点。7.权利要求1
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6中任一项所述的系统，其中所述核酸λ
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I
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F cas系统载体还包含：(vi)功能性噬菌体λ
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red重组系统，其包含编码λ
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Red蛋白Exo、Gam和Beta的基因，以及阿拉伯糖诱导型启动子。8.权利要求1
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7中任一项所述的系统，其还包含：(c)核酸CRISPR
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Cas去除载体，其包含一种或多种CRISPR RNA(crRNA)核酸，所述核酸配置成从所述微生物细胞删除整合的I
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F型cas系统。9.用于抑制微生物细胞中感兴趣的基因的系统，其包含核酸I
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F型CRISPRi系统载体，所述载体包含(i)I
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F型cas操纵子，其包含cas基因cas1、cas8f、cas5、cas7和cas6，以及配置成促进所述cas基因在所述微生物细胞中的转录的核酸序列，其中所述I
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F型cas操纵子缺乏cas2
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3基因的功能性拷贝；(ii)一种或多种编码整合酶的基因；
(iii)编码整合位点的核酸序列，所述整合位点配置成识别并将质粒附着到所述微生物基因组内的靶附着位点；(iv)配置成Flp重组酶靶位点的两条核酸序列；(v)一个或多个报告基因和配置成在整合到所述微生物细胞基因组中后促进所述报告基因转录的核酸序列；以及(vi)一种或多种CRISPR RNA(crRNA)核酸，所述核酸配置成靶向所述微生物细胞基因组中所述感兴趣的基因的一个或多个位点，其中所述载体配置成经由在所述靶附着位点处附着而整合到所述微生物细胞的基因组中。10.权利要求9所述的系统，其中所述cas2
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3基因的功能性拷贝不存在于所述I
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F型cas操纵子中。11.权利要求9或权利要求10所述的系统，其中所述核酸I
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F型CRISPRi系统载体内的所述一个或多个报告基因为lacZ报告基因。12.权利要求9
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11中任一项所述的系统，其中所述I
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F型cas操纵子基于来自铜绿假单胞菌菌株PA154197的I
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F cas操纵子。13.权利要求9
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12中任一项所述的系统，其中所述微生物基因组内的所述靶附着位点为铜绿假单胞菌的attB位点。14.权利要求9
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13中任一项所述的系统，其中所述一种或多种CRISPR RNA核酸配置成靶向所述感兴趣的基因的一个或多个转录位点。15.权利要求14所述的系统，其中所述一个或多个转录位点选自受体细胞中所述感兴趣的基因的RNA聚合酶结合区、转录起始区、编码区的5'
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末端、基因的中间区、编码区的3'
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末端或它们的组合。16.微生物细胞，其包含重组的核酸I
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F型CRISPR
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Cas系统，所述系统包含权利要求1
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15中任一项。17.权利要求16所述的微生物细胞，其中所述细胞为假单胞菌属细菌。18.权利要求17所述的微生物细胞，其中所述细胞为铜绿假单胞菌细菌。19.权利要求18所述的微生物细...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫爱新，徐泽凌，
申请(专利权)人：香港大学，
类型：发明
国别省市：