一种解冻肉快速鉴别试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术的提供了一种解冻肉快速鉴别试剂盒及其应用，所述检测试剂盒包括检测装置，样品袋，稀释管，比色卡；所述检测装置包括反应垫，显色片；所述反应垫负载有反应试剂，所述反应试剂包括双乙酰辅酶A、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型二钠盐、金属螯合剂、表面活性剂；所述显色片由显色片1和显色片2重叠放置；所述显色片1负载显色剂；所述显色片2负载递氢体。本发明专利技术试剂盒将肉眼不可见的NADH变化转化为可用肉眼直接观察的颜色变化，避免了对检测仪器的依赖；该发明专利技术大幅优化了HADH法鉴定解冻肉的操作过程，并将检测时间缩短在5分钟之内，实现了不受检测仪器、实验室环境以及专业操作人员限制的新鲜肉与解冻肉快速鉴定。制的新鲜肉与解冻肉快速鉴定。制的新鲜肉与解冻肉快速鉴定。

【技术实现步骤摘要】
一种解冻肉快速鉴别试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于肉制品质量检测
，具体涉及一种基于HADH法快速区分新鲜肉与解冻肉的纸基微流控检测试剂盒。

技术介绍

[0002]冷却肉和冷冻肉是常见的两种肉销售方式。冷却肉具有更好的品质和营养价值，但贮藏期短，销售价格高。冷冻可以大幅延长肉的贮藏时间，但由于冻融导致的肌肉细胞损伤，使其营养、质构和风味品质下降，售价也相较冷却肉更低。基于这一差异，市场常出现以解冻肉冒充新鲜冷却肉销售的情况，损害消费者利益。
[0003]解冻肉与冷却肉难以通过肉眼进行快速区分，目前已开发的鉴别方法包括色差分析法、光谱法、低场核磁共振氢谱法、扫描电镜法以及酶法等。基于阻抗谱的解冻肉与鲜肉识别方法(申请号201010256381.1)基于冻融过程中肌肉细胞膜破裂，内容物外溢，导致肌肉阻抗值发生变化的原理。但这一方法需借助专业检测仪器，只适用于工厂流水线上的大规模检测，适用范围有限。
[0004]HADH法鉴别新鲜肉与解冻肉是基于鲜肉在冷冻
‑
解冻过程中，细胞遭到冰晶损伤，内容物外溢到汁液中这一现象。研究表明β
‑
羟酰基辅酶A脱氢酶(HADH)含量在鲜肉和解冻肉汁液中存在显著差异，可作为鉴别标志物。HADH在体外可催化乙酰乙酰辅酶A转化为β
‑
羟酰基辅酶A，同时使烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型二钠盐(NADH)转化为烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)。因此可根据反应体系中NADH含量差异来反映HADH含量差异。使用HADH法检测解冻肉的现有技术中，一种生鲜猪肉与解冻猪肉的鉴别方法(申请号201410187773.5)需对比经冷冻
‑
解冻样品与原样品吸光值变化速度的比值，当比值大于1.8时，确定原样品为新鲜肉；当比值小于1.4时，确定原样品为解冻肉。这一方法需将样品冷冻再解冻，且需借助光学仪器获取结果，并经过计算判定。该方法耗时长、设备要求高、操作难度大，实际应用中需专业人员依托于实验室完成，不具有实际应用价值。
[0005]因此若能对HADH法进行优化，降低检测难度，提高检测效率，并开发一种操作简单、不依赖设备的快速肉眼鉴别新鲜肉与解冻肉的方法与工具，具有重要意义。

技术实现思路

[0006]为解决现有技术中存在的上述技术问题，本专利技术基于HADH法鉴别新鲜肉与解冻肉原理，开发一种解冻肉快速鉴别试剂盒，以实现新鲜肉与解冻肉的肉眼快速鉴别。
[0007]本专利技术为实现上述目的，采用以下技术方案：
[0008]本专利技术的第一个目的是提供一种基于HADH的纸基微流控解冻肉检测试剂盒，所述检测试剂盒包括检测装置，所述检测装置包括反应垫，显色片；
[0009]所述反应垫负载有反应试剂，所述反应试剂包括乙酰乙酰辅酶A、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型二钠盐(NADH)、金属螯合剂、表面活性剂；
[0010]所述显色片由显色片1和显色片2重叠放置，显色片2位于显色片1上方；
[0011]所述显色片1负载显色剂；
[0012]所述显色片2负载递氢体；
[0013]优选的，所述金属螯合剂为乙二胺四乙酸(EDTA)；
[0014]所述表面活性剂选自吐温
‑
20、吐温
‑
80、TRITON X
‑
100、SPAN 60、BRIJ 35、Cremophor EL；
[0015]优选的，所述表面活性剂为吐温
‑
20；
[0016]优选的，所述反应试剂、显色剂、递氢体的溶剂为PBS或水。
[0017]进一步的，所述反应试剂浓度为：
[0018][0019]优选的，所述表面活性剂浓度为10mg/mL
[0020]进一步的，所述显色剂选自噻唑蓝3
‑
(4，5
‑
二甲基噻唑
‑
2)
‑
2,5
‑
二苯基四氮唑溴盐(MTT)、3,3'
‑
[1
‑
(苯氨酰基)
‑
3,4
‑
四氮唑]‑
二(4
‑
甲氧基
‑6‑
硝基)苯磺酸钠(XTT)、3
‑
(4，5
‑
二甲基噻唑
‑2‑
基)
‑5‑
(3
‑
羧甲酯基)
‑2‑
(4
‑
磺苯基)
‑
2H
‑
四唑(MTS)、2
‑
(2
‑
甲氧基
‑4‑
硝基苯基)
‑3‑
(4
‑
硝基苯基)
‑5‑
(2,4
‑
二磺酸苯)
‑
2H
‑
四唑单钠盐(WSTs)、氯化硝基四氮唑蓝(NBT)、碘硝基氯化四氮唑蓝(INT)、氯化三苯基四氮唑(TTC)中的任意一种；优选的，所述显色剂为噻唑蓝3
‑
(4，5
‑
二甲基噻唑
‑
2)
‑
2,5
‑
二苯基四氮唑溴盐(MTT)。
[0021]进一步的，显色剂浓度为0.01
‑
5mg/mL，优选的，所述显色剂浓度为0.5mg/mL。
[0022]进一步的，所述递氢体选自5
‑
甲基吩嗪硫酸甲酯(PMS)、黄递酶中的任意一种；优选的，
[0023]所述递氢体为5
‑
甲基吩嗪硫酸甲酯(PMS)。
[0024]进一步的，递氢体浓度为浓度为0.01
‑
5mg/mL，优选的，所述递氢体浓度为0.5mg/mL。
[0025]进一步的，所述反应垫、显色片的材料选自玻璃纤维膜、聚酯纤维膜(无纺布)、醋酸纤维素膜、硝酸纤维素膜和滤纸中的任意一种。
[0026]进一步的，将反应试剂浸渍反应垫的材料后冷冻干燥，制备得到反应垫；将显色剂浸渍显色片1的材料后冷冻干燥，制备得到显色片1；将递氢体浸渍显色片2的材料后，制备得到显色片2。
[0027]进一步的，所述检测试剂盒的反应垫、显色片在使用时需相互接触。在某个特定的实施例中，所述相互接触的方式为：所述检测试剂盒还包括支撑垫，所述支撑垫能够沿支撑垫中线对称折叠，所述反应垫和显色片分别沿支撑垫中线对称固定在支撑垫中线两侧，反应垫和显色片在折叠后相接触。
[0028]进一步的，所述检测试剂盒还包括样品袋、稀释管、比色卡、胶头滴管中的一种或多种。
[0029]进一步的，稀释管中含有pH6.0的0.1M磷酸盐缓冲液；
[0030]优选的，所述稀释管标记刻度线，能够将待测样品与pH6.0的0.1M磷酸盐缓冲液进行体积比1:9稀释。
[0031]反应垫、显色片的形状和尺寸没有限制，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于HADH的纸基微流控解冻肉检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括检测装置，所述检测装置包括反应垫，显色片；所述反应垫负载有反应试剂，所述反应试剂包括乙酰乙酰辅酶A、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸还原型二钠盐(NADH)、金属螯合剂、表面活性剂；所述显色片由显色片1和显色片2重叠放置，显色片2位于显色片1上方；所述显色片1负载显色剂；所述显色片2负载递氢体。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述反应试剂浓度为：乙酰乙酰辅酶A1.0mg/mLNADH 1.0mg/mL金属螯合剂0.6mg/mL表面活性剂0.01
‑
20mg/mL；优选的，表面活性剂浓度为10mg/mL。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述金属螯合剂为乙二胺四乙酸。4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂为吐温
‑
20、吐温
‑
80、TRITON X
‑
100、SPAN 60、BRIJ 35、Cremophor EL；优选的，所述表面活性剂为吐温
‑
20。5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述反应试剂、显色剂、递氢体的溶剂为PBS或水。6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述显色剂选自噻唑蓝3
‑
(4，5
‑
二甲基噻唑
‑
2)
‑
2,5
‑
二苯基四氮唑溴盐(MTT)、3,3'
‑
[1
‑
(苯氨酰基)
‑
3,4
‑
四氮唑]
‑
二(4
‑
甲氧基
‑6‑
硝基)苯磺酸钠(XTT)、3
‑
(4，5
‑
二甲基噻唑
‑2‑
基)
‑5‑
(3
‑
羧甲酯基)
‑2‑
(4
‑
磺苯基)
‑
2H
‑
四唑(MTS)、2
‑
(2
‑
甲氧基
‑4‑
硝基苯基)
‑3‑
(4
‑
硝基苯基)
‑5‑
(2,4
‑
二磺酸苯)
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：李春保，高廷轩，赵迪，单锴，粘颖群，柯维馨，贺晖，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：