用ＩＬ－１２ｐ４０　ｓｉＲＮＡ促进肝再生制造技术

本发明专利技术涉及ＩＬ－１２ｐ４０基因、ＩＬ－１２ｐ４０蛋白或其拮抗剂在制备促进肝再生用的药物中的用途。本发明专利技术还涉及基于所述ＩＬ－１２ｐ４０基因或蛋白而筛选用于促进肝再生的物质的方法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及肝再生领域。具体而言，本专利技术涉及用IL-12P40 siRNA促进肝再生。
技术介绍
人类和哺乳动物的肝脏在物理、化学、感染或缺血性损伤后具有很强的再生能力。 在某些条件下(如外科因肿瘤或移植手术切除部分肝脏或肝叶；移植一个小的供体肝脏到 一个大的受体；因化学药物、病毒等引起肝细胞破坏等)，肝脏的体积发生变化，触动肝脏 再生。自20世纪以来，肝脏疾病的发病率的逐渐攀升成为严重威胁人类健康的疾病之一。 我国各型肝病患者正在呈上升趋势，每年有近40万人死于肝脏疾病。目前，肝脏切除手术 已被许多医院广泛应用于治疗多种肝脏疾病。当部分肝脏切除后，肝脏面临着剩余肝脏功 能的代偿问题。剩余肝脏功能若能代偿，则会引起肝再生而逐渐康复。反之，则会走向急性 肝功能衰竭，导致患者死亡。研究表明对肝再生的人为诱导可能会提高肝切除导致的急性 肝衰竭患者的生存率和缩短其康复时间。如何有效地提高及促进肝脏再生、肝功能恢复成 为目前亟待解决的问题。研究肝再生最常用的动物模型是小鼠或大鼠的部分肝切除(约70%肝脏切除)模 型。在肝脏切除后的短短几分钟之内，肝细胞活化即被触动。在这一过程中，多种细胞因子、 生长因子等参与调节激酶的活化和转录因子的激活。评价肝再生的指标有肝脏重量的变 化、肝细胞有丝分裂指数等。到目前为止，诱导和促进肝脏再生的研究大多局限于动物研究 阶段，临床应用非常有限。因此，本领域仍需要对于肝再生有调节作用的药物靶点以及针对该靶点的药物。
技术实现思路
本专利技术一方面涉及IL_12p40基因或IL_12p40蛋白在制备促进肝再生用的物质中 的用途。在一优选实施例中，所述物质为所述IL_12p40蛋白的特异性抗体。在另一优选实施例中，所述物质为IL_12p40基因的拮抗剂。在一优选实施例中，所述拮抗剂为特异性干扰IL_12p40基因表达的siRNA。在一更优选实施例中，所述siRNA的正义链序列为CCAAGAACUUGCAGAUGAATT ；反义 链的序列为 UUCAUCUGCAAGUUCUUGGGC。在另一优选实施方式中，所述SiRNA的正义链序列为GGAAUUUGGUCCACUGAAATT ；反 义链的序列为 UUUCAGUGGACCAAAUUCCAT。在一优选实施例中，所述siRNA存在于表达盒中。在一优选实施例中，所述制备包括针对所述IL_12p40基因或IL_12p40蛋白筛选 其拮抗剂。在一优选实施例中，所述制备包括以下步骤(1)将所述候选物质与表达IL_12p40蛋白的体系接触；和(2)检测候选物质对IL_12p40蛋白的表达的影响；其中，若候选物质可抑制IL_12p40蛋白的表达、活性或分泌，则表明该物质是可 作为促进肝再生的所述物质。本专利技术另一方面涉及IL_12p40基因的拮抗剂或IL_12p40蛋白的拮抗剂在制备促 进肝再生用的药物中的用途。在一优选实施例中，所述IL_12p40基因的拮抗剂是siRNA。在一优选实施例中，所述siRNA的正义链序列为CCAAGAACUUGCAGAUGAATT ；反义链 的序列为 UUCAUCUGCAAGUUCUUGGGC。在一优选实施例中，所述siRNA存在于表达盒中。本专利技术又一方面涉及一种表达盒，该表达盒含有抑制IL_12p40基因表达的 SiRNA0在一优选实施例中，所述siRNA的正义链序列为CCAAGAACUUGCAGAUGAATT ；反义链 的序列为 UUCAUCUGCAAGUUCUUGGGC。在另一优选实施方式中，所述siRNA的正义链序列为GGAAUUUGGUCCACUGAAATT ；反 义链的序列为 UUUCAGUGGACCAAAUUCCAT。本专利技术另一方面涉及一种筛选用于促进肝再生用的潜在物质的方法，所述的方法 包括(1)将候选物质与表达IL_12p40蛋白的体系接触；(2)检测候选物质对IL_12p40蛋白的表达的影响；其中，若所述候选物质可抑制IL_12p40蛋白的表达、活性或分泌，则表明该候选 物质是可作为促进肝再生的潜在物质。在一个优选实施例中，所述步骤(1)包括在测试组中，将候选物质加入到表达 IL-12p40蛋白的体系中；和/或所述步骤(2)包括检测测试组的体系中IL-12p40蛋白的 表达或活性，并与对照组比较，其中所述的对照组是不添加所述候选物质的表达IL-12p40 蛋白的体系；如果测试组中IL-12p40蛋白的表达、活性或分泌在统计学上低于对照组，就 表明该候选物质是可用于促进肝再生的潜在物质。在一优选实施例中，所述的体系选自细胞体系、亚细胞体系、溶液体系、组织体 系、器官体系或动物体系。在另一优选实施例中，所述方法还包括对获得的潜在物质进行进一步的细胞实 验和/或动物试验，以从候选物质中进一步选择和确定对于促进肝再生有用的组合物。附图说明图1显示肝切后的不同时间点，IL_12p40在肝脏中的表达情况。C57BL/6小鼠(每 个时间点3-4只)，在第0天进行肝脏切除术(约70%肝脏切除)，以触动剩余肝脏再生。 在肝切后的第0小时、2小时、6小时、12小时、24小时、48小时和72小时，处死小鼠，取出小 鼠的肝脏抽取总蛋白。通过Western blot的方法检测IL_12p40的表达水平。所示数据代 表3次试验的结果。图2显示肝切后，IL-12p40-/_小鼠肝脏再生明显增加。对照组(C57BL/6)和实 验组(IL-12p40-/-)，每组9-10只小鼠，通过给小鼠在第0天进行肝脏切除术(约70%肝脏切除)，触动剩余肝脏再生。在肝切后的第24小时、48小时和72小时，称量小鼠体重后， 处死小鼠，取出小鼠的肝脏并称其重量。根据小鼠肝脏重量/小鼠的体重X 100计算每只 小鼠的肝脏与体重比率。所示数据代表3次试验的结果。图3显示肝切后，IL-12p40-/_小鼠肝细胞增殖明显增强。对照组(野生型)和 实验组(IL-12p40-/_)，每组9-10只小鼠，通过给小鼠在第0天进行肝脏切除术(约70% 肝脏切除)，触动剩余肝脏再生。在肝切后的第24小时、48小时和72小时，处死小鼠，取出 小鼠的肝脏。通过BrdU染色方法检测肝切后剩余肝脏中肝细胞的增殖情况。所示数据代 表3次试验的结果。图示为放大100倍的图。图4显示通过RNAi技术干扰IL_12p40表达后，小鼠肝脏再生明显上升。对照组 和实验组(IL-12p40siRNA)，每组3_4只小鼠，在第0天，给小鼠尾静脉注射2ml的阴性对照 siRNA或IL-12p40siRNA。48小时后，切除小鼠肝脏的70%，触动小鼠肝再生。肝切后48 小时，处死小鼠，按照图2所述的方法计算每只小鼠的肝脏与体重比率。图5显示，显示通过RNAi技术干扰IL_12p40表达后，小鼠肝脏再生明显上升。对 照组和实验组(IL-12p40siRNA)，每组3_4只小鼠，在第0天，给小鼠尾静脉注射2ml的阴性 对照siRNA或IL-12p40siRNA。48小时后，切除小鼠肝脏的70%，触动小鼠肝再生。肝切后 48小时，处死小鼠，按照图2所述的方法计算每只小鼠的肝脏与体重比率。具体实施例方式本专利技术利用肝再生的动物模型，证明了 IL_12p40亚基在肝切后不同时间点的表 达发生变化。利用IL本文档来自技高网...

【技术保护点】
ＩＬ－１２ｐ４０基因或ＩＬ－１２ｐ４０蛋白在制备促进肝再生用的物质中的用途。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：徐凌云，王莹，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]