本发明专利技术提供了低剂量的链脲菌素在制备用于筛选治疗自身免疫性１型糖尿病药物的动物模型中的用途，其中链脲菌素的施用方法和剂量为：静脉给予，１５－３０ｍｇ／Ｋｇ／次。本发明专利技术还提供了一种制备恒河猴自身免疫性１型糖尿病模型的方法，及该方法制备的自身免疫性１型糖尿病动物模型。本发明专利技术动物模型可以用于啮齿类动物模型无法完成的生物技术新药的评价和干细胞移植治疗技术的评价。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种恒河猴自身免疫性1型糖尿病模型的制备方法。
技术介绍
自身免疫型糖尿病1型糖尿病的发病病因不明，至今没有有效的预防办法。常用 的胰岛素治疗尽管可以在一定程度上调节血糖水平，但长期使用并不能有效地控制糖尿病 并发症的发生，而且部分患者还有可能发生低血糖休克。如何阻止自身免疫系统对胰岛β 细胞的攻击和进行有效的β细胞移植治疗，成为糖尿病研究中的关键问题。目前糖尿病研究最常用模型动物是啮齿类。由于啮齿类在进化关系上与人类相距 甚远，以其为研究对象所获得的实验数据对临床指导意义不大。恒河猴的解剖特点、各系统 生理功能及对疾病和治疗药物的反应性与人类极为相近，是进行免疫学相关治疗和干细胞 移植、异种移植临床前有效性和安全性评价的敏感动物。利用恒河猴糖尿病模型评价新型 糖尿病治疗药物，研究胰岛干细胞和异种胰岛移植的免疫排斥机理和移植耐受诱导，是国 际公认的临床前实验体系，对未来这些治疗方案的临床应用具有重要的指导意义。因此建 立非人灵长类糖尿病模型成为糖尿病胰岛(干)细胞移植治疗研究和临床前药物评价的迫 切需要。现在常用的糖尿病动物模型有实验性糖尿病动物模型和自发性糖尿病动物模型。 自发性模型应用价值较高，但因发病率低，价格昂贵，饲养、繁殖条件要求严格，而不能得到 广泛应用。实验性模型则应用比较广泛，常用的诱导方法有胰腺切除术、化学药物诱发、病 毒感染、拮抗胰岛素因子、食物诱发及催肥等。其中化学药物诱导方法因为操作简单、可行 性高，而得到众多研究人员的推崇；而在这些方法中链脲佐菌素对机体组织毒性相对较小， 动物存活率高，是目前国内外使用较多的制备糖尿病动物模型的方法。链脲菌素(str印tozotocin，STZ)是制备糖尿病模型中比较常用的诱导试剂，对 一定种属动物的胰岛β细胞有选择性破坏作用，而使许多动物产生糖尿病，最常用的是大 鼠模型。一般常用的诱导方法如下将大鼠禁食12h，按60mg/Kg体重腹腔注射STZ，每日1 次，连续2次，成功制备1型糖尿病大鼠模型，并且该模型具有高血糖、体重减轻、多饮多食 多尿的特点，与临床1型糖尿病吻合；但在此实验中，若造模组只腹腔注射STZ —次，并给予 高热量饲料饲养12周，则可制2型糖尿病动物模型，且按该法制备出的模型具有超重、糖耐 量减低、血脂升高、血清胰岛素升高及胰岛素受体结合力降低伴胰岛素抵抗的特点，类似2 型糖尿病病人的临床特征。1型糖尿病与2型糖尿病动物模型的制备可能与STZ注射的剂 量有关系大剂量(常为120mg/Kg)注射时，由于直接引起胰岛β细胞的广泛破坏，可造成 1型糖尿病模型；而注射较少量STZ时，由于只是破坏一部分胰岛β细胞的功能，造成外周 组织对胰岛素不敏感，同时给予高热量饲料喂养，两者结合便诱导出病理、生理改变都接近 于人类2型糖尿病的动物模型。因此，链脲菌素STZ的用量的多少，直接决定了制备的糖尿 病动物模型的类型。STZ制备恒河猴糖尿病模型，也有相关文献报道，如匡 德宣等，不同剂量链脲菌素对恒河猴某些常规生理指标的影响，中国实验动物学报，2003年3月第11卷第1期，报道了研究链脲菌素(STZ)对恒河猴摄食、饮水、排尿、体重、血糖及尿糖等生理指标的影响， 为建立糖尿病动物模型积累资料。方法通过静脉给7只恒河猴注射不同剂量的STZ。STZ 的使用剂量和方法为低剂量为30mg/Kg，中间间隔15天，重复注射1-2次；中剂量为45mg/ Kg，注射STZl次；高剂量为60mg/Kg，注射1次。试验结果使用不同剂量STZ后，7只恒河 猴均在不同时间、不同程度出现与人糖尿病相类似的“三多一少”症状，同时对糖尿病猴使 用不同剂量胰岛素可使其症状减轻。尤其是中、高剂量组的动物症状较为明显，而低剂量组 体重有一个短时间的增加后又迅速下降。实验组中血糖和尿糖均出现不同程度的升高，以 中、高2个剂量组的动物变化较大。因此，采用中、高剂量组(45-60mg/Kg)的STZ可诱导类 似人类糖尿病的急性动物模型，而使用胰岛素治疗或低剂量STZ可使该动物模型疾病病程 延长，有禾丨J于进行其并发症的石幵究° Biochemical changes inrhesus monkey during the first days after streptozotocin administration areindicative of selective beta cell destruction/Takimoto G，Jones C,Lands W, Bauman A,Jeffrey J, Jonasson O·// Metabolism. 1988Apr ；37 (4) :364_70·选用 22 只恒河猴，静脉注射 STZ (45 to 55mg/Kg)，约 半数的恒河猴在注射后的5天内诱生胰岛素依赖性糖尿病，剩余实验恒河猴中的4只在给 药后6个月内未产生胰岛素依赖性糖尿病，被认为诱生了非胰岛素依赖型糖尿病，其余8只 恒河猴未对外源性胰岛素产生需求。自身免疫性糖尿病可以分为青少年型(Diabetes in children andadolescents) 和成年隐匿性(latent autoimmune diabetes in adults，LADA)，属于1型糖尿病的亚型， 其特点为1.青少年型起病年龄小于15岁，LADA可以在15岁以后的任何年龄段，发病半年 内不依赖胰岛素，无酮症发生；2.发病时多为非肥胖；3.体内胰岛B细胞抗体(ICA、GAD和 胰岛素自身抗体等)常持续阳性；4.具有1型糖尿病的易感基因(如HLA-DR3、HLA-DR4、 BW54及DQ-131-57-Non-ASp等)；5.常伴有甲状腺和胃壁细胞等器官特异性抗体阳性。 LADA—经诊断应早期采用胰岛素治疗以保护残存的β细胞。欧美人资料报告LADA约占2 型糖尿病10% 15%，在非肥胖的2型糖尿病患者中有报道高达50% ；有文献报告-2型 糖尿病患者GAD-Ab的阳性率达14.2%。这一类型的病因是由胰岛β细胞的自身免疫性破 坏而引起的胰岛素缺乏。自身免疫过程的标记物包括胰岛的淋巴细胞浸润和胰岛细胞自身 抗体、胰岛细胞抗原自身抗体以及胰岛素自身抗体的检测。目前文献报道的是中、高剂量组(45_60mg/Kg)STZ诱导胰岛素依赖性糖尿病的恒 河猴动物模型，没有将低剂量STZ(小于30mg/Kg)用于制备自身免疫性1型糖尿病灵长类 动物模型的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的技术方案是提供了低剂量的链脲菌素在制备用于筛选治疗自身免疫性1 型糖尿病的动物模型中的用途。本专利技术的另一技术方案是提供了恒河猴自身免疫性1型糖 尿病模型的建立。本专利技术提供了低剂量的链脲菌素在制备用于筛选治疗自身免疫性1型糖尿病的 动物模型中的用途，其中链脲菌素的施用剂量为15-30mg/Kg/次。其中，链脲菌素的施用方法和剂量为连续5天静脉给予小剂量链脲菌素每次15-30mg/Kg;末次给药后第7和14天再次给药。进一步优选地，链脲菌素的施用剂量为 20-25mg/Kgo本专利技术还提供了一种制备自身免疫性I型糖尿病的动物模型的方法，它是将链脲菌素施用于灵长类动物，链脲菌素的施用方法和剂量为静脉给予，15-30本文档来自技高网...
【技术保护点】
低剂量的链脲菌素在制备用于筛选治疗自身免疫性１型糖尿病药物的动物模型中的用途，其中链脲菌素的施用剂量为：１５－３０ｍｇ／Ｋｇ／次。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陆燕蓉，程惊秋，邓绍平，陈又南，田伯乐，麦刚，任艳，王莉，李宏霞，魏玲玲，金熙，乔超锋，张文胜，何斯荣，曾力，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，成都华西海圻医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：90[中国|成都]
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