通过超声和印迹基因检测联合鉴别甲状腺结节良恶性方法技术

本发明专利技术涉及通过超声和印迹基因检测联合鉴别甲状腺结节良恶性方法。具体地，本发明专利技术提供一种通过超声和印迹基因检测联合鉴别甲状腺结节良恶性的方法，其所述的方法包括步骤：(1)使用针对SNRPN基因和HM13基因的nascent RNA序列设计的探针，分别在甲状腺细胞样本中进行SNRPN和HM13基因的原位杂交；(2)显色后在显微镜下计数甲状腺细胞核，根据细胞核内的信号点的数量对细胞核进行分类，分别计算双等位基因表达(Biallelic Expression,BAE)、多等位基因表达(Multiallelic Expression,MAE)和总表达(Total Expression,TE)三个参数；(3)对甲状腺结节的超声特征计分，得到K

【技术实现步骤摘要】
通过超声和印迹基因检测联合鉴别甲状腺结节良恶性方法


[0001]本专利技术涉及疾病检测领域，具体地，涉及通过超声和印迹基因检测联合鉴别甲状腺结节良恶性方法。

技术介绍

[0002]根据人群大样本统计分析，大约三分之二的成年人都有在超声下可以观察到的甲状腺结节，但其中只有约5％是恶性的。一方面，随着超声筛查的普及，甲状腺结节过度诊断的问题日益凸显。另一方面，淋巴结和血行转移的甲状腺癌和低分化甲状腺癌预后较差，需要早期发现和早期治疗。目前的甲状腺结节术前诊断依据超声分级和细针穿刺细胞学，但仍然有20
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30％的样本无法明确诊断。基因检测在辅助甲状腺结节诊断中起到了重要作用，但是最常用的BRAF突变检测仅存在与约60
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70％的甲状腺乳头状癌，对30％的甲状腺乳头状癌，以及占甲状腺癌总发病率约15％的甲状腺滤泡癌等其他甲状腺癌无法诊断。临床亟需一种能够在术前准确判断甲状腺结节良恶性的方法，指导治疗方案的选择。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种通过超声和印迹基因检测联合鉴别甲状腺结节良恶性的方法。
[0004]本专利技术第一方面提供一种通过超声和印迹基因检测联合鉴别甲状腺结节良恶性的方法，所述的方法包括步骤：
[0005](1)使用针对SNRPN基因和HM13基因的nascent RNA序列设计的探针，分别在甲状腺细胞样本中进行SNRPN和HM13基因的原位杂交；
[0006](2)显色后在显微镜下计数甲状腺细胞核，根据细胞核内的信号点的数量对细胞核进行分类，分别计算双等位基因表达(Biallelic Expression,BAE)、多等位基因表达(Multiallelic Expression,MAE)和总表达(Total Expression,TE)三个参数，公式如下：
[0007]BAE＝(两个信号点的细胞核数量)/(一个信号点的细胞核数量+两个信号点的细胞核数量+三个或更多信号点的细胞核数量)；
[0008]MAE＝(三个或更多信号点的细胞核数量)/(一个信号点的细胞核数量+两个信号点的细胞核数量+三个或更多信号点的细胞核数量)；
[0009]TE＝(一个信号点的细胞核数量+两个信号点的细胞核数量+三个或更多信号点的细胞核数量)/细胞核总数量；
[0010]其中，印迹基因恶性风险分级模型如下：
[0011]SNRPN的TE小于20％计0分，大于或等于20％计1分；
[0012]SNRPN的BAE小于20％计1分，在20％
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30％之间计2分，大于30％计3分；
[0013]SNRPN的MAE小于3％计1分，在3％
‑
5.5％之间计2分，大于5.5％计3分；
[0014]SNRPN基因的分值＝TE分值
×
(BAE和MAE分值中的较大者)；
[0015]HM13的TE小于11％计0分，大于或等于11％计1分；
[0016]HM13的BAE小于20％计1分，在20％
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30％之间计2分，大于30％计3分；
[0017]HM13的MAE小于3.5％计1分，在3.5％
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6.5％之间计2分，大于6.5％计3分；
[0018]HM13基因的分值＝TE分值
×
(BAE和MAE分值中的较大者)；
[0019]印迹风险分值＝SNRPN基因的分值
×
0.3+HM13基因的分值
×
0.7；
[0020]印迹风险分级(Imprinting Risk Grade,IRG)：风险分值小于1.5为IRG 1级，在1.5
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2.5之间为IRG 2级，大于2.5为IRG 3级；
[0021](3)K
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TI
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RADS 1
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5类，对甲状腺结节良恶性进行如下判断：
[0022][0023]其中，恶性风险小于50％判断为甲状腺良性结节，恶性风险大于或等于50％判断为甲状腺恶性结节。
[0024]优先地，所述的步骤(1)中，所述的甲状腺细胞样本通过以下方法制备：
[0025](a)将甲状腺细针穿刺得到的甲状腺样本注入福尔马林中，固定；
[0026](b)取出甲状腺细胞置于正电荷载玻片上，烤干，得到甲状腺细胞样本。
[0027]优先地，所述的步骤(a)中，福尔马林的浓度为8
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12％。
[0028]优先地，所述的步骤(a)中，所述的固定为室温固定。
[0029]优先地，所述的步骤(a)中，所述的固定的时间为20
‑
30h。
[0030]优先地，所述的步骤(1)中，根据RNAscope试剂盒的操作方法，分别在甲状腺细胞样本中进行SNRPN和HM13基因的原位杂交。
[0031]优先地，所述的步骤(2)中，所述的信号点包括红色信号点和/或棕色信号点。
[0032]优先地，所述的步骤(3)中，根据Kwak甲状腺影像报告及数据系统(K
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TI
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RADS)对甲状腺结节的超声特征计分，得到K
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TI
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RADS 1
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5类。
[0033]本专利技术第二方面，提供一种装置或系统，包括：
[0034]处理器；以及
[0035]存储器，存储有计算机指令，当所述计算机指令被所述处理器执行时，使得所述处理器执行如本专利技术第一方面所述的通过超声和印迹基因检测联合鉴别甲状腺结节良恶性的方法。
[0036]如本专利技术第三方面，提供一种非瞬时性计算机存储介质，存储有计算机程序，当所述计算机程序被一个或多个处理器执行时，使得所述处理器执行如本专利技术第一方面所述的通过超声和印迹基因检测联合鉴别甲状腺结节良恶性的方法。
[0037]在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。
附图说明
[0038]图1为甲状腺细胞核内红色或棕色信号点。
具体实施方式
[0039]表观遗传的变化通常发生在肿瘤的最早期，印迹基因是一类受表观遗传调控的基因，正常情况下只有一条等位基因表达，另一条由于高度甲基化而处于沉默状态。肿瘤发生时，印迹基因处于沉默状态的一条等位基因发生去甲基化，开始表达，从而形成双等位基因表达状态。在快速生长的甲状腺肿瘤中，印迹基因还会发生拷贝数的增加，形成多等位基因表达的状态。本专利技术通过原位杂交技术使用识别nascent RNA的探针直接标记细胞核内印迹基因的表达位点，根据细胞核内表达位点数量对细胞核进行分类，分别统计不同分类的细胞比例，计算得到甲状腺结节的恶性风险分级，将该恶性风险分级与根据Kwak甲状腺影像报告及数据系统(K
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TI
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种通过超声和印迹基因检测联合鉴别甲状腺结节良恶性的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：(1)使用针对SNRPN基因和HM13基因的nascent RNA序列设计的探针，分别在甲状腺细胞样本中进行SNRPN和HM13基因的原位杂交；(2)显色后在显微镜下计数甲状腺细胞核，根据细胞核内的信号点的数量对细胞核进行分类，分别计算双等位基因表达(Biallelic Expression,BAE)、多等位基因表达(Multiallelic Expression,MAE)和总表达(Total Expression,TE)三个参数，公式如下：BAE＝(两个信号点的细胞核数量)/(一个信号点的细胞核数量+两个信号点的细胞核数量+三个或更多信号点的细胞核数量)；MAE＝(三个或更多信号点的细胞核数量)/(一个信号点的细胞核数量+两个信号点的细胞核数量+三个或更多信号点的细胞核数量)；TE＝(一个信号点的细胞核数量+两个信号点的细胞核数量+三个或更多信号点的细胞核数量)/细胞核总数量；其中，印迹基因恶性风险分级模型如下：SNRPN的TE小于20％计0分，大于或等于20％计1分；SNRPN的BAE小于20％计1分，在20％
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30％之间计2分，大于30％计3分；SNRPN的MAE小于3％计1分，在3％
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5.5％之间计2分，大于5.5％计3分；SNRPN基因的分值＝TE分值
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(BAE和MAE分值中的较大者)；HM13的TE小于11％计0分，大于或等于11％计1分；HM13的BAE小于20％计1分，在20％
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30％之间计2分，大于30％计3分；HM13的MAE小于3.5％计1分，在3.5％
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6.5％之间计2分，大于6.5％计3分；HM13基因的分值＝TE分值

【专利技术属性】
技术研发人员：徐辉雄，成彤，周宁，张一峰，李星，
申请(专利权)人：上海市第十人民医院，
类型：发明
国别省市：