【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
牛精子克隆胚胎的方法,其步骤包括: (1)将采集回的牛卵巢用磷酸缓冲液洗后将卵丘-卵母细胞复合体抽出,置于成熟培养液中进行体外培养,使所述的卵母细胞培养发育至第二次减数分裂中期,用透明质酸酶对卵丘-卵母细胞复合体脱颗粒细胞处理; (2)先对步骤(1)的卵母细胞的细胞核染色,置于卵母细胞去核液中,再对细胞核进行荧光定位,准确吸取所述的细胞核,得到去核的牛卵母细胞; (3)采集同一头优秀种公牛的精液,或采集同一品种的不同个体的两头优秀种公牛的精液,或采集不同品种 的两头优秀种公牛的精液,或购买性控优秀种公牛的商用精液,将所述的种公牛精液置液氮罐中贮存备用; (4)将所述的种公牛精液在37℃下解冻,用精子获能液使所述的精子获能,置于卵母细胞注射液中备用; (5)用显微操作针一次性将步骤(4 )所述的两个获能精子注入去核牛卵母细胞的胞质内,得到精子重构胚; (6)将步骤(5)构建好的精子重构胚用激活培养基-1和激活培养基-2进行体外人工激活,使重构胚融合,然后,将激活后的精子重构胚置于胚胎培养液中培养; 其中: ...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:杨利国,王滇,肖遥,张鑫,霍立军,
申请(专利权)人:华中农业大学,
类型:发明
国别省市:83[中国|武汉]
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