一种基于磁控量子点CRISPR报告元件的弓形虫核酸检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于磁控量子点CRISPR报告元件的弓形虫核酸检测方法，该磁控量子点报告元件由链霉亲和素化磁珠、生物素化DNA1和量子点

【技术实现步骤摘要】
一种基于磁控量子点CRISPR报告元件的弓形虫核酸检测方法


[0001]本专利技术为生物传感器
，具体涉及一种基于新型磁控量子点CRISPR报告元件的弓形虫核酸检测方法。

技术介绍

[0002]CRISPR检测技术被誉为“下一代分子检测技术”，仅需一段RNA和CRISPR相关蛋白(Cas)组成二元复合物就可发挥生物传感和信号放大功能，具有操作简单、特异性强、灵敏度高、反应迅速等特点。为进一步提高CRISPR检测技术的灵敏度，将CRISPR系统与扩增技术耦联为常用策略，其中，重组酶介导等温核酸扩增技术(RAA)常温扩增技术能够有效降低设备要求和反应时间，在提高检测性能的同时可满足现场即时检测对CRISPR检测技术的要求。然而，CRISPR检测技术常用于信号读出的荧光基团修饰报告元件存在荧光强度弱、结构不稳定、价格昂贵、光漂白等缺点，这直接导致检测系统背景信号升高，灵敏度降低。因此，有必要开发出荧光强度大、荧光稳定、背景信号低的新型报告元件。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于针对现有报告元件的性能缺陷，开发一种基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种磁控量子点报告元件，其特征在于，该磁控量子点报告元件由链霉亲和素化磁珠、生物素化DNA1和量子点
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DNA2组装而成，所述的链霉亲和素化磁珠与生物素化DNA1相连，所述的量子点
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DNA2通过DNA1与DNA2序列互补，连接在磁珠上。2.根据权利要求1所述的磁控量子点报告元件，其特征在于，所述磁控量子点报告元件的制备过程为：由链霉亲和素化磁珠和生物素化DNA1在Binding&Washing缓冲液中混合连接，然后利用磁铁吸附磁珠，用缓冲液洗去游离生物素化DNA1，再加入量子点
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DNA2在缓冲液中混合连接，用缓冲液洗去游离量子点
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DNA2，获得磁控量子点报告元件。3.根据权利要求1或2所述的磁控量子点报告元件，其特征在于，所述的量子点
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DNA2由CdCl2、MPA、Na2TO3、NaBH4和DNA2在pH9.5～11.5溶液环境下90℃加热1～3h合成；优选的，所述的溶液环境中CdCl2、MPA、Na2TeO3、NaBH4和DNA2的浓度为：CdCl
2 15～25mM，MPA 15～25mM，Na2TeO
3 1～10mM，NaBH
4 5～15mM，DNA250nM～500nM；进一步优选的，所述的溶液环境中CdCl2、MPA、Na2TeO3、NaBH4和DNA2的浓度为：CdCl
2 20mM，MPA 20mM，Na2TeO
3 1mM，NaBH
4 10mM，DNA2 100nM。4.根据权利要求1或2所述的磁控量子点报告元件，其特征在于，所述的生物素化DNA1为：CGGTAATAGGAAAGTGTGTAAACTGAATA
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Biotin；所述的DNA2的核苷酸序列为：TATTCAGTTTACACACTTTCCTATTACCGTACTATTAG*G*G*G*G*G*G*G*G，其中*代表的是硫代磷酸化修饰。5.一种基于磁控量子点报告元件的CRISPR/Cas12a生物传感器，其特征在于，该生物传感器包含权利要求1～4中任意一项所述的磁控量子点报告元件、CRISPR/Cas12a识别体系和RAA扩增体系；所述的CRISPR/Cas12a识别体系包括crRNA和Cas12a蛋白，两者通过氢键紧密结合，crRNA能识别目标核酸，诱导Cas12a蛋白激活；所述RAA扩增体系为包含特异性引物对的RAA试剂盒。6.根据权利要求5所述的CRISPR/Cas12a生物传感器，其特征在于，所述crRNA为crRNA1或crRNA2，crRNA1：UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUCACCCUCCAGGAAAAGCAGCCA；crRNA2：UAAUUUCUACUAAGUGUAGAUCTCGTGGTGATGGCGGAGAG。7...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈月，叶鑫荣，王柳丹，陈艺萌，
申请(专利权)人：南京医科大学，
类型：发明
国别省市：