4-羟基苯乙酸性信息素的筛选方法及其应用技术

本发明专利技术属于生态防治技术领域，具体公开了4

【技术实现步骤摘要】
4
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羟基苯乙酸性信息素的筛选方法及其应用


[0001]本专利技术属于生态防治
，尤其涉及4
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羟基苯乙酸性信息素的筛选方法及其应用。

技术介绍

[0002]福寿螺(Pomacea canaliculata)又称金苹果螺，属于腹足纲(Caenogastropoda)瓶螺科(Ampullariidae)福寿螺属的螺类，原产于南美洲南部的淡水流域，现已广泛入侵亚洲、欧洲和北美洲等区域。由于其繁殖能力强，食性贪婪，并且缺少有效天敌，给水生植物种植造成了巨大损失，还可能严重威胁人类健康和生命安全。因此，有必要对福寿螺进行防控，从而减少农业损失，保护生态平衡和人类生命安全。
[0003]目前防治福寿螺的方法主要有物理防治、化学防治、农业防治和生物防治。人工捕捉或物理隔离福寿螺的方法几乎不可能实现有效管控，而且成本代价较高。尽管使用农药，如杀螺胺、四聚乙醛等，可以铲除小水体当中的福寿螺。然而，这种化学防治方法特异性不强，容易危及其他非目标生物，如其他甲壳动物、水生昆虫和鱼类等，化学农药对农业生产及生态环境的负面影响日益突出。因此，非常有必要寻找特异性强和对环境友好的防治方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供4
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羟基苯乙酸性信息素的筛选方法及其应用，以解决上述技术问题之一。
[0005]本专利技术提供：4
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羟基苯乙酸性信息素的筛选方法，包括以下步骤：
[0006]步骤1、制备异性信息源，采集性成熟的雌性和雄性福寿螺对异性信息源进行生物活性测定，观察福寿螺个体是否表现有趋性行为；
[0007]步骤2、采集雄性福寿螺进行对交配前后雌性信息源的反应实验，分别以交配前和交配后雌性福寿螺代谢饲养水为信息源时，判断雄性福寿螺是否存在选择差异；
[0008]步骤3、采集雄性福寿螺对分子量小于5KDa，5
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10KDa以及大于10KDa的雌性信息源的行为反应实验；
[0009]步骤4、测定差异代谢物组成成分，筛选显著差异代谢物；
[0010]步骤5、从显著差异代谢物中筛选出6种内源性且无毒害作用的代谢物作为候选信息物，测定候选信息物的行为学，得到福寿螺的性信息素物质：4
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羟基苯乙酸。
[0011]本专利技术还提供上述4
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羟基苯乙酸在迷惑或引诱雄性福寿螺中的应用，可以通过释放4
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羟基苯乙酸性信息素达到迷惑雄性福寿螺的目的，从而阻止它们寻找雌性福寿螺交配。在繁殖季节，还可以用福寿螺性信息素作为引诱剂诱捕雄性福寿螺。
[0012]本专利技术还提供上述4
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羟基苯乙酸性信息素在制备引诱剂中的应用。
[0013]本专利技术的原理和有益效果在于：
[0014]针对防治福寿螺薄弱的问题，本专利技术的提供4
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羟基苯乙酸性信息素的筛选方法克
服了水生动物代谢物质复杂和分离困难的问题，突破了福寿螺性信息素筛选的研究瓶颈，具有筛选路线简单，易于操作的优势，为福寿螺种群生态防治提供了更为绿色有效的新途径，为科学防控福寿螺的危害奠定理论和技术基础。
[0015]本专利技术提供的4
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羟基苯乙酸性信息素分离自雌性福寿螺纯水饲养液，采用超滤离心法分离纯化，并采用超高效液相色谱串联质谱检测代谢物，通过标准化合物和纯水对比分析的生物活性测定的方法进行确定。生态防治时，可以通过释放4
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羟基苯乙酸性信息素达到迷惑雄性福寿螺的目的，从而阻止它们寻找雌性福寿螺交配。在繁殖季节，还可以用4
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羟基苯乙酸性信息素作为引诱剂诱捕雄性福寿螺。一旦大量消灭种群中的雄性个体，就可以有效减少交配繁殖率，从而达到快速减小种群大小的目的。这种生物防治方法对环境友好，对人体无害，多数情况下具有物种特异性等优点。
附图说明
[0016]图1为生物活性测定的Y型水槽；
[0017]图2为福寿螺对异性信息源的行为反应；
[0018]图3为雄性福寿螺对交配前后雌性信息源下的行为反应；
[0019]图4为雄性福寿螺对不同截留分子量的雌性信息源下的行为反应；
[0020]图5为差异代谢物差异倍数柱状图；
[0021]图6为各组间差异代谢物的韦恩图；
[0022]图7为雄性(A)和雌性(B)福寿螺在不同候选信息物下的行为反应；
[0023]图8为4
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羟基苯乙酸(4
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hydroxyphenylacetic acid)化学结构。
具体实施方式
[0024]下面通过具体实施方式进一步详细说明：
[0025]实施例1
[0026]本实施例提供4
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羟基苯乙酸性信息素的筛选方法，具体筛选方法如下：
[0027]步骤1、福寿螺对异性信息源的行为反应实验(实验1)
[0028]1.1制备异性信息源
[0029]福寿螺的性信息素会被分泌到周围的水环境中，因此收集饲养福寿螺的池水作为提取性信息素的样品。
[0030]在福寿螺繁殖季节(4
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10月)，分别采集野外的性成熟的雌性和雄性福寿螺20只饲养于水箱中，加入0.5L纯水，每隔3小时收集1次水箱中池水，每天收集4次，合并样品并离心(8000g/min)除杂质，取上清液于
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80℃保存得到冷冻样品，或真空冷冻干燥得到冻干样品再保存，检测时取5mL纯水溶解冻干样品。
[0031]1.2福寿螺对异性信息源的生物活性测定
[0032]收集的饲养池水样品或分离样品作为信息素样品进行生物活性测试，判断测定样品是否含有活性性信息素。
[0033]如图1所示的Y型水槽，包括起始臂(Start arm)和两个呈分叉布置的终点臂(End arm)，在起始臂的端部放入性成熟的福寿螺，用海绵块吸取信息素样品(饲养水样品、分离样品和标准化学品)随机放入其中一个终点臂的端部，另一个终点臂的端部以海绵块吸取
纯水为对照，观察福寿螺个体是否表现有趋性行为。
[0034]为避免福寿螺对某一侧终点臂的选择偏好性，每5只福寿螺为一组对换信息素样品和纯水位置，以确保福寿螺对两个终点臂的选择是随机的。行为学实验在暗室或夜间进行。
[0035]福寿螺适应10分钟后即开始记录选择性，每次实验持续20分钟，每种信息素样品重复50次以上，整个实验过程采用监控系统全程记录，避免人为干扰。
[0036]分别比较雄性、雌性福寿螺对异性信息源是否存在行为差异。共选择实验用福寿螺120只，其中，选择70只雄性福寿螺用于雄性福寿螺对雌性信息源的行为反应实验；50只雌性福寿螺用于雌性福寿螺对雄性信息源的行为反应实验。对于雄性福寿螺，选择雌性信息源、纯水以及无反应的螺数分别为27只、14只和29只(图2)。而对于雌性福寿螺，选择雄性信息源和纯水的螺本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.4
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羟基苯乙酸性信息素的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、制备异性信息源，采集性成熟的雌性和雄性福寿螺对异性信息源进行生物活性测定，观察福寿螺个体是否表现有趋性行为；步骤2、采集雄性福寿螺进行对交配前后雌性信息源的反应实验，分别以交配前和交配后雌性福寿螺代谢饲养水为信息源时，判断雄性福寿螺是否存在选择差异；步骤3、采集雄性福寿螺对分子量小于5KDa，5
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10KDa以及大于10KDa的雌性信息源的行...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄锦龙，莫丽丽，武正军，周子豪，韦婷婷，赵荣慧，农秀芳，覃青青，韦海菊，
申请(专利权)人：广西师范大学，
类型：发明
国别省市：