一种判断待检茄子材料是否含有圆果基因的引物对及其应用制造技术

本申请属于生物分子检测及育种领域，具体涉及一种与茄子果实长圆形状基因紧密连锁的分子标记及其应用。一种扩增与茄子圆果基因紧密连锁的分子标记的引物对，技术特点是：所述引物对的核苷酸序列为：Sy

【技术实现步骤摘要】
一种判断待检茄子材料是否含有圆果基因的引物对及其应用


[0001]本申请属于生物分子检测及育种领域，具体涉及一种与茄子果实长圆形状基因紧密连锁的分子标记及其应用。

技术介绍

[0002]茄子（Solanummelongena）是亚洲及非洲等地区广泛种植的重要蔬菜作物，其种质资源丰富，具有丰富的果型多态性，是研究果实形状的理想材料。果实形状是园艺作物商品性的主要指标之一。明确茄子果实形状的遗传规律可为开发相关分子标记以及选育消费者喜欢的果形新品种提供依据。
[0003]茄子是世界种植广泛的茄科作物之一，2018 年全球总产量约为 5408 万吨，90%的茄子产自亚洲，中国和印度为主产国。果实形状属于数量性状，与质量性状不同，受微效多基因调控，遗传机制复杂，易受环境影响，表现型与基因型间没有明确的对应关系。不同品种茄子的果实形状存在高度变异，培育出消费者喜欢的果实形状新品种，是茄子育种的重要方向。因此，对控制果形性状的基因进行定位，了解其效应，对茄子的分子辅助选择育种具有重要的指导意义。
[0004]国内外学者在控制茄子果实长度基因的定位及连锁标记开发方面做了大量研究。
[0005]在控制茄子果实长度基因的定位方面，目前普遍将其作为数量性状来研究，有相关研究发现，控制茄子果实长度基因位于茄子的第3染色体上。
[0006]在连锁标记开发方面，国内外学者开发了许多与控制茄子果实长度基因连锁的分子标记，但在紧密连锁程度及适用性上存在改进空间。
[0007]分子标记辅助育种作为当前育种工作的重要辅助手段，其应用越来越广泛。利用分子标记技术缩短育种周期的关键是开发出高效的分子标记。
[0008]与目标性状紧密连锁并且稳定、检测方便快捷的分子标记，能够极大的提高育种中选择的准确性和效率，显著缩短育种周期。因此，开发高效的分子标记对于品种改良及新品种选育具有重要意义；引物是检测分子标记的基础，所以开发有效的引物，十分必要。

技术实现思路

[0009]1、一种扩增与茄子圆果基因紧密连锁的分子标记的引物对，技术特点是：所述引物对的核苷酸序列为：Sy
‑
1F：5'
‑
GGGCTTTTAAACATAGTACGTAGCT
‑
3'；Sy
‑
1R：5'
‑
CACTGGGTATGTTCGTGTTGTAGTA
‑
3'。
[0010]2、一种判断待检茄子材料是否含有圆果基因的判断方法，技术特点是：采用1所述的引物对，对待检茄子材料进行PCR扩增；如果PCR扩增产物含有大小为227bp且序列为Seq ID No.1所示的DNA序列片段，则证明待检茄子材料含有圆果基因。
[0011]3、一种判断待检茄子材料是否属于纯正长果茄子的判断方法，技术特点是：采用2所述的引物对，对待检茄子材料进行PCR扩增，如果PCR扩增产物含有232bp大小的片段且不
含有227bp大小的片段，且232bp片段的DNA序列为Seq ID No.2所示序列，则证明待检茄子材料不含圆果基因，属于纯正长果茄子。
[0012]有益效果：相对现有技术采用本专利技术的引物对对茄子是否具备圆果基因的检测结果更精准、更稳定、更可靠。
附图说明
[0013]图1、试验材料母本sm411(
♀
)、父本sm518(
♂
)及F1果形表型图2、Sy
‑
1在圆果自交系sm518，长果自交系sm411的扩增结果注：A：sm518；B：sm411。
[0014]图3是本专利技术验证试验的圆果茄子供试材料在田中的照片。
[0015]图4是本专利技术验证试验的长果茄子供试材料在田中的照片。
[0016]图5是本专利技术验证试验对Sy
‑
1的电泳结果；如图6是本专利技术验证实验20份茄子材料的果形与果形指数。
具体实施例
[0017]实施例1、一种待检茄子材料是否含有圆果基因的判断方法，技术特点是：对待检茄子材料进行基因型检测，模板为待检茄子材料的基因组DNA；正向引物为：Sy
‑
1F：5'
‑
GGGCTTTTAAACATAGTACGTAGCT
‑
3'；反向引物为：Sy
‑
1R：5'
‑
CACTGGGTATGTTCGTGTTGTAGTA
‑
3'；正向引物、反向引物，二者的浓度均为10uM/L；PCR反应体系：DNA工作液2μl、2xEs TaqMasterMix 5ul、正向引物1μl、反向引物1μl（10uM/L），用3μl ddH2O将总体积补齐至12μl；PCR扩增反应程序：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，56℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸5 min；将扩增产物用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色后观察照相；如果PCR扩增产物未含有大小为227bp的片段，则对大小为227bp的PCR扩增产物进行基因测序，如果PCR扩增产物的DNA序列为Seq ID No.1所示序列，则进一步证明待检茄子材料含有圆果基因。
[0018]实施例2、一种待检茄子材料是否属于纯正长果茄子的判断方法，技术特点是：对待检茄子材料进行基因型检测，模板为待检茄子材料的基因组DNA；正向引物为：Sy
‑
1F：5'
‑
GGGCTTTTAAACATAGTACGTAGCT
‑
3'；反向引物为：Sy
‑
1R：5'
‑
CACTGGGTATGTTCGTGTTGTAGTA
‑
3'；正向引物、反向引物，二者的浓度均为10uM/L；PCR反应体系：DNA工作液2μl、2xEs TaqMasterMix 5ul、正向引物1μl、反向引物1μl（10uM/L），用3μl ddH2O将总体积补齐至12μl；PCR扩增反应程序：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，56℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸5 min；将扩增产物用8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，硝酸银染色后观察照相；PCR扩增产物含有大小为232bp的片段且不含有大小为227bp的片段；
对大小为232bp的PCR扩增产物进行基因测序，如果PCR扩增产物的DNA序列为Seq ID No.2所示序列，则进一步证明待检茄子材料不含圆果基因，属于纯正长果茄子。
[0019]说明：以上实施例中，茄子基因组DNA的提取采用改良CTAB法。
[0020]具体实施例3、验证实验：分子标记Sy
‑
1的获得：分子标记Sy
‑
1为大小为5bp的缺失片段tatta，在茄子基因组3号染色体上，Sy
‑
1位于DNA序列gggcttttaaacatagtacgtagctttgaaatatctgctca本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种扩增与茄子圆果基因紧密连锁的分子标记的引物对，其特征在于：所述引物对的核苷酸序列为：Sy
‑
1F：5'
‑
GGGCTTTTAAACATAGTACGTAGCT
‑
3'；Sy
‑
1R：5'
‑
CACTGGGTATGTTCGTGTTGTAGTA
‑
3'。2.一种判断待检茄子材料是否含有圆果基因的判断方法，其特征在于：采用权利要求1...

【专利技术属性】
技术研发人员：王益奎，王鹏，甘桂云，杨其洪，李蝶，蔡梁玉，李文嘉，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院，
类型：发明
国别省市：