一种从咖啡豆中提取新绿原酸的方法技术

本发明专利技术公开一种从咖啡豆中提取新绿原酸的方法，先进行乙醇浸泡提取操作，过滤后再进行萃取，有利于后续步骤的进行，同时提高产品纯度。富集过程，取所述浓缩液上大孔树脂柱进行吸附，用水洗脱后，水洗去除掉糖类，鞣脂类等杂质，用乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，收集到的洗脱液主要为新绿原酸。在结晶和纯化的过程中，用Sephadex LH

【技术实现步骤摘要】
一种从咖啡豆中提取新绿原酸的方法


[0001]本专利技术涉及植物提取领域，且特别涉及一种从咖啡豆中分离纯化新绿原酸的方法。

技术介绍

[0002]新绿原酸(neochlorogenic acid，5
‑
CQA)，是一种在干果和其他植物中发现的一种天然多酚化合物，在金银花中含量较高，结构如下述的式1所示，新绿原酸在抗炎、清除自由基、抗血栓、抗血小板凝集、免疫调节和抗菌、降低胆固醇、甘油三脂和低密度脂蛋白等方面具有显著药理作用。
[0003][0004]由于绿原酸合成比较困难，因此关于绿原酸提取的文献较多，如在杜仲叶、金银花、山银花、绿咖啡豆、菊花或茵陈等植物含有绿原酸，目前公开比较多的是在咖啡豆、金银花、杜仲等组分中提取绿原酸。
[0005]咖啡豆为茜草科(Rubiaceae)植物咖啡(Coffea)的干燥成熟果实。该药材主要依赖进口，但在我国南部和西南部也有引入栽培，咖啡豆性辛温，辛能散湿，温能助阳，因此有助肾阳、利水的作用，可以提高排尿量，改善腹胀水肿。其作用与肉苁蓉等性温的中药相似，故现代有中医配合咖啡(日常饮用)调治湿热痢疾或前列腺增生伴有湿热者，效果不错，尤其前列腺增生患者，常饮咖啡还有止痛和抗增生作用；更可利用其与肉苁蓉等性温的中药相似的特性，配伍其他补肾、益气的中药材，炮制成日常饮品，满足口腹之欲的同时温补肾阳、培元固本、修复身体机能，激发活力。化学成分研究表明该植物富含酚酸，黄酮，甾体和生物碱等成分，其中酚酸类化合物是该植物药理活性的基础，其主要成分有新绿原酸。
>[0006]但至今尚无从咖啡豆中分离制备新绿原酸单体的方法和有关新绿原酸在抗肿瘤药物中应用的报道。同时，已有的新绿原酸提取工艺方法存在方法繁琐，生产成本高，纯度不高，难以实现工业化等局限性。

技术实现思路

[0007]为解决上述技术问题，本专利技术提供一种从咖啡豆中分离纯化新绿原酸的方法，制备方法工艺流程简单、生产成本低，有机溶剂可回收利用，提取的新绿原酸纯度高、质量好。
[0008]本专利技术提供的技术方案如下：
[0009]一种从咖啡豆中提取新绿原酸的方法，该方法包含以下步骤：
[0010](1)提取：将咖啡干燥果实粉碎过筛，过80
‑
120目筛，得咖啡豆粉末；咖啡豆粉末加乙醇浸泡第一次提取，筛网过滤，过滤得滤液a和滤渣a；滤渣a加乙醇浸泡第二次提取，筛网
过滤，过滤后得滤液b，合并滤液a和b，再过微孔滤膜，得到过滤液；
[0011](2)萃取：将上述滤液减压浓缩至十分之一体积，加入有机溶剂萃取，减压浓缩萃取液至十分之一体积，得到萃取液；
[0012](3)富集：将所述萃取液稀释后上大孔树脂进行分离，以纯净水洗除杂质，再以10～30vt％乙醇水溶液洗脱，洗脱液取样HPLC分析检测，收集含新绿原酸洗脱液；
[0013](4)结晶：合并含新绿原酸洗脱液，减压浓缩至十分之一体积，冷却静置，收集得到新绿原酸粗品；
[0014](5)纯化：将所述析出物调节pH＝3加乙醇溶解过滤，经Sephadex LH
‑
20凝胶色谱柱，95％乙醇水洗脱进行分离纯化，洗脱液经HPLC分析检测，收集高纯度新绿原酸洗脱液进行萃取，调节滤液pH值至2～3，加入硫酸铵，用乙酸乙酯
‑
水混合溶剂萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液减压浓缩至10mL适当体积，在冰冻室内冷却，结晶，得到新绿原酸纯品；
[0015](6)干燥：将上述3次所得的晶体干燥后可得到新绿原酸纯品。
[0016]其中，所述步骤(1)中第一次加乙醇与咖啡豆粉末的体积质量比为(4.5
‑
5.5):1(L/Kg)；所述的第二次加乙醇和咖啡豆粉末的体积质量比为(2
‑
3):1(L/Kg)。
[0017]其中，所述步骤(1)中乙醇的体积分数为50
‑
75％，第一次提取的乙醇温度为50℃，第二次提取的乙醇温度为30℃。
[0018]其中，所述步骤(1)中微孔滤膜，购自天津津腾有限公司，材质为Nylon66，孔径0.22um。
[0019]其中，所述步骤(2)中所述有机溶剂为正丁醇，萃取时间30min。
[0020]其中，所述步骤(3)大孔树脂为非极性大孔树脂或弱极性大孔树脂HP20，分别用10vot％，20vot％，30vot％乙醇水各3个柱体积洗脱。
[0021]其中，所述步骤(4)减压浓缩时，温度为50～55℃，真空度为
‑
0.07MPa到
‑
0.09MPa。
[0022]其中，所述步骤(1)中，乙醇浸泡第一次提取后，40目筛网过滤，乙醇浸泡第二次提取后，100目筛网过滤其中，所述步骤(5)乙酸乙酯
‑
水混合溶剂的体积比为1:1。
[0023]其中，所述步骤(6)干燥时，温度为40℃，恒温。
[0024]相较于现有技术，本专利技术提供的从咖啡豆中提取新绿原酸的方法，包括提取、萃取、富集、结晶、纯化和干燥，从咖啡豆中提取的新绿原酸纯品纯度高。
[0025]本专利技术的提取方法先进行乙醇浸泡提取操作，过滤后再进行萃取，有利于后续步骤的进行，同时提高产品纯度。富集过程，取所述浓缩液上大孔树脂柱进行吸附，用水洗脱后，水洗去除掉糖类，鞣脂类等杂质，用乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，收集到的洗脱液主要为新绿原酸。在结晶和纯化的过程中，用Sephadex LH
‑
20凝胶色谱纯化除杂，去除色素等，再通过乙酸乙酯
‑
水萃取浓缩，得到高浓度绿原酸。
[0026]本方法相对于传统制备方法，操作简便，易于回收，安全无毒，纯度高质量好，有效降低分离成本。
[0027]经实验验证，本专利技术提供的从咖啡豆中提取新绿原酸的方法，得到的新绿原酸纯品纯度能达到HPLC>94.0％以上。本专利技术提取得到的新绿原酸产品经核磁共振光谱和高相液相色谱分析，证明能有效保证产品质量的稳定性和可控性。
[0028]本专利技术提取得到的新绿原酸在抗癌方面的具有药理活性，细胞实验表明，本专利技术的提取的新绿原酸具有抗人喉癌(Hep
‑
2)细胞的药理活性。
附图说明
[0029]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0030]图1为本专利技术化合物新绿原酸的核磁共振氢谱(1H
‑
NMR)；
[0031]图2为本专利技术化合物新绿原酸的核磁共振碳谱(
13
C
‑
NMR)；
[0032]图3为本专利技术化合物新绿原酸HPLC分析检测结果图。
具体实施方式
[0033]为了使本领域本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从咖啡豆中提取新绿原酸的方法，其特征在于，该方法包含以下步骤：(1)提取：将咖啡干燥果实粉碎过筛，过80
‑
120目筛，得咖啡豆粉末；咖啡豆粉末加乙醇浸泡第一次提取，筛网过滤，过滤得滤液a和滤渣a；滤渣a加乙醇浸泡第二次提取，筛网过滤，过滤后得滤液b，合并滤液a和b，再过微孔滤膜，得到过滤液；(2)萃取：将上述滤液减压浓缩至十分之一体积，加入有机溶剂萃取，减压浓缩萃取液至十分之一体积，得到萃取液；(3)富集：将所述萃取液稀释后上大孔树脂进行分离，以纯净水洗除杂质，再以10～30vt％乙醇水溶液洗脱，洗脱液取样HPLC分析检测，收集含新绿原酸洗脱液；(4)结晶：合并含新绿原酸洗脱液，减压浓缩至十分之一体积，冷却静置，收集得到新绿原酸粗品；(5)纯化：将所述析出物调节pH＝3加乙醇溶解过滤，经Sephadex LH
‑
20凝胶色谱柱，95％乙醇水洗脱进行分离纯化，洗脱液经HPLC分析检测，收集高纯度新绿原酸洗脱液进行萃取，调节滤液pH值至2～3，加入硫酸铵，用乙酸乙酯
‑
水混合溶剂萃取3次，合并乙酸乙酯萃取液减压浓缩至10mL，在冰冻室内冷却，结晶，得到新绿原酸纯品；(6)干燥：将上述3次所得的晶体干燥后可得到新绿原酸纯品。2.根据权利要求1所述的从咖啡豆中提取新绿原酸的方法，其特征在于：所述步骤(1)中第一次加乙醇与咖啡豆粉末的体积质量比为(4.5
‑
5.5):1(L/Kg)；所述的第二次加乙醇和咖啡豆粉末的体积质量比为(2
...

【专利技术属性】
技术研发人员：肜霖，董爱君，魏敏，刘吟，马舒翼，
申请(专利权)人：湖北中烟工业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：