一种促进糖尿病宠物皮肤创伤修复的胶原蛋白-干细胞制剂制造技术

本发明专利技术公开了一种促进糖尿病宠物皮肤创伤修复的胶原蛋白

【技术实现步骤摘要】
一种促进糖尿病宠物皮肤创伤修复的胶原蛋白
‑
干细胞制剂


[0001]本专利技术属于干细胞
，涉及一种促进糖尿病宠物皮肤创伤修复的胶原蛋白
‑
干细胞制剂。

技术介绍

[0002]皮肤是保护机体免受外界病原体侵害的第一道屏障，并且具有调节体温、控制排泄和合成维生素D等必要功能。当皮肤的完整性遭到破坏时，创面即刻启动一系列复杂且高度协调的修复措施以促进损伤部位组织的愈合，在此期间创面容易受到多种因素干扰，导致伤口难以愈合，甚至丧失基本功能。创面的治疗需要特定的医疗技术，有些甚至需要长期治疗，这就构成了当代医学的一个巨大挑战。随着宠物市场的扩大，犬猫等宠物和人类皮肤伤口愈合问题愈加严重。
[0003]糖尿病(Diabetes Mellitus，DM)已经成为伴侣动物中常见的自发性复杂的代谢性内分泌疾病之一，有调研指出在犬和猫中患病率估计为0.26～1.33％。糖尿病所造成的伤口溃烂愈合难度高，易感染，这不仅可能延迟伤口愈合过程，还可能导致受影响患者的肢体截肢甚至更为严重的后果。使用不同的敷料，例如纱布、薄膜和组织工程皮肤替代物是目前的常规治疗方法，负压伤口治疗、自体皮肤移植物和高压氧伤口治疗也是有效的治疗手段。但是，这些方法有成本高、不能及时移除失活的组织和外科清创、氧中毒等限制性。为了规避传统方法的局限性，应用干细胞已成为一种很有前途的方法。

技术实现思路

[0004]本专利技术解决的问题在于提供一种促进糖尿病宠物皮肤创伤修复的胶原蛋白
‑
干细胞制剂，通过干细胞技术克服糖尿病宠物皮肤损伤愈合困难，促进糖尿病犬皮肤损伤修复。
[0005]本专利技术是通过以下技术方案来实现：
[0006]一种促进糖尿病宠物皮肤创伤修复的胶原蛋白
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干细胞制剂，是将传代3
‑
5代的脂肪间充质干细胞置于胶原蛋白培养液中，于37℃、5％CO2培养至少5天；培养完成后得到胶原蛋白
‑
干细胞制剂；
[0007]所述的胶原蛋白培养液是10％FBSα
‑
MEM培养液与胶原蛋白液以1：1体积比例混合，经超声至液态并灭菌而得。
[0008]一种促进糖尿病宠物皮肤创伤修复的胶原蛋白
‑
干细胞制剂的制备方法，包括以下操作：
[0009]1)用配置0.1M醋酸溶解胶原蛋白，室温搅拌至胶原蛋白完全溶解，得到胶原蛋白溶液；
[0010]2)取无菌玻璃瓶，在瓶底部铺上一层氯仿，将胶原蛋白溶液转移到氯仿上层，氯仿体积为胶原蛋白溶液的10％，不能震荡或搅拌；2
‑
8℃静置过夜；无菌操作下将上层胶原蛋白溶液转移至无菌容器中，得到胶原蛋白原液；
[0011]3)将胶原蛋白原液的酸中和后，得到胶原蛋白液；
[0012]4)将10％FBSα
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MEM培养液与胶原蛋白液以1：1体积比例混合，并超声至液态，得到胶原蛋白培养液；然后送去辐照灭菌；
[0013]5)将传代3
‑
5代的脂肪间充质干细胞置于胶原蛋白培养液中，于37℃、5％CO2培养至少5天；培养完成后得到胶原蛋白
‑
干细胞制剂。
[0014]所述的促进糖尿病宠物皮肤创伤修复的胶原蛋白
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干细胞制剂在制备宠物皮肤创伤修复药物或制剂中的应用。
[0015]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益的技术效果：
[0016]本专利技术提供促进糖尿病宠物皮肤创伤修复的胶原蛋白
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干细胞制剂，是在犬脂肪间充质干细胞培养基中加入胶原蛋白，胶原蛋白保存了犬间充质干细胞的三维活性，可以有效地解决细胞转移过程中造成的细胞活性降低，建立了胶原蛋白与干细胞相结合的基础。
[0017]本专利技术提供促进糖尿病宠物皮肤创伤修复的胶原蛋白
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干细胞制剂，经皮肤愈合实验表明添加胶原蛋白的间充质干细胞可以缩短糖尿病犬的伤口愈合时间，促进犬类皮肤损伤的修复。其中在HE染色中，在Col+ADSC组和ADSC组新形成的血管和毛囊较多，但在PBS组中较少，并且Col+ADSC组表皮的恢复效果更好。而在Masson染色中，PBS组蓝色部分的胶原纤维的量非常小。比较了Col+ADSC组、ADSC组和PBS胶原沉积部分进行颜色分析。Col+ADSC组的胶原沉积量高于ADSC组，胶原纤维的修复效果更好；添加胶原蛋白的间充质干细胞可以缩短伤口愈合时间，有效推进了糖尿病犬的伤口愈合进程。
附图说明
[0018]图1为胶原蛋白对间充质干细胞活力促进方面的测试结果；
[0019]图2为胶原蛋白
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干细胞制剂对小鼠皮肤损伤修复促进效果测试结果；
[0020]图3为胶原蛋白
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干细胞制剂对正常犬皮肤损伤修复促进效果测试结果；
[0021]图4为胶原蛋白
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干细胞制剂对糖尿病犬皮肤损伤修复促进效果测试结果；
具体实施例
[0022]本专利技术在犬脂肪间充质干细胞培养基中加入胶原蛋白，胶原蛋白保存了犬间充质干细胞的三维活性，可以有效地解决细胞转移过程中造成的细胞活性降低。
[0023]胶原蛋白培养液制备过程如下：
[0024]1.配置0.1M醋酸(5.72ml+994.28ml蒸馏水)。
[0025]2.用0.1M醋酸溶液溶解胶原蛋白，配置1％(w/v)胶原蛋白原液。室温搅拌1
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3h直至胶原蛋白完全溶液。
[0026]3.取无菌玻璃瓶，在瓶底部铺上一层氯仿，将胶原蛋白溶液转移到氯仿上层，氯仿体积为胶原蛋白溶液的10％，不能震荡或搅拌。2
‑
8℃静置过夜。将上层胶原蛋白溶液转移至无菌容器中(无菌操作)，得到胶原蛋白原液。
[0027]4.向胶原蛋白原液加入其0.06倍体积的0.1mol/LNaOH中和，得到胶原蛋白液。
[0028]5.制备10％FBSα
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MEM培养液
[0029](1)将α
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MEM基础培养基粉末置于经高压灭菌后的烧杯中，加入1000mL双蒸水，加入NaHCO32.2g,充分混匀用0.22μml滤器过滤后，保存于4℃冰箱。
[0030](2)将FBS以10％的含量加入PBS溶液中得到10％胎牛血清，充分混匀后过滤分装2ml EP管中，2.0ml/支，保存于
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20℃。
[0031](3)α
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MEM基础培养基96ml于100mL灭菌瓶内，加入10％胎牛血清2ml，NEAA及L
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Glutamin和1％β
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ME各1ml，置于磁力搅拌器上充分混匀后，用0.22μm滤器过滤，封口膜封口，4℃冰箱保存。
[0032]6.将10％FBSα
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MEM培养液与胶原蛋白液以1：1体积比例混合，并超声至液态，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种促进糖尿病宠物皮肤创伤修复的胶原蛋白
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干细胞制剂，其特征在于，是将传代3
‑
5代的脂肪间充质干细胞置于胶原蛋白培养液中，于37℃、5％CO2培养至少5天；培养完成后得到胶原蛋白
‑
干细胞制剂；所述的胶原蛋白培养液是10％FBSα
‑
MEM培养液与胶原蛋白液以1：1体积比例混合，经超声至液态并灭菌而得。2.一种促进糖尿病宠物皮肤创伤修复的胶原蛋白
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干细胞制剂的制备方法，其特征在于，包括以下操作：1)用配置0.1M醋酸溶解胶原蛋白，室温搅拌至胶原蛋白完全溶解，得到胶原蛋白溶液；2)取无菌玻璃瓶，在瓶底部铺上一层氯仿，将胶原蛋白溶液转移到氯仿上层...

【专利技术属性】
技术研发人员：华进联，寇正，李巴仑，赵献军，谭宁，艾力，
申请(专利权)人：西北农林科技大学，
类型：发明
国别省市：