枸杞与番茄水平基因转移体系建立及转化根获得的方法技术

本发明专利技术公开了枸杞与番茄水平基因转移体系建立及转化根获得的方法，以茄科植物番茄和枸杞等为起始材料，通过降低枸杞细胞的木质素含量，消除远缘嫁接细胞之间隔离层，使两个物种嫁接细胞连通，并通过对番茄接穗进行不同生长素处理，在番茄嫁接组织部位诱导出不定根。通过形态学与分子生物学研究分析，证明了嫁接介导的枸杞与番茄细胞之间发生了水平基因转移，诱导的不定根为枸杞水平基因转移到番茄的转化根。本发明专利技术建立了枸杞基因向番茄高效转移的技术体系并获得了转化根，实现了草本植物与木本植物遗传资源的优势互补。具有转化根系的番茄植株根系的活力好，植株生长势强，生长周期长。转化根的获得对提升番茄产量、品质、抗性等都具有重要意义。等都具有重要意义。等都具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
枸杞与番茄水平基因转移体系建立及转化根获得的方法


[0001]本专利技术涉及一种通过改良嫁接技术快速实现枸杞遗传物质水平转移至番茄并获得番茄再生的不定根的方法。通过生物信息学定位，特异性的在番茄中筛选出枸杞的DNA片段，明确了番茄嫁接区域再生的不定根为转化根。具有转化根的番茄植物根系活力好，生长势强，长季节生长，实现了木本与草本不同物种间的优势互补，对提升番茄等蔬菜作物的产量、品质、抗性等都具有重要的意义。

技术介绍

[0002]水平基因转移可以定义为通过受精以外的方式进行的跨物种遗传物质传递，随着测序水平和生物信息学分析水平的进步，在植物基因组中发现水平基因转移的频率越来越高。对植物而言，水平基因转移通过相互接触的介导载体，包括共生、内共生、寄生、嫁接、附生等，直接进行遗传物质的交流；还涉及到病毒、细菌、真菌、昆虫(蚜虫)、线虫、花粉粒、转座元件等间接接触的中间载体。嫁接介导的水平基因转移现象最早是在烟草中观察到的，近年来，嫁接介导的水平基因转移事件会密切在相关物种之间发生，例如茄科植物烟草种内在嫁接结合部位存在着线粒体基因组片段、完整的叶绿本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.枸杞与番茄水平基因转移体系建立及转化根获得的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)选取木质素含量低且适于嫁接的枸杞苗作为砧木；(2)选取生长至3叶1心番茄苗，将番茄苗距子叶0.5cm处的上胚轴切下，利用外源生长素进行处理5min，从上胚轴底部沿中心线对称切割两刀，使切好的番茄上宽下窄呈楔形，作为嫁接接穗与枸杞砧木进行嫁接建立枸杞与番茄高效嫁接体系，诱导番茄嫁接区域再生不定根。(3)观察番茄嫁接区域不定根的起源、出根后的形态，并提取番茄嫁接区域不定根的基因组DNA，若再生的不定根的根系分级明显且检测到枸杞的DNA片段则说明获得转化根。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：番茄苗、木质素含量低且适于嫁接的枸杞苗培育的方法为：将培养基内无菌枸杞苗移至基质内进行培养10
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20天，前3d保持100％的湿度，后与播种后的番茄同于温度22℃～26℃，光照强度100～120μmol
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‑1，光照时间14h/d，相对湿度85％环境培养。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：枸杞木质素含量的测定方法为：选取在基质内培养一定天数长势一致的枸杞，截取从底端向上7.5cm
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8.5cm的位置，总共1cm的茎段，并除去叶片，将茎段放入15ml离心管，并开盖于85℃过夜烘干，至恒重后研磨成粉末，于40目过滤网过筛，采用乙酰溴法测定枸杞茎段中木质素含量，用分光光度计在波长280nm测定样品吸光度，通过回归曲线计算木质素含量。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，砧木的建立方法具体为：将木质素含量低且适于嫁接的枸杞苗从顶端向下5cm位置平切，沿平切后横截面的中...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈利萍，张爱珺，袁璐，王挺进，刘柯，杨洋，王瑞婷，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：