一种靶向适配体及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，涉及一种靶向适配体及其应用。所述的靶向适配体对肝脏具有很好的特异性和亲和性。所述的靶向适配体具有特异性高、稳定性高、可体外合成、易于修饰、稳定性高等优点，可用于肝脏细胞或组织的检测及靶向递送产品的制备。向递送产品的制备。向递送产品的制备。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向适配体及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及一种靶向适配体及其应用。

技术介绍

[0002]核酸适配体（Aptamer）是一类短的结构明确的单链RNA或DNA分子，可以与特定分子靶标进行特异性结合，长度为20
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100 nt（常见为20
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40 nt）。近年来，由于核酸适配体能与细胞表面受体结合被细胞内吞的特点，使其被应用于靶向药物递送，一般直接或用接头把Aptamer与siRNA、ASO、Gapmer等核酸药物连接在一起行使靶向递送药物的功能。
[0003]Aptamer的产生，是通过指数富集的配体系统进化，进行迭代富集筛选，简称为“SELEX”（Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment）。从1990年至今的研究表明，其大体思路分三步进行：（1）识别结合，（2）分离提取，（3）扩增往复。具体分类按照筛选对象主要分为两大类，体外筛选（in vitro SELEX）和体内筛选（in vivo SELEX）；进一步按筛选原材料的不同又可分为细胞富集筛选法、组织富集筛选法和活体富集筛选法。
[0004]体外进行的细胞富集筛选方法，是使用细胞作为筛选目标体。其特点是可以使被筛选的备选物以天然完整的形式与细胞表面靶标物质相互作用，无需提前验证知晓具体靶标物。适配体可以与细胞表面的任何潜在物质，如膜蛋白、多糖、脂质等发生互作。细胞富集筛选方法因具体技术手段不同，还可以细分为荧光激活细胞分选筛选法（Fluorescence
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activated cell sorting，FACS）、细胞内化筛选法（Cell
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Internalized SELEX）、微流控芯片细胞筛选法（On
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Chip Cell SELEX）、配体介导细胞筛选法（Ligand
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guided cell
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SELEX，LGCS）、环套细胞筛选法（Toggle
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Cell
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SELEX）等等。
[0005]利用细胞作为富集筛选工具有别于组织和活体的两大好处，就是实施实验便捷和操作环境稳定。与此同时局限性也很明显，适配体最终的预期使用场景是个体，而往往在细胞环境下表现良好的适配体在组织或者个体中却显示出极低的亲和力，更有甚者转移阵地的适配体以失败告终。为了提高适配体对组织和器官的作用效率，克服组织器官中细胞的复杂性、异质性和形态结构多样性带来的影响，利用整个组织进行富集筛选，是一个更优的手段。此方法常在肿瘤组织中使用组织切片进行富集分析，如乳腺癌和导管癌等。

技术实现思路

[0006]本专利技术的第一方面提供一种适配体，所述适配体为如SEQ ID NO：1所述的寡核苷酸。
[0007]在一些实施方案中，所述适配体可以为人工合成的序列，或任何其他来源的核苷酸序列。
[0008]本专利技术的第二方面提供一种适配体的衍生物，包括A1至A4中的至少一种：A1：将所述的核酸适配体的一端或中间连接上信号分子和/或活性分子和/或功能基团，且具有相同功能的核酸适配体的衍生物；
A2：由所述的适配体编码和/或转录的RNA；A3：由所述的适配体编码的肽核酸；A4：将所述的核酸适配体进行核苷酸修饰，且具有相同功能的适配体的衍生物。
[0009]在一些实施方案中，所述信号分子和/或活性分子和/或功能基团包括荧光基团、淬灭基团、放射性物质、蛋白、抗体、siRNA、ASO、Gapmer、氨基、异硫氰酸荧光素、生物素、地高辛、纳米材料、聚乙二醇、叶酸和酶标记中的至少一种。在一些实施方案中，所述荧光基团包括Cy3、Cy5、FAM、荧光素、FITC、荧光纳米微球。
[0010]在一些实施方案中，所述核苷酸修饰包括氨基化、磷酸化、羧基化、硫代修饰、巯基修饰、2
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甲氧基修饰、2
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甲氧基乙基修饰、2
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氟修饰、锁核酸修饰、3'端倒置dT/dG修饰、甲基/去甲基化和同位素化的修饰中的至少一种。
[0011]在一些实施方案中，所述适配体可以通过一些不改变核苷酸同一性的核酸修饰来修饰。例如，核酸的骨架或糖残基的修饰不改变核苷酸的同一性，因为碱基本身保持与适配体序列中的相同。
[0012]本专利技术的第三方面提供所述的适配体，或所述的适配体衍生物在制备靶向肝脏的制剂中的应用。
[0013]在一些实施方案中，所述靶向肝脏的制剂为：B1：特异性靶向肝脏细胞或者肝脏组织的靶向性药物；B2：特异性诊断肝脏疾病的诊断试剂；B3：肝脏细胞、组织或活体定位成像制剂；或B4：捕获或提取待测样品中的肝脏细胞或组织的制剂。
[0014]在一些实施方案中，所述应用还包括非诊断和治疗目的的应用。
[0015]本专利技术的第四方面提供一种靶向递送载体，包括所述的适配体，或所述的适配体的衍生物。
[0016]本专利技术的第五方面提供一种肝脏靶向药物，包括：a）所述的适配体，或所述的适配体的衍生物；和b）与a）直接或间接连接的药物。
[0017]本专利技术的第六方面提供一种肝脏细胞检测试剂，包括：i）所述的适配体，或所述的适配体的衍生物；和ii）与i）直接或间接连接的可检测标记。
[0018]在一些实施方案中，所述“间接连接”可以通过，例如，通过配体（ligand）或接头（linker）连接。
[0019]在一些实施方案中，所述可检测的标记为荧光基团。在一些实施方案中，所述荧光基团包括Cy3、Cy5、FAM、荧光素、FITC、荧光纳米微球。
[0020]本专利技术的第七方面提供一种在体外向受试细胞或组织递送靶向药物的方法，包括：i）将所述的适配体，或所述的适配体的衍生物，或所述的靶向递送载体，和靶向药物作用于受试细胞或组织；或ii）将所述的肝脏靶向药物作用于受试细胞或组织；所述方法用于非疾病的诊断与治疗。
[0021]本专利技术的第八方面提供一种靶向递送系统，包括：i） 靶向递送构件；和ii） 治疗/诊断构件；所述靶向递送构件包括所述的适配体，或所述的适配体的衍生物，或所述的靶向递送载体。
附图说明
[0022]图1为小鼠体内筛选肝脏靶向适配体序列流程；包括待筛选的Aptamer序列制备及体外转录成修饰的RNA，注射到小鼠体内后取肝脏组织进行RNA提取，得到的RNA一部分用于逆转录建库测序分析不同Aptamer在组织中的富集程度，另一部分用于逆转录加接头进行体外转录做第二轮筛选。
[0023]图2为Aptamer在两轮筛选中的富集度；富集度的计算方法为，该条Aptamer在测序数据中被测到的读长数除以所有Aptamer测到的读长数的和。
[0024]图3为Aptamer1与小鼠肝原代细胞孵育15min结果；左图为cy3荧光通道拍摄，右图为紫外通道拍摄。
[0025]图4为Aptamer1转染2h本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种适配体，其特征在于，所述适配体为如SEQ ID NO：1所示的寡核苷酸。2.如权利要求1所述的适配体的衍生物，其特征在于，包括A1至A4中的至少一种：A1：将权利要求1所述的适配体的一端或中间连接上信号分子和/或活性分子和/或功能基团，且具有相同功能的适配体的衍生物；A2：由权利要求1所述的适配体编码和/或转录的RNA；A3：由权利要求1所述的适配体编码的肽核酸；A4：将权利要求1所述的适配体进行核苷酸修饰，且具有相同功能的适配体的衍生物。3.如权利要求2所述的适配体的衍生物，其特征在于，所述信号分子和/或活性分子和/或功能基团包括荧光基团、淬灭基团、放射性物质、蛋白、抗体、siRNA、ASO、Gapmer、氨基、异硫氰酸荧光素、生物素、地高辛、纳米材料、聚乙二醇、叶酸和酶标记中的至少一种。4.如权利要求2所述的适配体的衍生物，其特征在于，所述核苷酸修饰包括氨基化、磷酸化、羧基化、硫代修饰、巯基修饰、2
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甲氧基修饰、2
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甲氧基乙基修饰、2
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氟修饰、锁核酸修饰、3'端倒置dT/dG修饰、甲基/去甲基化和同位素化的修饰中的至少一种。5.如权利要求1所述的适配体，或权利要求2
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4任一所述的适配...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨文兵，
申请(专利权)人：时夕广州生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：